Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
19 октября 1979 г. N 2071-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАМИЦИНА А В ВОЗДУХЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим
средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
Настоящие Методические указания
распространяются на метод определения витамицина А в воздухе рабочей зоны при проведении
сельскохозяйственных работ.
1. Краткая характеристика препарата
Витамицин А -
соединение, образуемое актиномицетом оранжевой группы Act.
aureoverticillatus, относится к типу пиррил-дипиррил метеновых
соединений. Структурная формула (Хохлова и др., 1964 г.):
OCH R R
│ 3 │1
│2
┌┬─┬┐ ┌┬──┐ ┌───┐
││ ││ ││ │
│───│
││ ││ ││ │
│ │
\
/--\ /\ //\ //-R R + R +
R = C
H .
\ /
\ / \/ \//
3 1 2
3 11 23
N
N
CH N
│
H
Суммарная
формула: C H N O.
Молекулярная масса 393. Точка плавления
25 35 3
192 -
194°. По внешнему
виду витамицин А представляет
собой
оранжево-красные призматические кристаллы. Витамицин А хорошо растворим в
органических растворителях,
нерастворим в воде.
Витамицин А является
основным действующим началом препарата витамицина,
применяющегося для повышения продуктивности животных и птиц.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,001 мг/куб.
м.
2. Методика определения витамицина А в воздухе методом
тонкослойной хроматографии
2.1. Общие положения
2.1.1 Принцип метода.
Метод основан на хроматографировании
витамицина в тонком слое силикагеля в системе
хлороформ - метанол (9:1) после экстракции с фильтров АФА-ХП-18 или АФА-ВП-10
этиловым спиртом, упаривании досуха и растворении в хлороформе.
Зоны локализации обнаруживаются визуально
в виде розовых пятен.
2.1.2. Метрологическая характеристика
опыта.
Диапазон определяемых концентраций от 0,2
мкг/куб. м до 3 мг/куб. м.
Чувствительность определения - 0,01 мкг в
пятне.
Среднее значение определения стандартных
препаратов витамицина 85%. Стандартное отклонение -
8,5%. Относительное стандартное отклонение - 2,6%.
Вещества, входящие в состав препарата, не
мешают определению.
2.2. Реактивы и растворы
Этиловый спирт, ГОСТ 10749-64.
Хлороформ, х.ч.,
ГОСТ 3160-51.
Метанол, х.ч.,
ГОСТ 6995-67.
Ацетон, ГОСТ 2603-71.
Стандартный раствор витамицина А с содержанием 40 мкг/мл: 0,0020 г витамицина
А растворяют в хлороформе в мерной колбе емкостью 50 мл.
Рабочий раствор витамицина А с содержанием 4 мкг/мл: готовится из стандартного
раствора.
2.3. Приборы и посуда
Воронки делительные, ГОСТ 8613-64, на 50
мл.
Микропипетки, ГОСТ 1777-64.
Колбы грушевидные емкостью 25 мл, ГОСТ
10394-63.
Цилиндры мерные на 10 мл.
Палочки стеклянные.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 10565-63.
Хроматографические пластинки "Силуфол" производства
ЧССР.
Весы аналитические, тип АДВ-200 м.
Испаритель ротационный, ГОСТ 1911-59.
Фильтры АФА-ХП-18, АФА-ВП-10.
2.4. Ход анализа
2.4.1. Отбор проб воздуха.
Воздух протягивают со скоростью 10 л/мин.
через фильтр АФА-ХП-18 или АФА-ВП-10. Для анализа необходимо 50 л воздуха.
2.4.2. Экстракция витамицина
с фильтров.
Фильтр переносят в делительную воронку на
25 мл, заливают 5 мл этилового спирта и экстрагируют 10 минут. Экстракт сливают
в грушевидную колбу для отгонки, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр
промывают еще раз 5 мл этилового спирта. Экстракты объединяют, упаривают на
ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 - 1,0 мл
хлороформа и проводят хроматографическое определение витамицина.
2.4.3. Условия хроматографирования.
Разрезанную пластинку "Силуфол" размером 70 х 50 мм помещают в камеру,
насыщенную ацетоном, и дают подняться растворителю до конца пластинки. Затем
пластинку высушивают на воздухе.
На
промытую ацетоном пластинку наносят стандартные растворы витамицина
А в
количестве 0,04; 0,08; 0,16 мкг
(соответственно 10, 30, 40 мкл) и
растворы
анализируемого препарата 10 - 50 мкл. Пластинку помещают в камеру
для хроматографирования
с подвижным растворителем (хлороформ:метанол
9:1).
После подъема
фронта растворителя на
высоту 6 см хроматографирование
прекращают. Затем
пластинку вынимают и сушат на воздухе. Время разделения
10 -
15 мин. (R
= 0,35 -
0,38). О наличии
витамицина
в пробе
f
свидетельствует
появление на хроматограмме двух
розовых пятен. Содержание
витамицина А
определяют по нижнему
пятну, площадь пятна
определяют
денситометрически.
2.4.4. Обработка результатов анализа.
Расчет витамицина
производят по формуле:
С х S
х
Х = -------,
S х V
о о
где:
Х - содержание витамицина
в пробе в мг/куб. м;
С - количество витамицина
в стандарте в мкг;
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
х
S -
площадь пятна стандарта, кв. мм;
о
V
- объем пропущенного через
фильтр воздуха, приведенный
к
о
атмосферному
давлению 760 мм рт. ст. и 20 °С;
или:
А
Х = -,
V
где:
Х - содержание витамицина
в воздухе, мг/куб. м;
А - содержание в-ва
в пробе в мкг;
V - объем воздуха, отобранный для
анализа, в литрах.
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендованные для работы с органическими растворителями и бактериальными
препаратами.
4. Настоящие Методические указания
разработаны Е.Б. Кругляк, С.Г. Билуши (ВНИИбакпрепарат, Москва), Н.М. Кузенко (ВНИИгинтокс,
Киев).