Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2142-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
В ВОДЕ, ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ТАБАЧНЫХ
ИЗДЕЛИЯХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
Данная методика апробирована и
рекомендована в качестве официальной группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Настоящие
Методические указания распространяются на определение содержания ДДТ, ДДЭ, ДДД,
гексохлорана, альдрина, кельтана, гептахлора, метоксихлора, дактала, тедиона и эфирсульфоната в воде,
почве, вине, овощах, фруктах, грибах, зерне, комбикормах, корнеклубнеплодах
и зеленых кормах, рыбе, мясе, мясопродуктах, внутренних органах, молоке и
молочных продуктах, животном жире, сливочном и растительных маслах, жмыхах,
шротах, лузге, меде, сахаре, яйцах и яйцепродуктах, а также в табачных
изделиях.
1. Характеристика анализируемых пестицидов
Краткая характеристика препаратов
представлена в табл. 1.
Таблица 1
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПЕСТИЦИДОВ
┌───┬────────────┬───────────────┬────────────┬──────┬──────────────┬──────────────┐
│ N │
Пестицид │ Химическое │Эмпирическая│ Мол. │Темп., град. C│Растворимость │
│п/п│ │ название
│ формула │масса ├───────┬──────┼─────┬────────┤
│ │ │ │ │ │плавле-│кип.,
│ в │ в орг. │
│ │ │ │ │ │ния │мм рт.│воде
│растворе│
│ │ │ │ │ │ │ ст. │
│ │
├───┼────────────┼───────────────┼────────────┼──────┼───────┼──────┼─────┼────────┤
│1. │Альдрин │1,2,3,4,10,10- │C12H8Cl6 │364,92│104 - │
│н │гексан, │
│ │ │гексахлор-1, │ │ │105 │
│ │бензол, │
│ │ │4-эндо-5, │ │ │ │ │ │ацетон, │
│ │ │8-экзо-димети- │ │ │
│ │ │спирты и│
│ │ │лен-1,4,4а,5,8,│ │ │ │ │ │др. │
│ │ │8а-гексагидро- │ │ │ │ │ │ │
│ │ │нафталин │ │ │
│ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│2. │Гексахлоран │1,2,3,4,5,6- │C6H6Cl6 │290,82│ │ │ │ │
│ │ │гексахлорцикло-│ │ │ │ │ │ │
│ │ │гексан │ │ │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│3. │Гексахлор- │1,2,3,4,5,6- │C6Cl6 │264,8 │231 │322 │тр-р │бензол,
│
│ │бензол │гексахлорбензол│ │ │ │ │ │спирты, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │четырех-│
│ │ │ │ │ │ │ │ │хлорист.│
│ │ │ │ │ │ │ │ │углерод,│
│ │ │ │ │ │ │ │ │керосин,│
│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│4. │Гептахлор │1,4,5,6,7,8- │C10H5Cl7 │373,5 │95 - 96│117 - │н │цикло- │
│ │ │гептахлор-4, │ │ │ │196 │
│гексан, │
│ │ │7-эндо-метилен-│ │ │ │(0,05)│ │ксилол, │
│ │ │3а,4,7,7а-тет- │ │ │ │ │ │четырех-│
│ │ │рагидроинден │ │ │ │
│ │хлор. │
│ │ │ │ │ │ │ │ │углерод,│
│ │ │ │ │ │ │ │ │керосин,│
│ │ │ │ │ │ │
│ │бензол │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│5. │п,п'
ДДД │4,4'-дихлорди- │C14H10Cl4 │320,0 │112 │
│н │ацетон, │
│ │ │фенилдихлорме- │ │ │ │ │ │бензол, │
│ │ │тилметан │ │ │ │ │ │гексан и│
│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│6. │п,п'
ДДТ │4,4'-дихлорди- │C14H9Cl5 │354,5 │108,5 -│185 │0,001│ацетон, │
│ │ │фенилтрихлорме-│ │ │109 │(1)
│ │бензол, │
│ │ │тилметан │ │ │ │ │ │гексан, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │спирты и│
│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│7. │п,п'
ДДЭ │4,4-дихлорди- │C14H9Cl4 │318,0 │ │ │0,014│ацетон, │
│ │ │фенилдихлорэти-│ │ │ │ │ │гексан, │
│ │ │лен │ │ │ │ │ │бензол │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│8. │Дактал │Диметилтетра- │C10H604Cl4 │332,0 │156 │
│ │ацетон, │
│ │ │хлортерефталат
│ │ │ │ │
│гексан,
│
│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │форм │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│9. │Кельтан │4,4'-дихлорди- │C14H9OCl5 │370,4 │78,5 - │225 │н
│толуол, │
│ │(Хлорэтанол)│фенилтрихлор- │ │ │79 │ │ │хлоро- │
│ │Кетан │метилкарбинол │ │ │ │ │ │форм, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │серный │
│ │ │ │ │ │ │ │
│эфир, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │гексан, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол, │
│ │ │ │ │ │ │ │
│спирты │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│10.│Метоксихлор │4,4'-диметокси-│C16H15O2Cl3
│345,65│70 - 85│ │тр-р │ацетон, │
│ │ │дифенилтрихлор-│ │ │ │ │
│четырех-│
│ │ │метилметан │ │ │ │ │ │хлорис- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │тый уг- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │лерод, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │форм, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол и│
│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│11.│Тедион │4-Хлорфенил- │C12H6O2Cl4S │356,07│146
- │ │0,02 │бензол, │
│ │ │2,4,5-трихлор- │ │ │147 │
│(56) │ксилол, │
│ │ │фенилсульфон │ │ │ │ │ │толуол, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │форм │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│12.│Эфирсульфо- │4-хлорфенил- │C12H8Cl2SO3 │303,06│86,5 │
│н │ацетон, │
│ │нат │4-хлорбензол │ │ │ │ │ │дихлор- │
│ │ │сульфонат │ │ │ │ │ │этан, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │ксилол, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │цикло- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │гексан, │
│ │ │ │ │ │ │ │ │четырех-│
│ │ │ │ │ │ │ │ │хлорис- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │тый уг- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │лерод │
└───┴────────────┴───────────────┴────────────┴──────┴───────┴──────┴─────┴────────┘
2.1. Принцип метода. Метод основан на
хроматографии хлорсодержащих пестицидов в тонком слое окиси алюминия,
силикагеля или пластинок "Силуфол" в
различных системах подвижных растворителей после экстракции их из исследуемых
образцов и очистке экстрактов. Подвижным растворителем служит н-гексан или н-гексан в смеси с
ацетоном. Места локализации препаратов обнаруживают после опрыскивания
пластинок раствором аммиаката серебра с последующим ультрафиолетовым облучением
или после облучения ультрафиолетовым светом пластинок "Силуфол",
содержащих о-толидин.
2.2. Метрологическая характеристика
метода
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 2.
Таблица 2
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
Диапазон определяемых концентраций 0,005
- 2,0 мг/кг или мг/л
┌─────────────┬──────┬──────┬──────┬───────┬──────┬───────┬──────┐
│Анализируемая│Предел│Число │Размах│Среднее│Стан- │Относи-│Дове- │
│ проба
│обна- │парал-│варьи-│значе- │дарт- │тельное│ри- │
│ │руже- │лель- │рова- │ние оп-│ное │стан-
│тель- │
│ │ния │ных │ния, %│ределе-│откло-│дартное│ный │
│ │мг/л │опре- │ │ния, % │нение,│откло- │интер-│
│ │или │деле- │ │ │% │нение, │вал │
│ │мг/кг │ний │ │ │ │% │ │
├─────────────┼──────┼──────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┤
│Вода │0,005 │7 │20 │93 │10 │10,7 │7,7
│
│Вино │0,005 │7 │25 │90 │12 │13,3 │9,0
│
│Овощи │0,05 │7
│20 │83 │12 │14,4 │9,0
│
│Фрукты │0,05 │6
│20 │81 │9 │11,1 │7,4
│
│Зерно │0,05 │7
│25 │75 │10 │13,3 │7,5
│
│Трава │0,025 │10 │30
│74 │12 │16,2 │7,6
│
│Рыба │0,05 │10
│24 │83 │12 │14,4 │7,6
│
│Мясо │0,05 │10
│30 │87 │15 │17,2 │9,5
│
│Животный
жир │0,04 │6 │26 │82 │12 │14,6 │9,9
│
│Молоко,
слив-│0,04 │13 │30
│86 │16 │18,6 │8,9
│
│ки, творог │ │ │ │ │ │ │ │
│Сливочное │0,05
│8 │30 │83 │17 │20,0 │12,0
│
│масло │ │ │ │ │ │ │ │
│Сахар │0,02 │6
│6 │97 │5 │5,1 │4,1
│
│Почва │0,06 │
│ │70 │9 │ │7,9 │
└─────────────┴──────┴──────┴──────┴───────┴──────┴───────┴──────┘
2.3. Реактивы и растворы
Ацетон хч, ГОСТ
2603-71
Аммиак водный хч,
ГОСТ 3760-64
Алюминия окись 2 ст. активности для
хроматографии, ч, МРТУ 6-09-5296-68. Просеивают через
сито 100 меш.
Алюминия окись, пропитанная серной
кислотой. Две весовые части окиси алюминия (или окиси кремния) помещают в
фарфоровую ступку, заливают одной объемной частью серной кислоты и тщательно
перемешивают. Смесь готовят непосредственно перед подготовкой колонок для
очистки экстрактов из проб шротов, жмыха, лузги
Бензол хч, ГОСТ
5955-68
Н-гексан ч,
МРТУ 6-09-2937-66
Калий щавелевокислый чда,
ГОСТ 5868-68
Кальций сернокислый чда,
ГОСТ 3210-66. Просушивают 6 часов в сушильном шкафу при 160 град. C. Просеивают
через сито 100 меш.
Кремния окись для люминофоров ч, МРТУ 6-09-4875-67
Натрий сернокислый безводный ч, ГОСТ 4166-66
Натрий углекислый кислый хч, ГОСТ 4201-66, 0,5 н. раствор
Натрий хлористый хч,
ГОСТ 4233-66, насыщенный раствор
Петролейный эфир (темп. кип. 40
- 70 град.)
Перекись водорода хч
(30% водный раствор), ГОСТ 10929-64
Проявляющие реактивы:
Проявляющий реактив N 1. 0,5 г
азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл
аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; в готовый раствор можно
добавить 0,2 мл перекиси водорода. Раствор следует хранить в колбе с притертой
пробкой в темном месте в течение 3-х дней. На пластинку 9 x 12 см расходуется 8
- 10 мл раствора.
Проявляющий реактив N 2. 0,5 г
азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл
2-феноксиэтанола и доводят объем раствора до 200 мл ацетоном, затем добавляют 6
капель 30-процентной перекиси водорода.
Серебро азотнокислое чда,
ГОСТ 1277-63
Серная кислота ч,
ГОСТ 4204-66
Силикагель АСК (Воскресенского
химкомбината Московской обл.)
Силикагель КСК, просеянный через сито 100
меш.
Стандартные образцы:
ДДТ, ДДД, ДДЭ, альдрин,
изомеры ГХЦГ, гептахлор, метоксихлор,
кельтан, эфирсульфонат, дактал, тедион хч.
Стандартные растворы: 10 мг соответствующего
пестицида растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане
и доводят до метки этим растворителем. Стандартные растворы необходимо хранить
в стеклянной посуде с притертыми пробками в холодильнике.
Стеклянная вата, очищенная конц. серной кислотой, промытая дистиллированной водой и
высушенная
о-Толидин ч,
МРТУ 6-09-6337-69, 1% раствор в ацетоне
2-феноксиэтанол
Этиловый спирт, ректификат, ТУ
19-11-39-69
Хлороформ хч,
ГОСТ 200-15-74
Четыреххлористый углерод хч, ГОСТ 20228-74
Этиловый эфир (для наркоза), Фармакопея
СССР
Натрий сернокислый, 2% водный раствор
Натрий сернокислый, насыщенный раствор
2.4. Приборы и посуда
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76
Вакуумно-ротационный испаритель, ИР ТУ
25-11-310-69 или прибор для отгонки растворителей, МРТУ 25-11-67-67
Воронки химические, диам.
6 см, ГОСТ 86-13-64
Воронки делительные, емкостью 100, 250,
500 мл, ГОСТ 10054-75
Воронки Бюхнера,
ГОСТ 9147-69
Гомогенизатор или измельчитель
тканей
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70
Камера для хроматографирования,
размером 150 x 200, 105 x 165 мм, ГОСТ 10565-63
Колбы Бунзена, ТУ 25-11-135-69
Колбы мерные, емкостью 50, 100 мл, ГОСТ
1770-74
Колбы нш,
емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63
Колбы круглодонные нш,
емкостью 150, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63
Микропипетки, ГОСТ 1770-74 (для нанесения
стандартных растворов)
Пипетки или шприцы для нанесения проб
Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ
1770-74
Прибор для встряхивания, МРТУ 2451-64
Пластинки стеклянные 9 x 12, 13 x 18 см
Пульверизаторы стеклянные для
опрыскивания пластинок
Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0,147
мм)
Стеклянные хроматографические
колонки (диаметр - высота), 20 x 400, 15 x 150
Ртутно-кварцевая лампа
Цилиндры мерные емкостью 25, 50, 100,
250, 500 мл, ГОСТ 1770-74
Чашки выпарительные N 3, N 1, ГОСТ
9147-69
Приготовление пластинок для хроматографии
Тщательно промытую хромовой смесью,
раствором соды, дистиллированной водой и высушенную пластинку протирают
этиловым спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой. Массу готовят
следующим образом:
а) 50 г просеянной через сито 100 меш. окиси алюминия смешивают в
фарфоровой ступке с 5 г сернокислого кальция, прибавляют 75 мл дистиллированной
воды и перемешивают в ступке или колбе до образования однородной массы. На пластинку
9 x 12 см наносят 10 г сорбционной массы (на пластинку 13 x 18 см - 20 г) и,
покачивая, равномерно распределяют по всей пластинке. Пластинки сушат при
комнатной температуре 18 - 20 часов, можно сушить их 20 минут при комнатной
температуре, а затем 45 минут в сушильном шкафу при температуре 110 град. C.
б) 35 г силикагеля КСК, просеянного через
сито 100 меш., смешивают с 2 г сернокислого кальция и
90 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до однородной
массы. Наносят на пластинки и сушат, как указано выше. Порция рассчитана на 10
пластинок.
Если пластинки с тонким слоем силикагеля
темнеют после облучения УФ-светом, силикагель перед
употреблением следует очистить от примесей. Для этого
силикагель заливают на 18 - 20 часов разбавленной соляной кислотой (1:1),
кислоту сливают, промывают силикагель водой и кипятят в круглодонной колбе 2 -
3 часа с разбавленной азотной кислотой (1:1), промывают проточной
водопроводной, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных
вод, сушат в сушильном шкафу 4 - 6 часов при температуре 130 град. Силикагель
дробят и просеивают через сито 100 меш.
Пластинки для хроматографии "Силуфол" UV-254 производства ЧССР перед использованием
импрегнируют о-толидином.
Для этого каждую пластинку опускают на 0,5 см в 0,1% раствор о-толидина в ацетоне, налитый в камеру для хроматографирования. После того как фронт растворителя
поднимется до верхнего края пластинки, ее вынимают и высушивают на воздухе,
избегая прямого солнечного света. После этого пластинки готовы к употреблению.
Пластинки, импрегнированные о-толидином, хранят в
эксикаторе. Используют при анализе кормов.
Пластинки "Силуфол"
UV-254 производства ЧССР предварительно промывают дистиллированной водой в хроматографической камере, высушивают на воздухе и
непосредственно перед использованием активизируют в сушильном шкафу при
температуре 65 град. в течение 4 минут.
Подготовка хроматографических
колонок для очистки экстрактов
Хроматографическая колонка для очистки от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки (размером 20 x 400 мм) помещают
стекловату или 500 мг обезжиренной ваты. Затем засыпают в колонку силикагель
АСК (75 мл для очистки экстрактов из проб свиного жира и 70 мл для всех
остальных проб) и уплотняют силикагель постукиванием по колонке. Колонку
промывают 50 мл н-гексана или петролейного
эфира, и прошедший через нее растворитель отбрасывают. После этого колонка
готова для хроматографической очистки экстрактов из
проб рыбы, мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, меда, яиц и т.д.
Хроматографическая колонка для очистки экстрактов из проб шротов (необогащенных
липидами) и лузги.
Хроматографическую колонку заполняют на высоту 1 см стеклянной ватой, затем в колонку
вносят просеянную окись алюминия (I) слоем 2,5 см или окись кремния - 3,5 см.
Далее засыпают, не утрамбовывая, комочки окиси алюминия (кремния), пропитанные
серной кислотой, высота слоя (II) 2,5 см. Каждый слой последовательно промывают
гексаном (всего 20 - 30 мл).
Для анализа жмыхов и шротов, обогащенных
липидами, слои окиси алюминия следует увеличить до 5 см (I) и 3 см (II)
соответственно, в случае использования окиси кремния - 6 см (I) и 3 см (II).
2.5. Проведение определения
Вода, вино. 200 мл пробы помещают в
делительную воронку и экстрагируют пестициды, встряхивая в течение 3-х минут н-гексаном или петролейным эфиром
тремя порциями по 30 мл или диэтиловым эфиром тремя
порциями по 50 мл. В объединенные экстракты насыпают 10 г безводного
сернокислого натрия или фильтруют через воронку, заполненную на 2/3 сернокислым
натрием. Экстракты переносят в прибор для отгонки растворителей и отгоняют
растворитель до объема 0,2 - 0,3 мл. В случае необходимости экстракт чистят
серной кислотой.
Овощи, фрукты. 20 г измельченной пробы
помещают в колбу с притертой пробкой и проводят экстрагирование пестицидов
трижды в течение 15 минут на аппарате для встряхивания н-гексаном
или петролейным эфиром порциями по 30 мл.
Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием, переносят в прибор
для отгонки растворителей, отгоняют растворитель до объема 0,2 - 0,3 мл и
наносят на пластинку.
Зерно, грибы. Из измельченных проб
отбирают 20 г зерна, 50 г сырых или 10 г сухих грибов и помещают в колбы с
притертыми пробками. Экстракцию пестицидов проводят трижды на приборе для
встряхивания н-гексаном или петролейным
эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты переносят в делительную
воронку, прибавляют 10 мл насыщенного раствора безводного сернокислого натрия в
серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой
и повторяют обработку до тех пор, пока кислота не станет бесцветной. Экстракт
промывают дистиллированной водой, сушат безводным сернокислым натрием и
отгоняют растворитель.
Яблоки, капуста, трава, сено. 20 г
измельченных яблок, 20 г капусты, 40 г травы и 20 г сена заливают 100 мл
ацетона в колбе с притертой пробкой. Встряхивают 2 - 3 минуты, прибавляют 20 мл
дистиллированной воды и охлаждают на льду 30 минут. Экстракт сливают и
фильтруют холодным, экстракцию повторяют. Из объединенных водно-ацетоновых экстрактов
отгоняют ацетон, а из водного остатка экстрагируют препараты н-гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 10 минут. Гексановые экстракты очищают серной кислотой, насыщенной
безводным сернокислым натрием. Сушат безводным сернокислым натрием. Отгоняют
растворитель до небольшого объема и наносят на пластинку. Если очистка неполная
(после испарения растворителя на колбе остается белый налет), экстракт испаряют
досуха, остаток смывают холодным ацетоном 3 раза порциями по 0,2 мл и сразу
наносят на пластинку.
Комбикорма. Для исследования берут
навеску 40 г, увлажняют ее в колбе 60 мл дистиллированной воды. Увлажненную
навеску оставляют на ночь в колбе, закрытой пробкой. Экстракцию пестицидов
проводят дважды 50 - 100 мл смеси гексан - ацетон 1:1
при встряхивании в течение 2 часов. Экстракты объединяют в делительной воронке
на 500 мл, прибавляют дважды по 50 мл дистиллированной воды и, после разделения
слоев, нижний водный слой сливают в другую делительную воронку и экстрагируют
пестициды 40 мл гексана. Водный слой сливают. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через воронку с
бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием. Экстракты
упаривают на ротационном испарителе до объема 20 - 30 мл или досуха, растворяя
затем сухой остаток в 20 - 30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракт переносят в делительную
воронку и производят очистку серной кислотой, как описано выше.
Шрот, лузга, жмых. Навески: 15 г
обогащенного липидами шрота или жмыха; 20 г не
обогащенного липидами шрота или лузги делят на равные части и помещают в колбы
емкостью 100 - 250 мл с притертыми пробками, заливают гексаном
(три объема гексана на одну весовую часть шрота),
встряхивают на приборе для встряхивания 30 минут. Экстракт фильтруют через
воронку Бюхнера, не перенося осадок на воронку. В
колбу повторно заливают указанное количество гексана,
встряхивают 30 минут, фильтруют, количественно переносят осадок на воронку Бюхнера с помощью 30 мл гексана
(3 раза по 10 мл). Полученный экстракт выпаривают до 30 мл на ротационном
испарителе или в токе воздуха при температуре не выше 40 град., остаток делят
на две равные части и помещают в морозильную камеру холодильника на 1 час (не
менее). Каждую часть пропускают через отдельную колонку с окисью алюминия со
скоростью 2 мл/минуту, промывают колбу и колонку 50 мл охлажденной смеси
этилового эфира с гексаном (15:85). Эту операцию
необходимо проводить без перерыва, не оставляя на следующий день. Очищенные
экстракты объединяют и упаривают до объема 1 мл. Остаток из колбы переносят количественно
микропипеткой с помощью резиновой груши в пробирку на 1 мл, колбу и
микропипетку 2 - 3 раза промывают небольшим количеством гексана
(всего 0,3 - 0,5 мл), сливая его в ту же пробирку. Затем осторожно выпаривают гексан из пробирки на водяной бане при температуре 50°
почти досуха (конечный объем приблизительно 2 - 3 капли). Если общий объем
экстракта и промывной жидкости превышает 1 мл, то сначала выпаривают экстракт,
постепенно прибавляя к нему промывную жидкость. При наличии в упаренном
экстракте белого мазеобразного осадка в пробирку добавляют 5 - 6 капель гексана и помещают ее на 15 - 20 минут в морозильную камеру
холодильника, затем деканируют дважды таким же
количеством гексана и снова упаривают до конечного
объема 2 - 3 капли.
Параллельно с исследуемыми образцами
готовят два модельных экстракта. Каждый экстракт получают из одного грамма
шрота, не содержащего пестицидов (соотношение сухого вещества и пестицида то
же, что и в исследуемых образцах). В один из экстрактов перед очисткой на
колонках вносят микрошприцем (микропипеткой)
определяемые пестициды в количестве 3 мкг, в другой - 0,75 мкг. Упаренные
исследуемые и модельные экстракты с помощью микропипетки или микрошприца количественно наносят на пластинку, трижды
смывая пробирку небольшим количеством гексана.
Рыба, мясо и мясопродукты. Мясо,
мясопродукты пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи, внутренних
органов и тоже пропускают через мясорубку. 20 г пробы перемешивают с безводным
сернокислым натрием и помещают в колбу с притертой пробкой. Пестициды
экстрагируют дважды смесью гексан - ацетон или петролейный эфир - ацетон в соотношении 1:1 порциями по 50
мл в течение 1,5 часов при встряхивании. Экстракт фильтруют через воронку с
бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием, затем
растворитель отгоняют, сухой остаток растворяют в 20 мл н-гексана
и вносят его в колонку с силикагелем АСК. После впитывания экстракта в сорбент
пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250
- 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент
отжимают с помощью груши. Элюат отгоняют до объема
0,1 мл и наносят на хроматографическую пластинку.
В том случае, если пробы мяса или рыбы
содержат большое количество жира, после испарения первого экстрагента
(смеси ацетона с гексаном) и растворения сухого
остатка в гексане следует провести очистку гексанового экстракта серной кислотой, а затем колоночную
очистку, как описано выше.
Животный жир, яйца, яичный порошок. Жир
измельчают на мясорубке, яичный порошок тщательно перемешивают, яйца - отделяют
желток от белка, взвешивают желток и белок, а для анализа берут только желток.
Конечный результат о содержании хлорорганических пестицидов в яйце приводят на
все яйцо. Желток тщательно перемешивают.
25 г подготовленного образца заливают 50
мл ацетона, перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до закипания
растворителя. Колбу охлаждают, добавляют в нее 10 мл охлажденного 2% раствора
сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 45 минут на ледяной бане. Затем
сливают ацетоновый слой в круглодонную колбу через слой обезжиренной ваты.
Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют еще два раза.
Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на ротационном испарителе или в
приборе для отгонки растворителей (температура бани не более 70 град. +/- 2
град.) и трижды экстрагируют петролейным эфиром
порциями 20, 10 и 10 мл. Продолжительность первой экстракции 1 час, последующих
- 15 минут. Петролейный эфир переносят в делительную
воронку с 40 мл 2% водного раствора сернокислого натрия, перемешивают
содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и водную фазу
отбрасывают. Для улучшения разделения слоев можно добавить несколько мл
насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют
еще два раза, после чего петролейный эфир сливают в
стакан с 20 г безводного сернокислого натрия, споласкивают делительную воронку
дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушенный экстракт
количественно переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят объем раствора петролейным эфиром до 30 мл. Далее наносят 30 мл экстракта
в колонку с силикагелем АСК, как указано выше. Для проб свиного жира насыпают
75 мл силикагеля АСК, для всех остальных проб - 70 мл. Очистку экстрактов
проводят, как описано для проб мяса. Элюат собирают в
круглодонную колбу на 150 мл, растворитель упаривают до объема нескольких
капель и наносят на хроматографическую пластинку.
Мед. 30 г меда смешивают с 3 г безводного
сернокислого натрия и трижды экстрагируют пестициды гексаном
порциями по 30 мл каждый раз по 15 минут, тщательно растирая мед стеклянной
палочкой в узком химическом стакане. Экстракты объединяют и отгоняют гексан до объема 30 мл или до меньшего объема, далее доводя
экстракт до 30 мл гексаном. 30 мл экстракта вносят в хроматографическую колонку с силикагелем АСК и проводят
очистку экстракта и испарение растворителя, как описано выше.
Сахар. Из навески 50 г сахара,
предварительно растворенного в воде, пестициды экстрагируют в делительной
воронке на 250 мл н-гексаном. Экстракцию пестицидов
проводят трижды по 50, 25 и 25 мл растворителя каждый раз встряхивая по 5
минут. Объединенные гексановые экстракты очищают от коэкстрактивных веществ (красящие, аминокислоты, липиды)
сернокислотным способом.
Молоко и молочные продукты. Для
подготовки проб можно использовать один из приведенных способов.
Первый способ. Сливки, сметана, молоко и
др. цельномолочные продукты. Для анализа берут 20 г сливок и сметаны,
предварительно разведенных равным объемом дистиллированной воды, 50 мл молока,
кефира и т.п., прибавляют концентрированную серную кислоту (30 - 40 мл) до
полного почернения пробы. Охлажденный до 10 - 15 град. раствор переносят в
делительную воронку и экстрагируют препараты гексаном
2 раза порциями по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты,
затем оставляют ее на 30 минут до полного разделения слоев. Если образуется
эмульсия, прибавляют 1 - 2 мл этилового спирта. К объединенным экстрактам в
делительной воронке прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты,
насыщенной сернокислым натрием, и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку
продолжают до получения бесцветной серной кислоты.
Творог, сыр. 50 г творога или 10 г
измельченного на терке сыра заливают 40 мл гексана
или петролейного эфира, непрерывно встряхивают 2 - 3
минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты в
делительной воронке очищают серной кислотой, как указано выше.
Второй способ. Молоко, кефир, простокваша,
кумыс и другие цельномолочные продукты. 25 мл продукта помещают в делительную
воронку на 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного
раствора хлористого натрия, перемешивают, приливают 100 мл ацетона, встряхивают
2 минуты. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до
полного разделения слоев. Верхнюю фазу отбрасывают, а нижнюю выливают в
круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30
мл гексана.
Сгущенное молоко, 10 - 20% сливки. К 10 г
продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и выливают в
делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона,
встряхивают 2 минуты, приливают 60 мл хлороформа, встряхивают 2 - 3 минуты и
оставляют до разделения фаз. Далее поступают, как при определении пестицидов в
молоке.
Сгущенные молочные продукты. 10 г
продукта помещают в стаканчик, заливают 10 мл воды с температурой 45 - 50 град.
C, перемешивают и переносят в делительную воронку на 150 мл, добавляют 5 мл
щавелевокислого калия. Содержимое воронки перемешивают, приливают 80 мл ацетона
и встряхивают 2 - 3 минуты. Добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5 - 7
минут. После разделения фаз нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу,
растворители отгоняют, а сухой остаток растворяют в 30 мл петролейного
эфира.
Сухие молочные продукты. 3 г сухих
молочных продуктов (сливок 2 г) высыпают в стаканчик, приливают 15 мл
дистиллированной воды с температурой 40 - 45 град. C, размешивают и переносят в
делительную воронку вместимостью 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого
калия и насыщенного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки
перемешивают, добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3 - 5 минут, приливают 100
мл хлороформа, встряхивают 5 минут и оставляют на 3 - 5 минут (до разделения
фаз). Нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворитель отгоняют, а
остаток смывают 30 мл гексана.
Сметана, 30 - 40% сливки. 5 г продукта
отвешивают в стаканчик, приливают 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия
и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл
ацетона, смывы переносят в делительную воронку, которую встряхивают 2 - 3
минуты, добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют на
несколько минут до разделения фаз, нижнюю фазу сливают в колбу для отгонки
растворителей, растворитель отгоняют, а остаток смывают 30 мл гексана.
Творог, сыр. 10 г творога или
измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора хлористого
натрия и переносят в делительную воронку на 250 - 300 мл. Прибавляют 80 мл
ацетона, встряхивают 2 минуты, приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают.
Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей, растворив
остаток в 30 мл гексана.
Далее проводят очистку экстрактов из проб
молока и молочных продуктов от молочного жира, подготовленных по второму
способу. Для этого 30 мл экстракта наносят в колонку с 70 мл силикагеля АСК.
После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют
110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8
порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную
колбу на 250 - 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции
растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки
растворители отгоняют под вакуумом.
Сливочное масло. 20 г сливочного масла
растапливают на водяной бане в круглодонной колбе, прибавляют 50 мл ацетона,
тщательно перемешивают до растворения жира, прибавляют 10 мл ледяной
дистиллированной воды и охлаждают на льду до затвердевания жира (примерно 30
минут). Сливают ацетоновый экстракт, и процедуру повторяют еще 2 раза. Из
объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане.
Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта гексаном
тремя порциями по 10 мл в течение 5 минут. Объединенные гексановые
экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым
натрием. Очищенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием и упаривают.
Почва. К навескам воздушно-сухой почвы
(10 г), помещенным в конические колбы емкостью 250 мл, приливают 10 мл
1-процентного водного раствора хлористого аммония и оставляют на сутки
закрытыми. Затем приливают смесь 30 мл ацетона и 30 мл гексана
и встряхивают колбы в течение часа на встряхивающем устройстве. Содержимое колб
переносят в центрифужные пробирки. После
центрифугирования жидкую часть сливают в конические колбы, почву с помощью 10
мл 1-процентного раствора хлористого аммония и 30 мл ацетона переносят в
исходные конические колбы, добавляют 30 мл гексана и
проводят экстракцию еще в течение 30 минут. Затем экстракты объединяют. К
объединенным экстрактам в делительной воронке приливают 180 мл дистиллированной
воды, осторожно встряхивают в течение 5 - 7 минут, дают жидкостям расслоиться и
нижний водный слой сливают в коническую колбу. Гексановый
слой пропускают через безводный сульфат натрия (столовая ложка или 30 - 40 г
сульфата натрия).
Из водно-ацетонового слоя экстракцию
пестицидов проводят еще дважды 15 и 10 мл гексана,
который затем сушат через тот же сульфат натрия. Гексановые
экстракты объединяют.
Концентрирование экстрактов проводят либо
на ротационно-вакуумном испарителе, либо при температуре бани не более 40 град.
C и времени отгонки 9 - 11 минут, либо из колбочек с г-образным отводом при
температуре водяной бани 72 - 75 град. C.
Очистку сконцентрированных гексановых экстрактов из проб почв проводят серной
кислотой, как описано выше для других проб, и испаряют растворитель.
Табак и табачные изделия. 5 г табака
помещают в стеклянный стакан на 500 мл, заливают 50 мл концентрированной серной
кислоты и стеклянной палочкой тщательно размешивают до полного равномерного
обугливания пробы. Спустя 10 - 15 минут в колбу добавляют 25 мл гексана, тщательно размешивают содержимое и прибавляют 20
мл четыреххлористого углерода. Экстракцию пестицидов из пробы проводят в
течение 15 минут трижды, после чего экстракт последовательно переносят в
делительную воронку для однократной или двукратной дополнительной очистки
серной кислотой.
Хроматографирование
На хроматографическую
пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят
исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см.
Остаток экстракта в колбочке смывают тремя порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна.
Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы,
содержащие 10, 5, 1 мкг исследуемых препаратов (или другие количества, близкие
к определяемым концентрациям).
Пластинки
с нанесенными растворами
помещают в камеру для
хроматографирования,
на дно которой за
30 минут до
начала
хроматографирования
наливают подвижный растворитель. При
использовании
пластинок с тонким
слоем окиси алюминия
или
силикагеля в
качестве подвижного растворителя применяют н-гексан
или смесь гексана с
ацетоном в соотношении 6:1, для препаратов, у
которых
величина R в гексане ниже 0,3.
При использовании
f
пластинок "Силуфол"
подвижный растворитель - 1% раствор ацетона в
гексане, а пластинок
"Силуфол", импрегнированных о-толидином, -
гексан с диэтиловым эфиром в соотношении 49:1. Край пластинки с
нанесенными растворами
может быть погружен в
подвижный
растворитель не
более чем на 0,5 см.
После того как фронт растворителя поднимется
на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для
испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и
подвергают действию УФ света в течение 10 - 15 минут (лампа ПРК-4). Пластинки
следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.
При наличии хлорорганических пестицидов
на пластинке появляются пятна серо-черного цвета.
При использовании для анализа пластинок
"Силуфол", импрегнированных о-толидином, их непосредственно после хроматографирования
подвергают УФ-облучению в течение нескольких минут.
При наличии хлорорганических пестицидов в этом случае появляются пятна
сине-голубого цвета.
Количественное определение осуществляют
сравнением площадей пятен пробы и стандартных растворов. Между количеством препарата
в пробе, не превышающим 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует
прямая пропорциональная зависимость. При большем содержании препарата следует
использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.
2.6. Обработка результатов анализа
Количество препарата в пробе вычисляют по
формуле:
A x S
2
X = ------,
P x S
1
где: X - содержание препарата в пробе,
мг/кг или мг/л;
A - содержание препарата в стандартном
растворе, мкг;
S -
площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
P - масса или объем исследуемой пробы, г или мл.
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и хлорорганическими
пестицидами.
Таблица 3
ВЕЛИЧИНА R ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
f
┌─────────────────────┬──────────────────────────┬─────────────────┐
│ Пестицид │
Подвижный растворитель │ Величина R
│
│ │ │ f
│
│ │ ├────────┬────────┤
│ │ │на окиси│на сили-│
│ │ │алюминия│кагеле
│
├─────────────────────┼──────────────────────────┼────────┼────────┤
│Гексахлорбензол │Гексан
│0,9 │- │
│Альдрин │Гексан
│0,83 │0,68 │
│ДДЭ │-"- │0,78 │0,66 │
│ДДЭ │Гексан
+ ацетон (6:1) │0,87 │- │
│Гептахлор │Гексан
│0,76 │0,65 │
│2,4-ДДТ │-"- │0,67 │0,54 │
│4,4'-ДДТ │-"- │0,61 │0,50 │
│4,4'-ДДТ │Гексан
+ ацетон (6:1) │0,75 │- │
│Линдан │Гексан
│0,34 │0,20 │
│ДДД │-"- │0,30 │0,40 │
│ДДД │Гексан
+ ацетон (6:1) │0,62 │- │
│Метоксихлор │Гексан
│0,15 │- │
│Метоксихлор │Гексан + ацетон (6:1)
│0,60 │- │
│Кельтан │Гексан
│0,05 │- │
│Кельтан │Гексан + ацетон (6:1)
│0,40 │- │
│Кельтан │Бензол │0,44 │- │
│Тедион │Гексан
│0,03 │- │
│Тедион │Гексан + ацетон (6:1)
│0,55 │- │
│Эфирсульфонат │Гексан
│0, │- │
│Эфирсульфонат │Гексан + ацетон (6:1)
│0,45 │- │
│Дактал │То же (2:1) │0,9 │- │
└─────────────────────┴──────────────────────────┴────────┴────────┘
В настоящих Методических указаниях
обобщены следующие методики определения остаточных количеств
хлорорганических пестицидов в пищевых продуктах:
1. М.А. Клисенко, З.Ф. Юркова Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД,
(ВНИИГИНТОКС) альдрина,
дильдрина, гептахлора,
Л.А. Стемпковская
(Киевский метоксихлора,
эфирсульфоната и
НИИ гигиены питания) др. ядохимикатов в воде, продуктах
В.В. Молочников, питания и биологических средах
В.И. Мочалов, хроматографией в тонком слое.
А.П. Моргунова (ВНИИМП) Утвержден
30.07.1973, N 1112-73.
Методические
указания по
определению микроколичеств
пестицидов в продуктах
питания,
кормах и внешней среде, часть VI,
М., 1974
2. А.Б. Белова,
Л.В. Новикова, Определение ДДТ, ГХЦГ, альдрина и
Н.И. Шадрина (ВНИИ жиров) гексахлорбензола в обогащенных и
необогащенных липидами хлопковых
шротах. Утвержд. 30.07.1973,
N 1112-73.
Там же
3. Э.И. Бабкина, Методические указания по
контролю
Ц.И. Бобовникова, загрязнения почв. Утв. 12.10.1977,
В.В. Егоров, Г.В. Миронюк N 1766. Гидрометеоиздат,
1977
4. А.И. Шумкова,
И.Н. Карпова, Определение хлорорганических
С.А. Ликунова, пестицидов в животных жирах,
мясе,
Л.Д. Рузанкова
(ВНИИМП) яйцах
и продуктах их переработки
Н.В. Перетолчин, хроматографией в тонком слое.
Г.П. Угрюмова (ВНИИПП) Утв. 23.01.1975, N 1222-75.
Методические указания по
определению микроколичеств
пестицидов в
продуктах питания,
кормах и внешней среде, часть VII,
1977
5. Л.Ф.
Васьковская, Методы
определения ДДТ, его
А.Л. Бурштейн (ВНИИГИНТОКС) метаболитов и ГХЦГ в
табачных
изделиях
способом хроматографии в
тонком слое. Утв.
22.09.1975,
N 1350-75.
Там же
6. В.Н.
Полякова, Определение ДДТ,
ДДД, ДДЭ и гамма-
Г.А. Трондина,
Р.Д. Петухов изомера ГХЦГ в мясе, рыбе,
органах
(ВИЭВ) и тканях
животных, комбикормах,
меде и воде методом тонкослойной
хроматографии.
Справочная
книга по ветеринарной
токсикологии, "Колос", 1976
С введением в
действие настоящих Методических указаний считать утратившими силу "Методы
определения гептахлора в растениях методом
тонкослойной хроматографии" и "Метод определения ДДТ, ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола в
хлопковых шротах, обогащенных и необогащенных липидами", утвержденные зам.
Главного санитарного врача СССР в 1971, а также "Методическое письмо об
определении ДДТ, гамма-ГХЦГ, ДДД, альдрина, гептахлора и некоторых других хлорорганических пестицидов в
воде, продуктах питания и
биологических средах методом хроматографии в тонком слое", утвержденное заместителем Главного санитарного врача СССР в
1968 г.