Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2133-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТИЛНИТРОФОСА, ФЕНИТРООКСОНА
И П-НИТРОКРЕЗОЛА В ЗЕРНЕ И ПРОДУКТАХ ПЕРЕРАБОТКИ ЗЕРНА
МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических,
контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других
министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и
биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика действующих веществ
Метилнитрофос - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-тиофосфат.
S --- CH
||
// \\ 3 C H O NPS
(CH O) P -O-\ ___ /NO 9 12 5
3
2 --- 2 Относ. мол. масса 277,2.
Синонимы: метатион,
сумитион, фенитротион, фолитион, польвадофос, вататион, динатион, новотион, препарат 56600, Байер 41813, агратион-20.
Химически
чистый продукт -
светлая жидкость со слабым неприятным
запахом. Т
95 °С при
0,1 мм рт. ст.; плотность 1,308;
коэффициент
кип.
-6
преломления -
1,5505; давление паров
при 20 °С
- 6 х 10 мм рт. ст.;
летучесть -
0,82 мг/куб. м при 20 °С; 2,33 мг/куб. м при 30 °С; 6,11
мг/куб. м
при 40 °С;
растворимость в воде
около 30 мг/л,
хорошо
растворяется в
большинстве органических растворителей.
Препарат гидролизуется
в щелочной среде (в 0,1 н NaOH при 30 °С период полураспада 12 мин.). При нагревании выше 100 °С изомеризуется и может
разлагаться со взрывом. Хранить препарат необходимо в эмалированной или
стеклянной таре, железо способствует разложению препарата. Выпускается в форме
30-процентного к.э. и 50-процентного к.э.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,1 мг/куб. м.
ДОК в полевых культурах утверждены 0,1 мг/кг. В настоящее время рекомендованы
ДОК в зерне 1 мг/кг, муке 0,3 мг/кг, хлебе 0,1 мг/кг.
Применяется в качестве контактного
инсектицида и акарицида для борьбы с вредителями овощных, технических, плодовых
культур, обработки незагруженных зернохранилищ, рекомендован
для обработки зерна.
Фенитрооксон - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-фосфат - токсический метаболит метилнитрофоса.
CH
O --- / 3
||
// \\ C H O NP
(CH O) P -O-\ ___ /-NO 9 12 6
3
2 --- 2 Относ.
мол. масса 261,1.
В чистом виде - светлая жидкость со
слабым неприятным запахом.
П-нитрокрезол -
3-метил-4-нитрофенол.
CH
--- /
3
// \\ C
H NO
HO-\ ___ /-NO 7 7 3
---
2 Мол. масса 153.
В чистом виде - кристаллическое вещество светло-желтого цвета,
Т 129
пл.
°С. Трудно
растворим в воде, хорошо - в эфире, этаноле.
2. Методика
определения метилнитрофоса и его метаболитов
(фенитрооксона, п-нитрокрезола) в зерне, муке, хлебе,
отрубях методом хроматографии в тонком слое
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод
основан на извлечении
метилнитрофоса
и его метаболитов
-
фенитрооксона и п-нитрокрезола из
зерна, муки, хлеба,
отрубей смесью
органических
растворителей (н-гексан - диэтиловый эфир 7:3),
спиртовой
очистке с
вымораживанием и определении их
методом хроматографии в тонком
слое с проявлением
по нитрогруппе. Чувствительность определения
метилнитрофоса
и фенитрооксона 2 мкг (0,1 мг/кг), п-нитрокрезола
0,1 мкг
(0,005 мг/кг).
Величина R метилнитрофоса,
фенитрооксона, п-нитрокрезола -
f
0,43 +/-
0,02; 0,24 +/- 0,03; 0,15 +/- 0,02 соответственно.
Определению
метилнитрофоса
мешает присутствие метафоса (R = 0,42).
Для идентификации
f
этих соединений
используется метод ГЖХ.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода:
Диапазон определяемых концентраций 2 - 50
мкг метилнитрофоса, фенитрооксона,
0,1 - 20 мкг п-нитрокрезола в анализируемой пробе.
Предел обнаружения метилнитрофоса
и фенитрооксона 2 мкг (0,1 мг/кг), п-нитрокрезола 0,1 мкг (0,005 мг/кг).
Размах варьирования для метилнитрофоса 65 - 90% в пределах концентрации 0,2 - 1
мг/кг (для хлеба 50 - 75% при концентрации 0,1 мг/кг); фенитрооксона
- 69 - 85% в пределах концентраций 0,2 - 1 мг/кг; п-нитрокрезола
- 79 - 87% в пределах концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг.
Среднее значение определения стандартных
количеств метилнитрофоса 72% (в хлебе 61%), фенитрооксона 75%, п-нитрокрезола
83%.
Стандартное отклонение для метилнитрофоса 9,6; фенитрооксона
- 8,2; п-нитрокрезола - 6,8.
Относительное стандартное отклонение для метилнитрофоса 0,13; фенитрооксона
- 0,11; п-нитрокрезола - 0,08.
Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5 для метилнитрофоса
72 +/- 11,4%; фенитрооксона 75 +/- 9,9%; п-нитрокрезола 83 +/- 8,2%.
2.1.3. Определению метилнитрофоса
может мешать метафос, имеющий
близкое
значение R
= 0,40 +/- 0,02. Для идентификации в этом случае
может быть
f
рекомендован
метод ГЖХ.
2.2. Реактивы и материалы
н-гексан, х.ч.
Диэтиловый эфир медицинский.
Ацетон, х.ч.
Этиловый спирт ректификат.
Натрий сернокислый безводный, х.ч.
Фильтры бумажные (красная лента).
Силикагель КСК, раздробленный и
просеянный через сито 100 меш.
Кальций сернокислый (CaSO х 2H O), прокаленный 6 часов при 160 °С.
4 2
Цинковая пыль.
П-диметиламинобензальдегид,
х.ч.
Уксусная кислота ледяная.
Проявляющий реактив: 0,25-процентный
раствор п-диметиламинобензальдегида в этаноле. Хранят
в темной склянке. Раствор перед обработкой пластинок смешивают в соотношении
10:1 с ледяной уксусной кислотой.
Стандартный
раствор: готовят основные стандартные растворы а) метилнитрофоса
500 мкг/мл (50 мг МНФ растворяют в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл); б) фенитрооксона 500 мкг/мл (50 мг - в ацетоне в 100 мл мерной
колбе); в) п-нитрокрезола 100 мкг/мл (10 мг - в
ацетоне в 100 мл мерной колбе). Из
основных стандартных растворов готовят рабочий раствор, содержащий по 100
мкг/мл метилнитрофоса и фенитрооксона
и 10 мкг/мл п-нитрокрезола (20 мл раствора
"а" + 20 мл раствора "б" + 10 мл раствора "в" вносят в мерную колбу
емкостью 100 мл и доводят до метки ацетоном).
2.3. Приборы, посуда, аппаратура
2.3.1. Для экстракции
Колбы конические плоскодонные с пробками
емкостью 250, 100 мл.
Воронки фильтровальные диаметром 5 см.
Ротационный испаритель с набором колб
емкостью 50 и 100 мл.
Колбы мерные емкостью 100 мл.
Пробирки мерные на шлифах емкостью 5 мл.
2.3.2. Для аналитического определения
Пластинки стеклянные размером 9 х 12 см.
Камера для хроматографирования.
Пульверизатор стеклянный.
Камера для опрыскивания.
Компрессор или баллон с азотом или сжатым
воздухом для равномерного мелкодисперсного опрыскивания пластинок.
Пипетки на 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл.
Микропипетки для нанесения стандартных
растворов на 0,1 - 0,2 мл.
Капилляры для нанесения проб.
Термостат СШ-35.
2.4. Подготовка к определению
Для приготовления 5 пластинок берут 14 г
силикагеля, 1,5 г сернокислого кальция, подготовленного как
описано выше, 1 г цинковой пыли и 40 мл воды. Силикагель с гипсом
смешивают в фарфоровой ступке, прибавляют цинковую пыль и воду и хорошо
размешивают до образования однородной массы. 10 г суспензии наносят на
пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Сушат пластинки строго в
горизонтальном положении в течение 13 - 20 часов при комнатной температуре,
хранят в эксикаторе.
2.5. Описание определения метилнитрофоса, фенитрооксона и
п-нитрокрезола в зерне, муке, отрубях, хлебе
2.5.1. Экстракция
Для проведения исследований отбирается
средняя проба зерна муки, хлеба, отрубей весом 1 кг. Из каждой пробы (хлеб
измельчают) для анализа методом квартования
отбирается три навески по 20 г (зерно по 50 г).
Пробу заливают 50 мл смеси н-гексан - диэтиловый эфир 7:3 и
оставляют на час, периодически встряхивая. Сливают растворитель через фильтр,
пробу заливают новой порцией экстрагента и
экстрагируют еще час. Объединяют обе порции экстракта, сушат безводным
сернокислым натрием в течение 15 мин. и переносят в прибор для отгонки
растворителей. Упаривают растворитель до объема ~ 1 мл под вакуумом на
ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °С,
т.к. летучесть метилнитрофоса резко увеличивается с
повышением температуры. Остатку растворителя дают испариться на воздухе при
комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 5 мл этанола и вымораживают
при 0 °С в течение 30 мин. Выпавшие хлопья
отфильтровывают через бумажный фильтр, раствор переносят в пробирку со шлифом
емкостью 5 мл, упаривают под вакуумом на ротационном испарителе до ~ 0,3 мл и
проводят определение методом хроматографии в тонком слое.
2.5.2. Хроматография в тонком слое
Остаток
из пробирки количественно
переносят на хроматографическую
пластинку, ополаскивая колбу эфиром. На эту же пластинку
наносят три пятна
рабочего стандартного
раствора в пределах 0,04 - 0,2
мл, т.е. 4 - 20 мкг
МНФ и фенитрооксона и 0,4 -
2 мкг п-нитрокрезола. Помещают пластинку в
камеру, в
которую за 30 мин. до хроматографирования налита
смесь н-гексан -
ацетон 4:1.
После того как
фронт растворителя поднимется
на 10 см,
пластинку вынимают
из камеры, дают растворителю
испариться и опрыскивают
пластинку проявляющим реактивом. Термостатируют
пластинку при 100 - 120 °С
в течение
5 - 7
мин. Метилнитрофос, фенитрооксон и п-нитрокрезол
проявляются в
виде желтых пятен
на белом фоне с
R 0,43; 0,24; 0,15
f
соответственно.
Чувствительность определения метилнитрофоса и фенитрооксона
2 мкг, п-нитрокрезола 0,1 мкг.
Количественное определение проводят путем
сравнения окраски и измерения площади пятна пробы с окраской и площадью
стандартов. Площадь пятен измеряемся с помощью промасленной миллиметровой
бумаги. Прямо пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации
соединений соблюдается до 20 мкг. При большем содержании пестицидов берут
аликвотную часть пробы.
2.6. Обработка результатов
Содержание каждого вещества в пробе
рассчитывают по формуле:
а х S
2
Х = ------,
S х р
1
где:
а - содержание препарата в стандарте, мкг;
S -
площадь пятна стандарта, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
р - масса пробы,
взятая для анализа.
2.7. Настоящие Методические указания
разработаны М.В. Письменной, ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных
и пластических масс, г. Киев.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.
4. Литература
Н.Н. Мельников Химия и технология
пестицидов. Изд. "Химия", М., 1974, с. 518.
М.А. Клисенко,
Т.А. Лебедева, З.Ф. Юркова Химический анализ микроколичеств ядохимикатов. Изд. "Медицина", М.,
1972, с. 67.