Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2369-81
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФУРАДАНА В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ И ВОДЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Л.И. Бублик, Н.В.
Федоренко (УкрНИИЗР).
Краткая характеристика препарата. Фурадан -
O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-
7-бензофуранил)-N-метилкарбамат. Брутто-формула C
H O N. Молекулярная
12 15 3
масса 221,26.
Общепринятое название - карбофуран. Кристаллическое
вещество,
т. пл. 153 - 154
°C, т. пл. технического препарата
150 - 152 °C. Давление
паров 0,0027 Па
при 33 °C и 0,015 Па при 50 °C.
Растворимость при 25 °C,
г/100 мл: в воде -
0,7, ацетоне - 15, хлористом
метилене - 12, этаноле -
4, петролейном эфире - 1. В кислотах
и щелочах разлагается при кипячении, в
спиртовых растворах щелочей - при
комнатной температуре. Для крыс ЛД
50
через рот 8 - 14
мг/кг.
Продукты метаболизма фурадана
- O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-3-гидрокси-
7-бензофуранил)-N-метилкарбамат (II),
ЛД 18 мг/кг; 2,3-дигидро-2,2-
50
диметил-3-кето-7-бензофуранил-N-метилкарбамат (III),
ЛД 69 мг/кг;
50
2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранол (IV),
ЛД 2200 мг/кг;
50
2,3-дигидро-2,2-диметил-3,7-бензофурандиол (V),
ЛД 1350 мг/кг;
50
2,3-дигидро-2,2-диметил-3-оксо-7-бензофуранол
(VI), ЛД 295 мг/кг.
50
Фурадан - акарицид, нематоцид, системный
инсектицид. ДСД 0,01 мг/кг. Остаточные количества фурадана
в сахарной свекле не допускаются.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении фурадана и его метаболитов из исследуемой
пробы хлороформом или подкисленной водой, очистке путем перераспределения в
двух несмешивающихся растворителях и определении методом ТСХ. Проявление
основано на гидролизе препаратов спиртовым раствором щелочи и образовании
окрашенных соединений с солями диазония.
Метрологическая характеристика метода.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 96.
Таблица 96
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌────────────────┬────────────┬─────────┬───────────────┬─────────────────┐
│
Анализируемая │ Предел
│Срднее
│ Стандартное │
Доверительный │
│ проба
│обнаружения,│значение │ отклонение,
│ интервал при │
│ │ мг/кг
│опреде-
│ % │p = 0,95, n = 5, │
│ │ или мг/л
│ления
│ │ %
│
│ ├──────┬─────┼────┬────┼───────┬───────┼────────┬────────┤
│ │ а │ б │
а │ б │
а │ б │ а │ б │
├────────────────┼──────┼─────┼────┼────┼───────┼───────┼────────┼────────┤
│Вода │0,002 │0,02 │82,5│80,9│+/-
9,3│+/- 6,5│+/- 14,8│+/- 10,3│
│Почва
(чернозем)│0,010 │0,10 │85,6│82,4│+/- 3,8│+/-
4,9│+/- 6,0 │+/- 7,8 │
│Озимая
пшеница │0,050 │0,30 │92,0│91,5│+/-
3,7│+/- 3,4│+/- 5,8 │+/- 4,1 │
│(зеленая
масса) │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Яблоки │0,040 │0,08 │83,5│84,9│+/-
4,7│+/- 5,8│+/- 7,5 │+/- 9,2 │
│Картофель │0,050 │0,10 │79,0│79,5│+/-
2,8│+/- 4,1│+/- 4,5 │+/- 6,5 │
│(клубни) │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Сахарная
свекла │0,050 │0,10 │81,8│82,5│+/- 4,9│+/-
5,2│+/- 7,6 │+/- 8,3 │
│(корнеплоды) │
│ │ │
│ │ │ │ │
└────────────────┴──────┴─────┴────┴────┴───────┴───────┴────────┴────────┘
Примечание. а - на пластинке "Силуфол";
б - на пластинке КСК.
Избирательность метода. Метод специфичен.
Севин и другие пестициды не мешают определению.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан ч. Этиловый спирт ректиф., 96-процентный. Хлороформ х.ч.
Хлороводородная кислота, 0,25 н и 0,1 н растворы.
Вода дистиллированная. Сульфат натрия безводный ч.д.а.
Едкое кали х.ч. п-Нитроанилин
ч.д.а. Нитрит натрия х.ч.
Соли диазония: прочный синий Б,
прочный красный Б, прочный голубой Б (бис-диазотированный
о-дианизидин). Фурадан и его
метаболиты (II, III, IV, V, VI) - 99%. Силикагель КСК N 2,5. Гипс медицинский.
Пластинки "Силуфол" размером 15 x 15 см.
Бумага фильтровальная.
Приготовление стандартных растворов:
0,025 г фурадана растворяют в 25 мл ацетона; 10 мл
полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и ацетоном доводят до
метки. Аналогично готовят стандартные растворы метаболитов, содержащих 100 мкг
в 1 мл. Хранят растворы в темных склянках с притертыми пробками в холодильнике.
Проявляющие
реагенты: 15-процентный KOH в
спиртово-водном растворе
(15 г KOH
растворяют в 60 мл этанола и 40 мл воды); 0,01-процентный раствор
соли диазония в ацетоне (0,01 г соли диазония
растворяют в 100 мл ацетона).
Хранят в
темной склянке 3 сут.; 0,1-процентный раствор паранитроанилина
в
0,1 н хлороводородной кислоте
(0,1 г паранитроанилина растворяют в 100 мл
0,1 н раствора хлороводородной кислоты);
4-процентный водный раствор
нитрита натрия
(4 г NaNO
растворяют в 100 мл дистиллированной воды).
2
Приборы и посуда. Весы аналитические и
технические. Аппарат для встряхивания. Вакуумный насос. Хроматоскоп.
Электроплитка. Водяная баня. Колбы мерные на 100 мл; плоскодонные на 250 мл;
круглодонные на 250 мл. Мерные цилиндры на 50 и 100 мл. Микропипетки на 0,1 мл.
Воронки делительные на 100 и 500 мл. Эксикатор. Камера для хроматографирования.
Пульверизаторы стеклянные. Пластинки "Силуфол".
Ход анализа. Экстракция. Пробу воды (200
мл) помещают в делительную воронку. Экстрагируют фурадан
и его метаболиты дважды хлороформом порциями по 50 мл, встряхивают каждый раз
по 5 мин. Хлороформный экстракт сливают через фильтр с 15 г безводного сульфата
натрия в отгоночную колбу. Отгоняют хлороформ на
водяной бане при температуре воды в ней 80 °C до объема 0,1 - 0,2 мл.
Навеску 50 г воздушно-сухой почвы
растирают в фарфоровой ступке, переносят в коническую колбу и заливают 200 мл
дистиллированной воды, подкисленной до pH 3.
Встряхивают 20 мин. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр в
делительную воронку. Затем проводят реэкстракцию
хлороформом. Далее поступают так, как описано выше.
Пробу образца озимой пшеницы (20 г)
измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 400 мл дистиллированной
воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 3. Встряхивают 20 мин. Затем экстракт отфильтровывают в
делительную воронку. Проводят реэкстракцию фурадана и его метаболитов дважды хлороформом по 100 мл,
как описано выше. Экстрагируемые примеси не мешают определению.
Пробу измельченного образца (50 г) яблок,
картофеля (клубни), сахарной свеклы (корнеплоды) переносят в коническую колбу и
заливают 100 мл хлороформа, экстрагируют при встряхивании 20 мин. Полученный
экстракт переносят в колбу через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного
сульфата натрия. Отгоняют хлороформ на водяной бане или на ротационном
испарителе и остаток сушат досуха (оставляют колбу открытой при комнатной
температуре). Сухой остаток растворяют в 100 мл дистиллированной воды,
переносят в делительную воронку и проводят реэкстракцию
2 раза по 30 мл хлороформа. Дальнейшие операции проводят, как описано выше.
Хроматографирование. После отгонки хлороформный остаток (0,1 - 0,2 мл) капилляром наносят
в центр пластинки с тонким слоем адсорбента на расстоянии 1,5 см от нижнего
края. Слева и справа микрошприцем или микропипеткой
наносят стандартные растворы фурадана и его
метаболитов с содержанием 0,5 - 30 мкг. Одинаковые объемы (0,005 - 0,05 мл) фурадана и его метаболитов наносят в одну точку. Затем
пластинку помещают в хроматографическую камеру с
подвижной фазой, которой служит смесь н-гексан-ацетон
(3:2). Когда растворитель поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают и
сушат на воздухе.
Проявление
пластинок. Пластинки опрыскивают проявляющим реагентом N 1,
подсушивают и
затем опрыскивают проявляющим
реагентом N 2 или смесью
проявляющих реагентов
N 3 и N 4
в соотношении 10:1.
В таблице 97
представлены
R на пластинках "Силуфол" и с КСК для I - VI и окраска пятен.
f
Таблица 97
ВЕЛИЧИНА R И ЦВЕТ ПЯТЕН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ
f
┌──────────┬───────────────────┬──────────────────────────┬─────────┬─────┐
│Соединение│Проявляющий реагент│ Цвет пятен │"Силуфол"│
КСК │
├──────────┼───────────────────┼──────────────────────────┼─────────┼─────┤
│I │Прочный голубой Б │Желтый │0,63 │0,70 │
│II │То
же │Розовый │0,38 │0,40 │
│III │ -"- │Сиреневый │0,49 │0,55 │
│IV │ -"- │Желтый │0,78 │0,85 │
│V │ -"- │Красный │0,44 │0,45 │
│VI │ -"- │Фиолетовый │0,59 │0,60 │
│I │Прочный синий
Б │Желтый │0,63 │0,70 │
│II │То
же │Розовый │0,38 │0,40 │
│III │ -"- │Сиреневый │0,49 │0,55 │
│IV │ -"- │Оранжевый │0,78 │0,85 │
│V │ -"- │Кирпично-красный │0,44 │0,45 │
│VI │ -"- │Фиолетовый │0,59 │0,60 │
│I
- VI │Прочный красный Б │Ярко-малиновый
разных │ │ │
│ │ │оттенков │ │ │
│I
- VI │n-Нитроанилин │Бордо │ │ │
└──────────┴───────────────────┴──────────────────────────┴─────────┴─────┘
Обработка результатов анализа. Содержание
фурадана и его метаболитов определяют, сравнивая
площади и интенсивность окраски пятен стандартов и проб, или по площади пятен
по формуле:
S - A
2 1
A = A - ------- (S - S),
2 S - S
2
2 1
где:
A - количество препарата, мкг;
S - площадь пятна определяемого вещества,
кв. мм;
A ,
A , S , S
- количества препарата
и площади пятен (кв. мм)
1
2 1 2
стандартных
растворов с явно большим и явно меньшим содержанием вещества по
сравнению с
анализируемой пробой.
Количество фурадана
и его метаболитов в пробе рассчитывают по формуле:
A = A + A + A
+ A + A + A .
мкг
I II III
IV V VI
Содержание фурадана (X, мг/кг или мг/л)
рассчитывают по формуле:
A
X = -,
P
где:
P - масса анализируемой пробы, г.
Требования безопасности. Необходимо
выполнять все требования безопасности работы с токсичными веществами, кислотами
и щелочами.