Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2125-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИТРОХЛОРА И ПРЕФОРАНА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ
И ЭФИРОМАСЛИЧНОМ СЫРЬЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемых гербицидов
Нитрохлор - отечественный гербицид,
рекомендованный для борьбы с сорняками на шалфее мускатном.
Химическое название:
2',4'-дихлорфенил-4-нитрофениловый эфир.
Структурная формула:
___ Cl ___
--- ---
Cl/
\-O-/ \NO Мол. масса 284,1.
\\
// \\ //
3
C H Cl NO .
--- --- 12 7 2 3
Эмпирическая формула: C H O Cl N.
12 7 3 2
Физико-химические свойства:
светло-желтое кристаллическое вещество,
температура
плавления 70 - 71°. Растворимость в воде
при 25 °C - 0,8 мг/л.
Хорошо растворим
в ацетоне, бензоле, диоксане, четыреххлористом углероде,
хуже в спиртах.
ЛД для крыс - 3050 мг/кг.
50
Концентрат эмульсии с содержанием д.в.
нитрохлора 25% используется при внесении по вегетирующим растениям.
Префоран - гербицид фирмы Сиба-Гейги,
рекомендованный для борьбы с сорняками на шалфее мускатном.
Химическое название:
2,4'-динитро-4-трифторметил-дифениловый эфир.
Структурная формула:
NO
___
2 ___
--- ---
F C/
\-O-/ \NO Мол. масса 328,21.
3 \\
// \\ // 2
--- ---
Эмпирическая формула: C H O N F .
13 7 5 2 3
Физико-химические свойства:
светло-желтое
кристаллическое вещество,
температура
плавления 91,6 - 92,2
°C. Трудно растворяется в воде, хорошо
растворим в
ацетоне, бензоле, ксилоле, диметилформамиде, спирте. ЛД для
50
крыс - 10000
мг/кг.
Концентрат эмульсии с содержанием д.в.
префорана 30% используется при внесении по вегетирующим растениям.
2. Методика
определения нитрохлора и префорана
в эфирном масле и эфиромасличном сырье
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении нитрохлора и
префорана из растительного образца ацетоном с последующим перераспределением из
ацетоно-водной среды в н-гексан, очистке гексановых экстрактов растений и
растворов эфирного масла концентрированной серной кислотой и определении
методом ГЖХ с детектором постоянной скорости рекомбинации.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Предел обнаружения: нитрохлора - 0,1 мг,
префорана - 0,2 мг.
Предел обнаружения нитрохлора в шалфейном
масле - 0,01 мг/кг, в эфиромасличном сырье - 0,002 мг/кг.
Предел обнаружения префорана в шалфейном
масле - 0,02 мг/кг, в эфиромасличном сырье - 0,004 мг/кг.
Процент определения нитрохлора в
шалфейном масле - 80,4%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,88%.
Процент определения префорана в шалфейном
масле - 82,1%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,91%.
Процент определения нитрохлора в растении
шалфея мускатного - 75,7%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,72%.
Процент определения префорана в растении
шалфея мускатного - 78,3%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,53%.
2.1.3. Избирательность метода
Прочие рекомендованные на шалфее
пестициды - хлорофос, диурон, которан, прометрин - определению не мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
- Ацетон - х.ч.
- Гексан - х.ч.
- Серная кислота конц. - х.ч.
- Сульфат натрия безводный - х.ч.
- Азот особой чистоты (газ-носитель)
- Стандартные растворы препаратов в
ацетоне - 0,5 мкг/мл
- 5% силикона SE-30, нанесенного на
хроматон N-AW, силанизированный DMCS (0,16 - 0,20 мм)
- 5% силикона XE-60, нанесенного на
хроматон N-AW, силанизированный DMCS (0,16 - 0,20 мм).
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
- Хроматограф "Цвет-106" с
детектором постоянной скорости рекомбинации
- Микрошприц МШ-10 - 10 мкл
- Ротационный испаритель PVO-64 или
эквивалент
- Гомогенизатор - тип 302 либо эквивалент
- Аппарат для встряхивания - АВУ или
эквивалент.
Используется стандартная химическая
посуда из стекла (колбы Бунзена, Эрленмейера, воронки Бюхнера, химические и
делительные, пипетки и др.), выпускаемая отечественной промышленностью.
2.4. Подготовка к
определению
Органические растворители перед началом
работы необходимо очистить и перегнать, сульфат натрия прокалить при
температуре 300 - 400 °C. Хроматографическая колонка и детектор
кондиционируются в режимных условиях в течение 2 - 1 часов.
2.5. Ход анализа
2.5.1. Отбор образцов
Отбор проб на анализ производится в
соответствии с "Правилами отбора проб на анализ пестицидов". Отбирают
50 г свежесобранной зеленой массы и 1 г эфирного масла шалфея мускатного.
2.5.2. Проведение определения
2.5.2.1. Эфирное масло шалфея мускатного.
Навеску 10 г растворяют в 50 мл н-гексана. В делительной воронке емк. 250 мл
гексановый раствор промывают концентрированной серной кислотой 3 х 30 мл.
Верхний гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия в коническую
колбу емкостью 100 мл. Серную кислоту собирают в колбу емкостью 250 мл и через
1,5 - 2 часа снова отделяют гексановый слой, который присоединяют к основному
раствору. Объединенный гексановый раствор упаривают досуха на ротационном
испарителе при температуре бани 50 °C. К сухому остатку по стенкам колбы
прибавляют 1 мл н-гексана, закрывают и встряхивают колбу. В испаритель
хроматографа вводят 2 мкл раствора.
2.5.2.2. Эфиромасличное сырье шалфея
мускатного. Навеску 50 г гомогенизируют с 200 мл ацетона в гомогенизаторе в течение
15 - 20 мин. со скоростью 8000 об./мин.,
встряхивают 30 - 40 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу
емкостью 500 мл. Стакан гомогенизатора промывают 3 х 20 мл ацетоном и через
фильтр промывкой ацетон присоединяют к основному экстракту. Упаривают
ацетоновый экстракт на водяной бане при температуре 50 °C до 10 мл. Остаток
количественно переносят в делительную воронку емк. 500 мл, прибавляют 200 мл
дистиллированной воды и реэкстрагируют нитрохлор и префоран 3 х 30 мл
н-гексаном. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через безводный
сульфат натрия, и на делительной воронке промывают концентрированной серной
кислотой 3 х 30 мл. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному
для эфирного масла шалфея.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественный расчет препарата в
анализируемой навеске проводят по следующей формуле:
Н х V
1
Х = ------ х А,
K х V
2
где:
Х - количество препарата в пробе, мг/кг;
Н - высота пика препарата в анализируемой
пробе, мм;
V -
объем анализируемой пробы, мл;
1
V -
объем инъектируемой пробы, мкл;
2
А - навеска, г;
K
- калибровочный коэффициент,
который определяется по следующей
формуле:
Н Н Н
Н
1 1
2 3 4
K = - (---- + ---- + ---- +
----),
4 С V
С V С V С V
1 2
3 4
где:
Н ; Н ; Н ; Н - высота пиков стандартного раствора
препаратов, мм;
1
2 3 4
V ; V ; V
; V
- объемы стандартного раствора препаратов, вводимые в
1
2 3 4
хроматограф,
мкл;
С - концентрация стандартного раствора 0,5 мг/кг.
Содержание микроколичеств нитрохлора и
префорана в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.
УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ
┌────────────────────────────────────────┬───────────┬───────────┐
│ Колонка │ 5% SE-30 │ 5% XE-60 │
├────────────────────────────────────────┼───────────┼───────────┤
│Размер
колонки, мм │1000 х 3 │1000 х 3 │
│Материал
колонки │стекло │стекло │
│Форма
колонки │спираль │спираль │
│Расход
газа-носителя, мл/мин., через │60 │60 │
│колонку │ │ │
│На поддув детектора, мл/мин. │150 │150 │
│Температура,
°C: испарителя │200 │220 │
│ термостата колонок │200 │200 │
│ термостата детекторов │240 │240 │
│Хроматографируемый
объем, мкл │2 │2 │
│Время
удерживания нитрохлора, мин. │6,73 │11,75 │
│Время
удерживания префорана, мин. │5,33 │25,25 │
│Число
теоретических тарелок для │154 │552 │
│нитрохлора │ │ │
│Число
теоретических тарелок для │132 │564 │
│префорана │ │ │
│ВЭТТ
для нитрохлора │6,49 │1,81 │
│ВЭТТ
для префорана │7,58 │1,77 │
│Линейный
динамический диапазон для │0,1
- 5 │ │
│нитрохлора,
нг │ │ │
│Линейный
динамический диапазон для │0,2
- 1,2 │ │
│префорана,
нг │ │ │
└────────────────────────────────────────┴───────────┴───────────┘
2.7. Авторы
Методика разработана во ВНИИ
эфиромасличных культур старшим научным сотрудником лаборатории гербицидов
Барановым Ю.С., Брынзой Е.А. под руководством кандидата сельскохозяйственных
наук Хилик Л.А.