Утверждены

Минздравом СССР

22 октября 1981 г. N 2473-81

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ (АМБУШ,

ДЕЦИС, РИПКОРД, СУМИЦИДИН) В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ, ВОДЕ

ВОДОЕМОВ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны: Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС); Т.М. Петровой, Е.Г. Красниковой (ВИЗР); А.Ф. Скурьят, Е.М. Бунякиной (БелНИИЗР).

 

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 70.

 

Таблица 70

 

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИРЕТРОИДОВ

 

┌─────────────┬────────────┬─────────────────────┬────────┬──────────┬─────┬──────┐

│Общепринятое │  Брутто-   │ Химическое название │Моле-   │ Давление │ДСД, │МДУ в │

│  название   │  формула   │                     │кулярная│паров, Па │мг/кг│карто-│

│  (торговое  │            │                     │масса   │          │     │феле, │

│  название)  │            │                     │        │          │     │мг/кг │

├─────────────┼────────────┼─────────────────────┼────────┼──────────┼─────┼──────┤

│             │            │                     │        │        -5│     │      │

│Перметрин    │C  H  O Cl  │+/-Цис,транс-3-(2,2- │391,28  │4,5 x 10  │0,035│0,05  │

│(амбуш)      │ 21 20 3  2 │дихлорвинил)-2,2-    │        │(25 °C)   │     │      │

│             │            │диметилциклопропан-  │        │          │     │      │

│             │            │карбоновой кислоты   │        │          │     │      │

│             │            │3-феноксибензиловый  │        │          │     │      │

│             │            │эфир                 │        │          │     │      │

│             │            │                     │        │        -6│     │      │

│Циперметрин  │C  H  O Cl  │(1RS)-Цис,транс-3-   │416     │5,1 x 10  │0,003│0,01  │

│(рипкорд,    │ 22 19 3  2 │(дихлорвинил)-2,2-   │        │(70 °C)   │     │      │

│цимбуш)      │            │диметилциклопропан-  │        │          │     │      │

│             │            │карбоновой-1 кислоты │        │          │     │      │

│             │            │(RS)-3-фенокси-      │        │          │     │      │

│             │            │альфа-цианобензиловый│        │          │     │      │

│             │            │эфир                 │        │          │     │      │

│             │            │                     │        │        -5│     │      │

│Фенвалерат   │C  H  O NCl │(RS)-2-Метил-(4-     │405     │3,1 x 10  │0,034│0,01  │

│(сумицидин)  │ 25 22 3    │хлорфенил)бутановой  │        │          │     │      │

│             │            │кислоты (RS)-альфа-  │        │          │     │      │

│             │            │циано-3-фенокси-     │        │          │     │      │

│             │            │бензиловый эфир      │        │          │     │      │

│             │            │                     │        │        -8│     │      │

│Декаметрин   │C  H  Br NO │(1R)-Цис-3-(2,2-     │505,2   │1,5 x 10  │0,003│0,01  │

│(децис,      │ 22 19  2  3│дибромовинил)-2,2-   │        │(25 °С)   │     │      │

│дельтаметрин)│            │диметилциклопропан-  │        │          │     │      │

│             │            │карбоновой кислоты   │        │          │     │      │

│             │            │(S)-3-фенокси-альфа- │        │          │     │      │

│             │            │цианобензиловый эфир │        │          │     │      │

└─────────────┴────────────┴─────────────────────┴────────┴──────────┴─────┴──────┘

 

Препараты нерастворимы в воде. Хорошо растворяются в ацетоне, спиртах, хлороформе. ПДК в воде водоемов составляет: рипкорда - 0,07 мг/л, сумицидина - 0,05 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на определении синтетических пиретроидов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения препаратов из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смесь гексана и ацетона, 50-процентный водный раствор ацетона) с последующей очисткой экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и (или) на колонках с адсорбентами.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,04 мг/кг (мг/л). Остальные параметры приведены в таблице 71.

 

Таблица 71

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ

 

┌─────────┬─────────┬───────────────────────┬─────────────┬───────────────┐

│Препарат │Анализи- │   Среднее значение    │Относительное│ Доверительный │

│         │руемый   │    определения, %     │ стандартное │   интервал    │

│         │объект   │                       │ отклонение  │   среднего    │

│         │         │                       │             │  при n = 5,   │

│         │         │                       │             │  p = 0,95, %  │

│         │         ├──────────┬────────────┼──────┬──────┼───────┬───────┤

│         │         │   ТСХ    │    ГЖХ     │ ТСХ  │ ГЖХ  │  ТСХ  │  ГЖХ  │

├─────────┼─────────┼──────────┼────────────┼──────┼──────┼───────┼───────┤

│Амбуш    │Вода     │75 +/- 1,7│78 +/- 4,4  │2,3   │5,7   │+/- 5,2│+/- 6,5│

│         │Почва    │66 +/- 2,2│67 +/- 3,6  │3,6   │5,2   │+/- 9,3│+/- 6,0│

│         │Картофель│70 +/- 2,3│70 +/- 3,9  │3,2   │5,7   │+/- 8,1│+/- 6,5│

│Рипкорд  │Вода     │80 +/- 2,0│82 +/- 3,5  │2,5   │4,3   │+/- 6,9│+/- 5,0│

│         │Почва    │71 +/- 2,2│72 +/- 3,8  │3,1   │5,3   │+/- 7,0│+/- 6,1│

│         │Картофель│75 +/- 2,4│77 +/- 3,3  │3,2   │4,3   │+/- 8,2│+/- 5,0│

│Сумицидин│Вода     │72 +/- 2,4│80 +/- 1,7  │3,1   │1,7   │+/- 8,0│+/- 2,0│

│         │Почва    │68 +/- 2,1│70 +/- 2,1  │3,2   │3,0   │+/- 8,7│+/- 3,5│

│         │Картофель│70 +/- 2,6│75 +/- 1,7  │3,7   │2,2   │+/- 9,5│+/- 3,0│

│Децис    │Вода     │80 +/- 1,8│85,6 +/- 2,7│2,2   │3,2   │+/- 5,0│+/- 8,2│

│         │Почва    │72 +/- 2,5│79,0 +/- 2,9│3,4   │3,7   │+/- 8,1│+/- 9,5│

│         │Картофель│75 +/- 2,7│82,3 +/- 2,3│3,6   │2,8   │+/- 9,0│+/- 7,2│

└─────────┴─────────┴──────────┴────────────┴──────┴──────┴───────┴───────┘

 

Избирательность метода. Хлорсодержащие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Для экстракции и очистки экстрактов. Ацетон ч. Диэтиловый эфир х.ч. н-Гексан ч., х.ч. Сульфат натрия безводный свежепрокаленный. Хлороформ ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч.д.а. Хлорид кальция х.ч., 0,05-процентный раствор. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Хлорид натрия ч.

    Для метода ТСХ.  Пластинки  "Силуфол" УФ   .  Аммиак ч.,  25-процентный

                                            254

водный раствор.  Нитрат серебра. Фосфорно-молибденовая кислота ч.д.а. Спирт

этиловый 96-процентный.

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25-процентного раствора аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; N 2 - 10-процентная фосфорно-молибденовая кислота в этиловом спирте.

Для метода ГЖХ. Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HDMC (0,16 - 0,20 мм); 3% OV-1 на хроматоне N-AW-HDMS (0,125 - 0,160 мм); 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW (0,100 - 0,125 мм). Азот особой чистоты.

Стандартные растворы: N 1 - основной стандартный раствор пиретроидов в гексане (500 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 6 мес.; N 2 - стандартный раствор пиретроидов в гексане или бензоле (10 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Колбы: конические на 50 и 250 мл; круглодонные со шлифами для отгонки растворителей; мерные. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Аппарат для встряхивания колб. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель). Камера хроматографическая. Микропипетки на 0,1 - 0,2 мл. Хроматоскоп (хемоскоп). Пульверизатор стеклянный. Микрошприцы на 10 мкл. Газовый хроматограф "Цвет", "Газохром" с ДЭЗ (ДПР).

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. В колонку помещают ватный тампон, последовательно 3 - 4 г сульфата натрия, 5 г оксида алюминия, 2 г безводного сульфата натрия.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 10 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 50 °C, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ТСХ и ГЖХ).

Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 25 г помещают в коническую колбу, заливают 50 мл 50-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр, объединяют и помещают на 1 ч в холодильник. При выпадении осадка пробу следует отфильтровать вторично. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем на воздухе досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ). Если конечные экстракты получились недостаточно чистые, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии. В первом случае к сухому остатку в колбу добавляют 3 - 5 мл ацетонитрила, встряхивают 1 - 2 мин. Переносят ацетонитрил количественно (смывая колбу 1 - 2 мл свежего ацетонитрила) в делительную воронку и приливают 50 мл 2-процентного раствора хлорида натрия. Пиретроиды дважды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 1 - 2 мин. Пиретроиды переходят в гексан, коэкстрактивные вещества остаются в водном растворе. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Для очистки экстракта подготовленную колонку промывают 30 - 40 мл хлороформа или бензола, элюат отбрасывают. Вносят в колонку остаток пробы после упаривания (если растворитель был удален досуха, остаток растворяют в 1 - 2 мл гексана) порциями по 1 - 2 мл гексана, дают раствору впитаться и элюируют пиретроиды 50 мл бензола. Элюат концентрируют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетона и хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют. Если конечные экстракты получились недостаточно чистыми, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии (так же, как при анализе растительного материала).

    Условия хроматографирования (метод ГЖХ).  В хроматограф последовательно

вводят  по  5  мкл   стандартного   раствора   N 2   и   пробы.  Носитель -

                                                                     -12

хроматон   N-AW-HDMC   (0,16 - 0,20 мм). Шкала  электрометра  20 x 10    А.

Линейный диапазон детектирования 3 - 15 нг. Нижний предел определения (нг):

амбуш - 10,  рипкорд - 3,  сумицидин - 5,  децис - 5.   Время   удерживания

пиретроидов приведено в таблице 72.

 

Таблица 72

 

ВРЕМЯ УДЕРЖИВАНИЯ ПИРЕТРОИДОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ

УСЛОВИЯХ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

 

┌────────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

│      Препарат      │             Неподвижная фаза              │

│                    ├─────────────────────┬─────────────────────┤

│                    │    5% SE-30 <*>     │    3% OV-1 <**>     │

├────────────────────┼─────────────────────┼─────────────────────┤

│Амбуш               │1 мин. 24 с          │1 мин. 57 с          │

│Рипкорд             │2 мин. 30 с          │2 мин. 20 с          │

│Сумицидин           │3 мин. 06 с          │-                    │

│Децис               │3 мин. 36 с          │3 мин. 30 с          │

└────────────────────┴─────────────────────┴─────────────────────┘

 

--------------------------------

<*> Длина колонки 0,5 м. Температура (°C): испарителя - 240, колонки - 220, детектора - 250. Скорость потока азота 60 мл/мин.

<**> Длина колонки 1 м. Температура (°C): испарителя - 270, детектора - 280. Скорость потока азота 30 мл/мин.

 

Для идентификации амбуша (перметрина) может быть использована колонка длиной 1 м с 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW. Температура испарителя и детектора 270 °C, колонки - 240 °C. Скорость азота 60 мл/мин. Время удерживания амбуша 7 мин. 30 с.

Тонкослойная хроматография. Экстракт после определения методом ГЖХ упаривают до 0,2 - 0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Помещают пластинку в камеру, содержащую смесь растворителей гексан-ацетон (4:1). После развития хроматограмм и высушивания на воздухе пластинку обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

При обработке раствором нитрата серебра после облучения УФ-светом в течение 5 мин. пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен. Нижний предел определения рипкорда 3 мкг, амбуша, дециса, сумицидина - 5 мкг.

При обработке 10-процентным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этиловом спирте нижний предел определения составляет 3 - 10 мкг.

    Хроматограммы   на   пластинках   "Силуфол"   УФ      до   опрыскивания

                                                    254

проявляющими  реагентами  можно  просматривать  в  хроматоскопе. В УФ-свете

(лямбда  =  254 нм)  пиретроиды  обнаруживаются  в  виде  темных  пятен  на

флуоресцирующем фоне. Предел обнаружения - 3 мкг.  Величины R   пиретроидов

                                                             f

на   пластинках   "Силуфол"   при   использовании  в  качестве   подвижного

растворителя  смеси  гексана с ацетоном  (4:1)  равны:  для  амбуша - 0,61,

рипкорда - 0,44, сумицидина - 0,34, дециса - 0,45.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения пиков пробы и стандарта (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

 

                                    C  V S

                                     ст 2

                                X = ------,

                                    S  V P

                                     ст 1

 

    где:

    C   - количество  препарата  во  введенном  в  хроматограф  стандартном

     ст

растворе, нг;

    S   - площадь  пика  стандартного  раствора  пиретроида,  введенного  в

     ст

хроматограф, кв. мм;

    S - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

     1

    V  - объем анализируемого экстракта после упаривания, мл;

     2

    P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

    При использовании метода ТСХ содержание препарата в пробе (X, мг/кг или

мг/л) рассчитывают по формуле:

 

                                      A

                                  X = -,

                                      P

 

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера или интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.