Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2127-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТЕРБАЦИЛА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ И ЭФИРОМАСЛИЧНОМ
СЫРЬЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемого гербицида
Химическое название:
5-хлор-3-трет-бутил-6-метил урацил.
Структурная формула:
O
││
C
/ \
(CH ) C-N C-Cl
3 3
│ ││
C
C-CH
//\ / 3
O
NH
Эмпирическая формула: C H O N Cl Мол.
масса 216,67.
9 13 2 2
Физико-химические свойства: белый кристаллический порошок, без
цвета и
запаха, температура плавления 184
°С, растворимость в воде - 7 мг/л при 25
°С, хорошо растворим
в диметилсульфоксиде, ацетонитриле, ксилоле,
циклогексаноне, хлороформе,
этилацетате. Малолетуч, давление
насыщенного
-7
пара при 29,5 °С - 4,8 х 10 мм
рт. ст. Способен к таутомерии, со щелочами
образует соли,
производные энольной формы. ЛД - 5 - 7,5 г/кг живого веса.
50
Смачивающий порошок тербацила
с содержанием 80% д.в. под торговым названием синбар
(фирма Дюпон и Немур, США) применяется для борьбы с
сорняками на плантациях мяты перечной до появления всходов и по вегетирующим
растениям.
2. Методика
определения тербацила в эфирных маслах
и эфиромасличном сырье методом
газожидкостной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении тербацила из гексанового раствора
эфирного масла 1% NaOH, а из растительного сырья -
хлороформом или ацетоном, очистке перераспределением между ацетонитрилом
и гексаном или между гексаном
и 1% NaOH, дополнительной очистке на колонке с окисью
алюминия. Идентификация и количественная оценка проводится на газовом
хроматографе с детектором постоянной скорости рекомбинации.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Предел обнаружения - 1 нг.
Предел обнаружения в эфирном масле - 0,1
мг/кг, в эфиромасличном сырье 0,05 мг/кг.
Процент определения тербацила
в мятном масле - 74,2%.
Стандартное отклонение при n = 9 - 2,5%.
Процент определения тербацила
в эфиромасличном сырье:
вариант "а" - 85,2%
вариант "б" - 77,4%.
Стандартное отклонение при n = 9
вариант "а" - 1,5%
вариант "б" - 2,4%.
2.1.3. Избирательность метода
Прочие рекомендованные на мяте перечной
пестициды: хлорофос, прометрин и трефлан
определению не мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
Стандартный раствор тербацила
в этилацетате - 1 - 10 мкг/мл, хранить на холоде не более 30 дней.
Ацетон, х.ч.
н-Гексан, х.ч.
Хлороформ, х.ч.
Этилацетат, х.ч.
1-процентный водный раствор едкого натра.
Кислота соляная конц.,
х.ч.
Сульфат натрия безводный, х.ч.
Газ-носитель, азот особой чистоты.
Вата гигроскопическая.
Окись алюминия: прокалить окись алюминия
(0,1 - 0,2 мм) при 130 °С в течение 5 часов, смочить 5
мл 0,1 н соляной кислоты стенки колбы емкостью 1000 мл и добавить в колбу 100 г
прокаленной окиси алюминия, встряхивать 30 - 40 мин.
Кислота соляная 0,1 н.
5% силикона SE-30, нанесенного на Хроматон N-AW, силанизированного
ДМСS (0,16 - 0,20 мм).
5% Stap,
нанесенного на Хроматон N-AW, силанизированного
ДМСS (0,16 - 0,20 мм).
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Газовый хроматограф "Цвет-106" с
детектором постоянной скорости рекомбинации.
Ротационный вакуумный испаритель PVO-64,
ИР-1М или эквивалентный.
Встряхиватель АВУ-1 или эквивалентный.
Микрошприц МШ-10.
Колонка хроматографическая:
стеклянную колонку 300 х 20 мм промывают последовательно содой, хромовой
смесью, дистиллированной водой и высушивают. Нижний конец колонки закрывают
тампоном из гигроскопической ваты, обезжиренной гексаном.
Колонка заполняется приготовленной окисью алюминия при непрерывном постукивании
по стенке резиновой трубкой. Высота слоя окиси алюминия - 50 мм, над окисью
алюминия помещают слой безводного сульфата натрия - 20 мм.
Используется стандартная химическая
посуда из стекла (колбы Бунзена и Эрленмейера,
воронки Бюхнера, химические и делительные, пипетки и
др.), выпускаемая отечественной промышленностью.
2.4. Подготовка к
определению
Органические растворители перед началом
работы необходимо очистить и перегнать, сульфат натрия прокалить при
температуре 300 - 400° и употреблять нагретым до 45 °С
(хранить при этой температуре в термошкафу). Хроматографическая колонка и детектор кондиционируются в
режимных условиях в течение 1 - 2 часов.
2.5. Ход анализа
2.5.1. Отбор образцов
Отбор проб на анализ производится в
соответствии с "Правилами отбора проб на анализ пестицидов". Отбирают
50 г свежесобранной зеленой массы и 10 г эфирного масла (мятного, лавандового,
шалфейного).
2.5.2. Проведение определения
2.5.2.1. Эфирные масла
Навеску эфирного масла растворяют в 50 мл
н-гексана. Гексановый
раствор переносят на делительную воронку емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл
1-процентного едкого натра и встряхивают две минуты, отделяют нижний слой.
Операцию повторяют еще два раза. Щелочные экстракты
объединяют, подкисляют 1,5 - 2 мл конц. соляной
кислоты до рН = 3 - 4, переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и
экстрагируют тербацил этилацетатом - 3 х 30 мл,
экстракты объединяют, пропускают через безводный сульфат натрия и упаривают до
5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 55 °С. Остаток в
колбе переносят на колонку с окисью алюминия, промытую
этилацетатом. После того как остаток полностью впитывается в слой адсорбента,
колбу снова смывают 5 мл этилацетата и переносят на колонку. Операцию повторяют
3 - 5 раз. Тербацил элюируют
60 мл этилацетата. Элюат упаривают на ротационном
испарителе при температуре бани 55 °С досуха. Колбу
смывают 1 мл этилацетата и 2 - 5 мкл вводят в
испаритель хроматографа.
2.5.2.2. Эфиромасличные растения
Вариант "а". Навеску измельчают
в гомогенизаторе со 150 мл хлороформа (6000 - 8000 об./мин.), встряхивают в течение 30 - 40 мин. и фильтруют под
вакуумом. Стакан гомогенизатора промывают хлороформом и присоединяют смыв к
основному фильтрату. Прибавляют в фильтрат 10 мл воды и упаривают хлороформ на
ротационном испарителе. Остаток (около 5 мл) количественно - 50 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку, прибавляют
25 мл н-гексана и встряхивают 1 мин. Отбрасывают гексановую фазу, операцию проделывают еще два раза. Ацетонитрил количественно переносят в отгонную колбу
емкостью 100 мл и упаривают досуха. Остаток растворяют в 50 мл 0,1 н едкого
натра и количественно переносят в делительную воронку емкостью 250 мл,
прибавляют 50 мл этилацетата и встряхивают 2 мин., органический слой отделяют и
пропускают через воронку с нагретым до 45 °С безводным
сульфатом натрия. Операцию повторяют три раза. Экстракты объединяют и упаривают
до 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на предварительно подготовленную
колонку с окисью алюминия. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному
для масел.
Вариант "б". Навеску свежего
сырья крупно измельчают и гомогенизируют со 150 мл ацетона, встряхивают в
течение 30 - 40 мин. и оставляют на ночь. Затем содержимое колбы фильтруют под
вакуумом, колбу промывают 30 мл ацетона и присоединяют смыв к основному
фильтрату, ацетоновый экстракт количественно переносят в отгонную колбу
емкостью 250 мл и упаривают ацетон на ротационном испарителе. Остаток в колбе
растворяют в 50 мл н-гексана, количественно переносят
на делительную воронку емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл 1-процентного едкого
натра и встряхивают в течение двух минут, отделяют щелочной слой, операцию
повторяют еще два раза. Щелочные экстракты объединяют, отфильтровывают.
Фильтрат количественно переносят на делительную воронку емкостью 250 мл,
подкисляют 1,5 - 2 мл конц. соляной кислоты до рН = 3
- 4, прибавляют 30 мл этилацетата и встряхивают в течение одной минуты.
Отделяют органический слой, операцию повторяют три раза. Экстракты объединяют,
пропускают через безводный сульфат натрия и переносят в отгонную колбу емкостью
250 мл, упаривают до 5 мл и переносят остаток на предварительно подготовленную
колонку с окисью алюминия. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному
для масел.
2.5.2.3. Условия хроматографического
разделения
┌────────────────────────────────────────┬───────────┬───────────┐
│ │
5% SE-30 │ 5% Stap │
├────────────────────────────────────────┼───────────┼───────────┤
│Размеры
колонки │1000
х 3 мм│1000 х 3 мм│
│Материал
колонки │стеклянная
│стеклянная │
│Форма
колонки │спиральная
│спиральная │
│Расход
газа носителя, мл/мин. │ │ │
│ через колонку │60 │60 │
│ на поддув
детектора │150 │150 │
│Температура:
испарителя │230 │230 │
│ термостата колонок │190 │190 │
│ термостата детекторов │220 │220 │
│Хроматографируемый объем, мкл │2 │2 │
│Время
удерживания, мин. │4,1 │12,5 │
│Число
теоретических тарелок │356 │812 │
│ВЭТТ │2,8 │1,23 │
│Линейный
динамический диапазон, мкг │1 -
60 │
└────────────────────────────────────────┴───────────────────────┘
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественный расчет препарата в
анализируемой навеске проводят по следующей формуле:
Н х V
1
Х = ----------,
К х V х А
2
где:
Х - количество препарата в пробе, мг/кг;
Н - высота пика препарата в анализируемой
пробе, мм;
V -
объем анализируемой пробы, мл;
1
V -
объем инъектируемой пробы, мкл;
2
А - навеска, г;
К - калибровочный
коэффициент.
Для расчета калибровочного коэффициента
проводят хроматографирование ряда стандартных
растворов. К рассчитывают по формуле:
Н Н Н
1 1
2 n
К = - [---- + ---- + ... +
----],
n С V
С V С V
1 2 n
где:
n - число введенных стандартных проб;
Н - высота пика стандартного раствора, мм;
С - концентрации стандартного раствора,
мкг/мл;
V
- объем, вводимый в хроматограф, мкл.
1-n
Содержание микроколичеств
тербацила в пробах вычисляют как среднее из трех
параллельных определений.
2.7. Авторы
Методика разработана во ВНИИ
эфиромасличных культур старшим научным сотрудником лаборатории гербицидов
Барановым Ю.С. под руководством доктора биологических наук Клисенко
М.А. и кандидата сельскохозяйственных наук Хилик Л.А.