Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 октября 1981 г. N 2471-81
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОЗАЛИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ, ВОДЕ
И ПОЧВЕ ХРОМАТО-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия Временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Cl
\ // \ ___NH C H N Cl
│
││ │ 8 7 2
\\ / \ //\
N C-CH М.м. 166,5.
3
5-хлор-2-метил-бензимидазола
- порошок белого цвета с кремоватым оттенком с температурой плавления 204 - 206
°С. Хорошо растворяется в этиловом, метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне,
хлороформе, растворим в горячей воде, нерастворим в бензоле.
Розалин
- гербицид избирательного действия
против однолетних сорняков
на посевах
хлопчатника. ЛД для крыс составляет 600
мг/кг.
50
2. Методика
определения розалина в растительных
объектах, в воде и почве
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на хроматографировании
розалина в тонком слое силикагеля в системе: бензол -
ацетон (2:3) с проявлением зоны локализации препарата на пластинке
0,05-процентным раствором азотнокислого серебра. Количественное определение
проводят измерением оптической плотности этанольного элюата на спектрофотометре СФ-16 при длине волны 246 нм в кюветах толщиной слоя 1 см. Чувствительность
определения 1 мкг в анализируемой пробе.
2.1.2. Метрологическая характеристика
Диапазон определяемых концентраций:
растительный объект - 0,05 - 1,0 мг/кг;
вода - 0,01 - 1,0 мг/л;
почва - 0,02 - 1,0 мг/кг.
Предел обнаружения:
растительный объект - 0,05 мг/кг;
вода - 0,01 мг/л;
почва - 0,02 мг/кг.
Число параллельных определений:
растительный объект - 5;
вода - 5;
почва - 5.
Среднее значение определений:
растительный объект - 92,3%;
вода - 91,8%;
почва - 91,6%.
Стандартное отклонение:
растительный объект - 0,011;
вода - 0,0204;
почва - 0,013.
Относительное стандартное отклонение:
растительный объект - 0,327;
вода - 0,0394;
почва - 0,072.
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5, в %:
растительный объект - 2,5 - 3,10;
вода - 2,5 - 3,80;
почва - 1,8 - 4,12.
2.1.3. Избирательность метода
Определению не мешают - ГХЦГ, ДДЕ, ДДД,
ДДТ, рогор, антио, базудин.
2.2. Реактивы и
растворы
Стандартные растворы розалина,
х.ч., содержащие 100 мкг/мл хлороформа и спирта. 10
мг розалина растворяют в хлороформе в мерной колбе на
100 мл и доводят до метки. Раствор устойчив и течение 3-х месяцев при хранении на холоду. Точно так же готовят стандартный раствор розалина в спирте.
Ацетон, х.ч.,
ГОСТ 2603-79.
Бензол, х.ч.,
ГОСТ 5955-75.
Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-73.
Натрий сернокислый, х.ч.,
ГОСТ 4166-76.
Окись алюминия, ч.д.а.,
МРТУ 6-09-2046-64.
Йод кристаллический, ч.д.а.,
ГОСТ 4139-79.
Хлороформ, х.ч.,
ТУ 6-09-4263-76.
Этиловый спирт ректификат, ТУ
6-09-4512-77.
Серебро азотнокислое, х.ч.,
ГОСТ 1277-75, 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор (1 ч. воды и 3 ч.
ацетона).
Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76, 0,05 гр.
растворяют в 10 мл ацетона (последний разбавляют раствором азотнокислого
серебра до объема 100 мл).
Лимонная кислота, х.ч.,
ГОСТ 3652-69, 2-процентный водный раствор.
Вата обезжиренная.
Эфир диэтиловый,
ГОСТ 6266-52.
2.3. Приборы и
посуда
Спектрофотометр СФ-4А или СФ-16.
Пластинки хроматографические
марки "Silufol Uv-254".
Делительные воронки на 500 и 250 мл.
Мерные колбы на 100 и 25 мл, ГОСТ
1770-74.
Пипетки, ГОСТ 20292-74.
Камера для хроматографирования.
Колонка хроматографическая
стеклянная.
Пульверизаторы стеклянные.
Прибор для отгонки растворителя.
Баня водяная.
Эксикатор для йодной камеры.
Шприцы комбинированные, ТУ 64-1-378-73.
2.4. Отбор,
хранение и доставка проб
2.4.1. Отбор проб проводится в
соответствии с Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной
продукции, пищевых продуктов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденных заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Условия экстракции и очистки
Вода. 100 мл воды помещают в делительную
воронку, заливают 30 мл хлороформа и экстрагируют 10 мин. Экстракцию повторяют
с 30 и 20 мл хлороформа. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым
натрием (10 гр.) в течение 5 мин., далее экстракт переносят в колбу для отгонки
растворителя. Растворитель упаривают почти досуха (остаток в колбе 0,2 - 0,3
мл, испаряют при обычной температуре).
Почва. К 50 гр. увлажненной навески
приливают 40 мл хлороформа, перемешивают 30 мин. на аппарате для встряхивания.
Экстракцию повторяют с 30 мл хлороформа дважды. Объединенные экстракты
фильтруют через бумажный фильтр. Сушат безводным сернокислым натрием (10 гр.) 5
мин. Экстракт количественно переносят в колбу для отгонки растворителя и
упаривают почти досуха.
Растительный материал. 20 гр.
воздушно-сухого измельченного растительного материала (листья, стебли
хлопчатника, надземная часть люцерны) помещают в колбу на 500 мл, заливают 200
мл дистиллированной воды и кипятят в течение 30 мин. Гомогенат
фильтруют в горячем виде, остаток на фильтре промывают несколькими порциями
горячей дистиллированной воды. Фильтраты объединяют, количественно переносят в
делительную воронку емкостью 500 мл и экстрагируют хлороформом по 30 мл трижды.
Экстракты объединяют и очищают от коэкстрактивных
веществ, пропуская его через хроматографическую
колонку, заполненную обезжиренной ватой (2 см), окисью алюминия (5 - 6 см) и
безводным сернокислым натрием (5 - 6 см). Колонку перед тем, как пропустить
пробу, промывают хлороформом. Растворитель упаривают почти досуха.
2.5.2. Хроматографирование
Сухой
остаток в колбе
после упаривания растворяют
в 0,3 - 0,5 мл
хлороформа. Пробу
при помощи туберкулинового шприца количественно наносят
на середину
хроматографической пластинки
так, чтобы диаметр
пятна не
превышал 1
см. Колбу дважды
промывают небольшими порциями
(0,4 мл)
хлороформа, которые также наносят в ту же точку. На соседние полосы
наносят
стандартный раствор
розалина, содержащий 2 и 5 мкг препарата.
Пластинку с
нанесенными пробами
и стандартами помещают
в камеру для
хроматографирования,
предварительно насыщенную
в течение 30 мин. бензол -
ацетоном в
соотношении 2:3. Край
пластинки погружают в растворитель не
более чем
на 0,5 см. После поднятия фронта
растворителя на высоту 10 см,
пластинку вынимают
из камеры и оставляют на воздухе
до полного испарения
растворителей. Затем
пластинку опрыскивают проявляющей смесью
0,05-процентного бромфенолового
синего в ацетоне и
0,5-процентного
азотнокислого серебра.
После того, как пластинка
подсохнет, ее орошают
лимонной кислотой
для закрепления окраски пятна. На темном фоне пластинки
проявляются
синие пятна розалина с R = 0,56 +/- 0,05.
f
2.5.3. Альтернативные условия хроматографирования
Содержимое
колбы после отгонки растворителя при определении розалина
в
воде, почве
и растительном материале
растворяют в 0,2 мл хлороформа.
Пластинку делят
по длине на три параллельные полосы. На первую и
вторую
полосу наносят
в виде сплошной
линии раствор экстрактов. Стенки
колбы
ополаскивают небольшими
порциями хлороформа и наносят на те же полосы.
На
третью полосу
наносят стандартный раствор
розалина,
содержащий 10 мкг
препарата. Пластинку
помещают в камеру,
куда за 20
- 30 мин. до
хроматографирования
наливают смесь растворителей: спирт
- гексан в
соотношении 1:1. Как
только фронт растворителя достигнет высоты 10 см,
пластинку
вынимают из камеры и после удаления запаха растворителей первую и
вторую полосу
закрывают стеклом и пластинку помещают в йодную камеру на 5 -
10 мин.
Розалин обнаруживают на третьей полосе по темно-коричневому пятну
на желтом
фоне R = 0,60 +/- 0,07. По проявленной зоне
отмечают участки
f
силикагеля на
первой и второй полосах и переносят зоны розалина в колбу
емкостью 100 мл.
Элюируют 10 мл этилового спирта встряхиванием в
течение 30
мин. Соответственно элюируют и
зону чистого силикагеля
и измеряют
оптическую
плотность элюатов при 246 нм.
Количество розалина
определяют по калибровочному графику или сравнением оптических плотностей
стандартного и испытуемого растворов. Для построения калибровочного графика в
мерных колбах готовят стандартные растворы 5-хлор-2-метил-бензимидазола с
концентрацией 1, 2, 5, 10, 15, 20 мкг/мл. Измеряют оптические плотности
растворов при 246 нм и строят калибровочный график Д = f(c), где c - концентрация розалина.
2.5.4. Обработка результатов анализа
Количественное определение розалина в анализируемой пробе проводится визуально по
интенсивности окрашивания пятен на хроматограмме и по
площади пятен стандартных растворов и проб.
Концентрацию розалина
(Х) в воде, почве и растительном материале вычисляют по формуле:
А х S
2
Х = ------,
В х S
1
где:
Х - содержание препарата в пробе, мг/кг или
мг/л;
А
- количество препарата,
найденное путем визуального
сравнения
размера и
интенсивности пятен пробы и стандартных растворов, мкг;
В - содержание препарата в стандартном
растворе, мкг;
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
S -
площадь пятен стандартного раствора, кв. мм.
1
При спектрофотометрическом определении
содержание розалина в пробе вычисляют по формуле:
А х В
Х = -----,
С х Р
где:
Х - содержание розалина
в анализируемой пробе, мг/кг или мг/л;
А - количество розалина,
найденное по калибровочному графику, мкг;
В - общий объем экстракта, мл;
С - объем раствора, нанесенный на хроматограмму, мл;
Р - масса анализируемой пробы, г.
3. Требования
безопасности
Соблюдать общие правила по технике
безопасности, необходимые при работе с химическими реактивами и пестицидами.
4. Разработчики
Методические рекомендации подготовлены
сотрудниками УзНИИСТПз и Института химии растительных
веществ АН УзССР.
Приложение
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
РОЗАЛИНА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ
┌─────────────┬─────────────┬───────────────┬──────┬──────┬──────┬────────┐
│ Объект
│Используемая │
Точность │ С
│ S │
S │ДЕЛЬТА S│
│ │концентрация │определения
в %│ │ │
2 │ │
├─────────────┼─────────────┼───────────────┼──────┼──────┼──────┼────────┤
│Растительный
│0,95 │95 │0,0475│0,0025│0,053
│0,0032 │
│материал │0,015 │96 │0,0144│0,011 │0,821
│0,0148 │
│ │0,24 │86 │0,206 │0,022 │0,1092│0,028 │
├─────────────┼─────────────┼───────────────┼──────┼──────┼──────┼────────┤
│Вода │0,15 │95,5 │0,143 │0,0046│0,032
│0,0058 │
│ │0,4 │92 │0,368 │0,0274│0,074
│0,348 │
│ │0,3 │88 │0,264 │0,029 │0,112
│0,037 │
├─────────────┼─────────────┼───────────────┼──────┼──────┼──────┼────────┤
│Почва │0,10 │92 │0,092 │0,0061│0,0665│0,0076 │
│ │0,24 │96 │0,228 │0,0093│0,041
│0,0117 │
│ │0,3 │88 │0,264 │0,0296│0,112
│0,0371 │
└─────────────┴─────────────┴───────────────┴──────┴──────┴──────┴────────┘