Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
19 октября 1979 г. N 2082-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТАЗИНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ОВОЩАХ
И БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ
ХРОМАТОГРАФИИ
В ТОНКОМ СЛОЕ СОРБЕНТА
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемого пестицида
Метазин - 2-N-метил-N-цианамино-4,6-био-изопропиламино-сим-триазин.
-
CH -N-C-N
3 │ -
// \
// \
N N
│ ││
/\\ /\
C H -i-NH \\
/ NH-i-C H
3 7 N 3 7
C
H N . Мол.
масса 249,4.
11 19 7
Химически чистый препарат представляет
собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 112,5 - 115 °C.
Трудно растворим в воде (10 мг/л), хорошо в органических растворителях
(хлороформ, ацетон, гексан и др.). Технический
препарат метазина представляет собой смачивающийся
порошок, содержащий 50% действующего вещества.
Метазин малотоксичен для
теплокровных животных (для
крыс ЛД
50
составляет 1894
мг/кг).
Гербицид метазин
синтезирован в Армянском сельскохозяйственном институте и рекомендован для
применения в борьбе с однодольными и двудольными сорняками в посевах картофеля
и других овощных культур. ДОК в пищевых продуктах 0,05 мг/кг, ПДК в питьевой
воде 0,4 мг/л.
2. Методика
определения метазина в воде, почве, картофеле,
биологическом материале
методом тонкослойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении препарата из
исследуемой пробы органическими растворителями, очистке экстрактов соляной
кислотой и последующем хроматографировании в тонком
слое силикагеля. Подвижной фазой служит смесь н-гексана
с ацетоном или хлороформа с ацетоном. Пятна метазина
обнаруживаются на пластинке после проявления бромфеноловым
синим реактивом или раствором O-толидина после
N-галогенирования.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций 0,05 - 1
мг/кг. Предел обнаружения 1
мкг в
анализируемой пробе, что соответствует 0,05 мг/кг. Среднее значение
определения стандартных
количеств составляет 85%;
число параллельных
определений n
= 5; стандартное отклонение отдельного результата
сигма =
2,05; стандартное отклонение средней величины
сигма_ = 0,92; доверительный
х
интервал
среднего результата +/- 3% (85 +/- 3%).
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, х.ч.,
ГОСТ 2603-71.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Хлороформ, ч.д.а.,
ГОСТ 3160-51.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-68.
Силикагель КСК, ГОСТ 3956-76, ТУ
6-09-2523-72.
Кальций сернокислый, ч.д.а.,
ГОСТ 3210-66.
Соляная кислота, х.ч.,
ГОСТ 3118-67.
Едкий натр, х.ч.,
ГОСТ 4328-66.
Бромфеноловый синий водорастворимый, индикатор, ч.д.а.,
ТУ-09-3719-74.
Серебро азотнокислое, х.ч.,
ГОСТ 1277-75.
Лимонная кислота, х.ч.,
ГОСТ 3652-69.
O-толидин.
Калий йодистый.
Стандартный раствор метазина
х.с. в
хлороформе содержанием 100 мкг/л.
Вода дистиллированная.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Аппарат для встряхивания, ТУ
6421-1081-73.
Вытяжной шкаф химический.
Шкаф сушильный электрический
общелабораторного назначения, ТУ 16-531-299-71.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ
25-11-917-74.
Баня водяная, ТУ 46-22-608-75.
Камера для опрыскивания.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 10565-75.
Пульверизатор стеклянный.
Воронка делительная на 250 мл, ГОСТ
8613-75.
Воронки простые конусообразные с коротким
стеблем N 5, ГОСТ 8613-75, ТУ 25-11-1061-75.
Колбы лабораторные конические на 250 мл,
ГОСТ 10394-72.
Колбы лабораторные круглодонные короткогорлые на 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные со шлифом на 100 мл, ГОСТ
1770-74.
Пипетки с делениями на 10 мл, ГОСТ
20292-74.
Фильтры бумажные 11,0 см, ТУ
6-09-1678-72.
Пластинки стеклянные для нанесения
сорбента 9 х 12 см.
Пластинки для хроматографии "Силуфол" производства ЧССР.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление растворов
Приготовление стандартного раствора. 10
мг метазина, х.ч.,
растворяют в 100 мл хлороформа. Хранят в холодильнике в плотно закрытой
склянке. Срок хранения 3 месяца.
Приготовление 0,5 н раствора соляной
кислоты. 3,25 г/л концентрированной соляной кислоты (d = 1,1789 г/куб. см)
доводят в мерной колбе до 1 л дистиллированной водой. Раствор можно приготовить
из фиксанала. Хранить в прохладном месте.
Приготовление 0,5 н раствора едкого
натра. 20 г едкого натра растворяют в дистиллированной воде и доводят до 1 л. Рекомендуется
использовать свежеприготовленный раствор.
Приготовление проявляющих реактивов
1. а) Смесь равных объемов бромфенолового синего (0,4-процентный раствор в ацетоне) и
азотнокислого серебра (2-процентный водный раствор); б) 4-процентный водный раствор
лимонной кислоты.
2. 0,2 г o-толидина
растворяют в 2 мл уксусной кислоты; 0,8 г йодистого калия растворяют в 2 мл
дистиллированной воды, смешивают растворы и доводят водой до 200 мл. Получение
хлора - смешивают равные объемы 3-процентного перманганата калия и
12-процентный раствор соляной кислоты в четыреххлористом углероде, фильтруют
через бумажный фильтр и хранят в холодильнике.
Приготовление хроматографических
пластинок
Тщательно промытые содой, хромовой
смесью, дистиллированной водой и высушенные стеклянные пластинки протирают
этиловым спиртом или диэтиловым эфиром и покрывают
сорбционной массой, приготовленной из 35 г силикагеля КСК и 2 г гипса, 90 мл
воды дист. Силикагель предварительно очищают от
примесей. Для этого заливают на 18 - 20 часов разбавленной
соляной кислотой (1:1), кислоту сливают, промывают силикагель водой и кипятят 2
- 3 часа с разбавленной азотной кислотой (1:1), промывают проточной
водопроводной водой, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции
промывных вод, сушат в сушильном шкафу 4 - 6 часов при температуре 190 °C.
Силикагель дробят и просеивают через сито 100 меш. Хранят в склянке с притертой
пробкой. 10 г сорбционной массы равномерно распределяют по всей поверхности
пластинки путем ее покачивания. Сушат пластинки при комнатной температуре 18 -
20 часов. Хранят в эксикаторе.
Отбор пробы
Отбор пробы производится в соответствии с
"Правилами отбора проб при анализе пестицидов". Отобранные пробы
должны храниться в сухом, защищенном от света месте.
2.5. Описание
определения
2.5.1. Экстракция и очистка
Вода. 1 л анализируемой пробы помещают в
делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом по 50, 30, 30 мл.
Объединенный экстракт сливают через воронку с 5 - 7 г безводного сульфата
натрия в колбу ротационного испарителя и отгоняют хлороформ до объема 0,1 - 0,2
мл.
Картофель. 50 г вымытого и измельченного
картофеля помещают в колбу с притертой пробкой и заливают н-гексаном
до покрытия пробы, и оставляют на ночь. Затем пробу экстрагируют трижды гексаном порциями по 20 мл. Объединенный экстракт фильтруют
через воронку с безводным сернокислым натрием и отгоняют до объема 0,1 - 0,2
мл.
Почва. 100 г воздушно-сухой почвы,
просеянной через почвенное сито, заливают смесью н-гексан
- ацетон (1:1) до покрытия пробы. Растворитель отфильтровывают через 18 - 20
часов и пробу экстрагируют еще трижды этой смесью. Объединенные экстракты
фильтруют через воронку с безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель
до объема 0,1 - 0,2 мл.
Биологический материал. 1 - 5 г
биологического материала (печень, почки, легкие, селезенка, кровь, мышечная
ткань) тщательно растирают с безводным сернокислым натрием и экстрагируют метазин смесью гексан - ацетон
(1:1) трижды порциями по 10 мл, оставляя при этом каждый раз на 1 час,
периодически встряхивая. Экстракты органического растворителя соединяют, сушат
безводным сернокислым натрием и упаривают на водяной бане до небольшого
остатка. Остатку дают испариться досуха при комнатной температуре. Сухой
остаток переносят из колбы в делительную воронку, смывая его 4 раза небольшими
порциями 0,5 н соляной кислоты (общий объем 5 мл) через небольшой слой ваты.
Нейтрализуют кислоту 0,5 н раствором едкого натра (по индикаторной бумаге) и из
этого раствора экстрагируют препарат хлороформом (3 раза по 10 мл), насыщенным
водой. Экстракты сушат безводным сернокислым натрием, упаривают на ротационном
испарителе досуха.
2.5.2. Хроматографирование
Пробу и стандартные растворы наносят на
пластинку так, чтобы размер пятен не превышал 10 - 12 см. Центр пятна должен
находиться на расстоянии 15 мм от нижнего края пластинки. Нанесение проб на
пластинку производится с помощью пипеток с оттянутым концом или капилляров.
Стандартные растворы наносятся микропипеткой не менее трех (коэффициент
вариации равен 4,9% для нижнего предела). Пластинки с нанесенными пробами
помещают в хроматографическую камеру, представляющую
собой стеклянный сосуд с притертой пробкой, либо эксикатор. В качестве
подвижной фазы служит смесь растворителей гексан -
ацетон (10:3) либо хлороформ - ацетон (9:1). После того как фронт растворителя
поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько
минут на воздухе для полного испарения растворителя. Затем обрабатывают хроматограмму в камере с помощью пульверизатора проявляющим
реагентом 1 (см. п. 2.4.1), сначала раствором "а", пластинку
подсушивают и обрабатывают раствором "б". Проявитель 2 можно
применять при работе на пластинках с силикагелем КСК. На пластинках "Силуфол" метазин раствором
o-толидина не обнаруживается. Перед тем как
обрабатывать пластинки раствором o-толидина,
необходимо выдерживать их 1 - 2 минуты в атмосфере хлора, затем на воздухе
оставляют пластинку до удаления избытка хлора. После галогенирования пластинку
обрабатывают раствором o-толидина.
Метазин
обнаруживается на пластинках в виде синих пятен на светлом фоне
со следующими
величинами R :
f
┌─────────────────────────┬──────────────────────────────────────┐
│ Подвижная фаза │ Величина R │
│ │ f │
│ ├───────────────────┬──────────────────┤
│ │ Силикагель │
Силуфол
│
├─────────────────────────┼───────────────────┼──────────────────┤
│Гексан - ацетон 10:3
│0,3 +/- 0,03 │0,4
+/- 0,02 │
│Хлороформ
- ацетон 9:1 │0,56 +/- 0,02 │0,8 +/- 0,01 │
└─────────────────────────┴───────────────────┴──────────────────┘
Количество метазина
в пробе определяют сравнением площадей и интенсивности окраски пятен пробы и
стандартных растворов.
2.6. Обработка
результатов
Количественное определение метазина проводят путем сравнения измеренных площадей, а
также интенсивности окраски пятен стандарта с размером и интенсивностью пятна
пробы. Минимально детектируемое количество на хроматографической
пластинке 0,5 мкг при проявлении бромфеноловым синим
и 0,02 мкг - o-толидином.
Для определения содержания метазина в пробе используют следующую формулу:
5
10 х А
Д = -------,
а х R
где:
Д - содержание метазина
в пробе, мг/кг;
А - количество препарата в пробе,
найденное при сравнении со стандартом;
R - процент определения, найденный
предварительно;
а - количество анализируемой пробы, г.
3. Требования
безопасности
При определении остаточных количеств метазина необходимо соблюдать требования технической
безопасности при работе с ядовитыми, взрыво- и
огнеопасными веществами.
4. Авторы
Геворкян Спартак Гарникович,
Армянский филиал ВНИИТИНТОКС-а, г. Ереван;
Петросян Маргарита Суреновна,
Армянский филиал ВНИИТИНТОКС-а, г. Ереван;
Макарян Аида Шаваршовна, Армянский филиал
ВНИИТИНТОКС-а, г. Ереван.