Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2131-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ НЕ-166 В
ОГУРЦАХ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ И ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
НЕ-166 - рекомендуемый японской фирмой Nissho-Iwai Co. препарат в
качестве гербицида для борьбы с сорняками при тепличном выращивании огурцов.
Действующее начало препарата - 2,4-динитро-6-терт-бутилфенилметил сульфонат.
NO
---
2
O N//
\\OSO CH C H O N
S.
2 \ ___ / 2
3
11 14 7 2
---
Мол. масса 318,1.
│
CH -C-CH
3 │ 3
CH
3
НЕ-166 в чистом виде - кристаллы со
слабым ароматическим запахом, бесцветные. Т пл. 232,5 - 133,5 °С. Раствор
НЕ-166 в гексане имеет максимум светопоглощения
при 230 нм Е-450. Растворимость
НЕ-166 при комнатной температуре в 100 мл растворителя следующая: в диметилформамиде - 100 г, диоксане
- 57 г, ацетоне - 37 г, бензоле - 16 г, ксилоле - 6 г, этиловом эфире - 1,4 г,
метаноле - 0,7 г, н-бутиловом спирте - 0,15 г, изооктане - 0,02 г, н-гексане - 0,02 г, воде - 0,008 г. НЕ-166 стабилен на свету,
чувствителен к влаге, основаниям, кислотам. Гидролитически
разлагается до 2,4-динитро-6-терт-бутилфенола и метилсульфоновой
кислоты.
ПДК НЕ-166 в продуктах питания не установлена.
2. Методики
определения НЕ-166 в огурцах
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении НЕ-166 из
огурцов ацетоном, перераспределении его из ацетоно-водной
среды в хлороформ, доочистке экстракта микросублимацией
в вакууме с последующим определением методом ТСХ или фотометрическим методом в
виде продукта щелочного гидролиза (2,4-динитро-6-терт-бутилфенолята натрия) при лямбда 430 нм.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода.
Диапазон измеряемых концентраций
тонкослойной хроматографией 0,04 - 0,4 мг/кг, фотометрическим методом 0,2 - 3,2
мг/кг.
Предел обнаружения:
тонкослойной хроматографией 1 мкг
фотометрическим методом 5 мкг
Предел обнаружения:
тонкослойной хроматографией 0,04 мг/кг
фотометрическим методом 0,2 мг/кг
_
Среднее значение определения стандартных
количеств пестицидов о при n =
15: тонкослойной
хроматографией 80,0%
фотометрическим методом 91,8%
при содержании
НЕ-166 0,4 мг/кг и выше и 43,0% при содержании 0,2 мг/кг.
Стандартное отклонение S:
тонкослойной хроматографией +/- 13,6%
фотометрическим методом +/- 12,5%
Относительное стандартное отклонение S :
2
тонкослойной хроматографией +/- 17,0%
фотометрическим методом +/- 8,0%
Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5
тонкослойной хроматографией 80,0 +/- 17,5%
фотометрическим методом 91,8 +/- 16,1%
Размах варьирования R тонкослойной
хроматографией 70 - 90%
фотометрическим методом 71,5 - 112,0%
2.1.3. Избирательность метода.
Прочие пестициды, рекомендуемые для
обработки огурцов в тепличных условиях, в том числе карбофос,
трихлорметафос-3, кельтан, тедион,
немагон, купрозан, цинеб, беномил, ФДН, топсин-М, определению обоими методами не мешают. Акрекс и диносеб при определении
ТСХ не мешают, а фотометрическим методом могут определяться в сумме.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, ГОСТ 2603-71, чда.
Гексан, МРТУ 6-09-2937-66, чда.
Хлороформ, ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный
над P O .
2 5
Изооктан, ТУ 6-09-921-71, для
хроматографии.
Na SO , хч, безводный, ГОСТ 41-66-76.
2
4
NaOH, 6-процентный
раствор в C H OH, 5-процентный водный раствор по
2 5
ГОСТ 4328-66.
Стандартные растворы НЕ-166 в ацетоне с
содержанием 100 мкг/мл (раствор А) и 10 мкг/мл (раствор Б).
Для приготовления стандартного раствора А в мерную колбу емкостью 100 мл взвешивают 10 мг НЕ-166 с
точностью +/- 0,0002 г. Содержимое колбы растворяют в 20 мл ацетона, а затем
доводят до метки тем же растворителем.
Для приготовления раствора Б из раствора А пипеткой отбирают 10 мл, переносят в мерную
колбу емкостью 100 мл и доводят до метки ацетоном.
Растворы А и Б
при хранении в холодильнике стабильны в течение 2-х месяцев.
2.3. Приборы и
посуда
Спектрофотометр.
Аппарат для встряхивания.
Ротационный вакуумный испаритель.
Хроматографическая камера.
Пластинки "силуфол"
без УФ-добавки.
Колбы плоскодонные на 500 мл, ГОСТ
10394-72.
Делительные воронки на 1 л, ГОСТ
10054-75.
Микросублиматор.
Пульверизатор.
Мерные цилиндры на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Пробирки конические с пробками на шлифах
на 10 - 15 мл.
Пипетки, ГОСТ 1770-74.
Стеклянные капилляры.
2.4. Ход анализа
Измельченную навеску огурцов (25 г)
помешают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл ацетона и с помощью
механического встряхивателя проводят экстракцию
НЕ-166 в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную
воронку емкостью 1 л. Экстракцию ацетоном повторяют еще два раза тем же
количеством растворителя. К объединенному ацетоновому экстракту добавляют 300 мл
дистиллированной воды и экстрагируют НЕ-166 хлороформом порциями по 100 мл три
раза. Объединенный хлороформный экстракт сушат в течение 10 - 15 мин. над
безводным сульфатом натрия, после чего порциями переносят через бумажный фильтр
в круглодонную колбу на 100 мл и с помощью ротационного вакуумного испарителя
отгоняют растворитель. Последнюю порцию отгоняют до объема 2 - 3 мл. Остаток
количественно с помощью ацетона переносят в патрон сублиматора
и после удаления растворителя на горячей водяной бане проводят сублимацию
НЕ-166 в течение 30 мин. при температуре 100 °С и
давлении 0,3 мм рт. ст. После окончания сублимации смывают НЕ-166 с пальца сублиматора 8 - 10 мл ацетона в коническую пробирку
емкостью 10 - 15 мл. Далее определение проводят либо методом ТСХ, либо
фотометрическим методом.
2.4.1. Метод ТСХ.
Содержимое пробирки с помощью стеклянного
капилляра, заправленного в верхней части, упаривают на горячей водяной бане до
объема 0,2 - 0,3 мл. Остаток количественно с помощью того же капилляра, но с
отломанным запаянным концом наносят на пластинки "силуфол".
Параллельно на пластинку с помощью стеклянных капилляров наносят серию
стандартных растворов НЕ-166 с содержанием 1, 2, 3...1 мл. (Растворы наносят из
конических пробирок, куда предварительно вносят, а затем упаривают до такого же
объема 0,1; 0,2; 0,3...1,0 мл стандартного раствора Б.)
Хроматограмму развивают
либо в системе
гексан:ацетон (3:1),
либо
изооктан:ацетон (3:2).
После развития хроматограмму сушат,
а затем
обрабатывают из пульверизатора 6-процентным
спиртовым раствором NaOH.
НЕ-166 проявляется в виде желтых пятен на белом фоне
с R в первой системе
f
0,40 +/-
0,03 и 0,50
+/- 0,03 - во второй.
Количественное определение
проводят методом
соотношения со стандартом
по площади и интенсивности
пятна.
Содержание НЕ-166 в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
С
С = -, мг/кг,
НЕ-166 А
где:
С - количество НЕ-166, найденное в
анализируемой пробе по хроматограмме в мкг;
А - навеска огурцов в мг (25 мг).
2.4.2. Фотометрический метод.
Содержимое пробирки упаривают до объема 3
мл, к остатку пипеткой добавляют 3 мл 5-процентного водного раствора NaOH, пробирку плотно закрывают пробкой
и ее содержимое тщательно перемешивают. Вынимают пробку, через 10 - 15 мин.
после разделения слоев верхний, окрашенный в желтый цвет слой осторожно
переносят пипеткой с широким носиком в 1-сантиметровую кювету и фотометрируют раствор, используя в качестве раствора
сравнения холостую пробу на все реактивы и растворы, подвергнутые тем же
операциям, что и рабочая проба.
Содержание НЕ-166 в анализируемой пробе
вычисляют по формуле:
с
С = -, мг/кг,
НЕ-166 А
где:
с - количество НЕ-166, найденное в
исследуемой пробе по градуировочному графику;
А - навеска огурцов в мг (25 мг).
2.4.2.1. Построение градуировочного
графика.
Для построения градуировочного
графика отбирают в пробирки из стандартного раствора А
пипеткой 0,00; 0,05; 0,1; 0,2...0,8 мл, растворы упаривают досуха. К сухому
остатку пипеткой добавляют 3 мл ацетона и 3 мл 5-процентного водного раствора NaOH. Далее поступают так же, как описано для рабочей
пробы. Линейность сохраняется в пределах 5 - 80 мкг.
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать правила
безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и
ядовитыми веществами.
4. Авторы
Настоящая методика включает разработки
авторского коллектива ВНИИ химических средств защиты растений, г. Москва,
Новиковой К.Ф., Эйнисман Л.И., Алдошиной Т.В.