Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 декабря 1982 г. N 2648-82
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО
ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение к N 1350-75)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических указаний
устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемого пестицида
Дифос(0,0,0',0'-тетраметил 0,0',-тио-ди(парафенил)тиофосфат).
S S
│ ---
--- │
(CH O) P-O-// \\-S- // \\-O-P(OCH ) .
3
2 \ ___ / \ ___ / 3 2
--- ---
Эмпирическая формула - C H O P
S .
16 20 6 2 3
М.м. 466.
Синонимы: абат,
абат 500 Е, абат 4Е, ОМ, S-736.
Химически чистое вещество -
белые кристаллы. Технический препарат -
коричневая жидкость,
содержащая 90 - 95% действующего
вещества. Препарат
не растворим
в воде, хорошо
растворяется в органических
растворителях
(ацетоне, гексане, хлороформе,
эфире, ацетонитриле). Устойчив
к воздействию
слабых щелочей
(при рН 8 и температуре 20 °С гидролизуется в
течение
нескольких недель).
Выпускается в форме 30-процентного к.з. Зарубежный
аналог дифоса - абат
выпускается в форме
50-процентного к.з. и
25-процентного с.п. Относится
к малотоксичным соединениям.
ЛД при
50
введении препарата
в желудок белых крыс составляет 1360 - 2300 мг/кг, для
белых мышей -
460 мг/кг. Проникает через кожу. Для кроликов при накожном
нанесении ЛД - 970 -
1930 мг/кг. Раздражающее действие выражено
слабо.
50
Коэффициент
кумуляции - 5,7.
Применяется в качестве инсектицида
контактно-кишечного действия. Высокоэффективен в
борьбе с личинками комаров, мух, а также с вредными насекомыми домашних
животных. Эффективен и для защиты сельскохозяйственных
культур от вредных клопов, трипсов и других
насекомых. ДОК в сахарной свекле, овощах, цитрусовых и хлопковом масле - 0,3
мг/кг, в мясе и яйце - 1 мг/кг, в молоке - не допускается.
2. Методика
определения дифоса в продуктах животного
происхождения методом тонкослойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении препарата из
тканей животного ацетоном, осаждении коэкстрактивных
веществ из водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на
холоду, последующем переэкстрагировании
дифоса в гексан, хроматографировании на пластинках "Силуфол",
в двух системах растворителей: н-гексан - ацетон и диэтиловый эфир - н-гексан. Для
проявления хроматограмм применяют раствор бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей
обработкой лимонной кислотой. Количественное определение проводят путем
визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен препарата из
анализируемых проб и стандартных растворов.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода.
- Диапазон определения концентраций - 0,2
- 25 мкг дифоса в анализируемой пробе;
- Предел обнаружения - 0,2 мкг или 0,02 -
0,05 мг/кг, мг/л;
- Размах варьирования - 70 - 90%;
- Среднее значение определения
стандартных количеств дифоса - 79,8%;
- Стандартное отклонение - 4,8;
- Относительное стандартное отклонение -
0,06;
- Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 10 - 79,8 +/- 5,7.
2.2. Реактивы и
материалы
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-79;
н-Гексан, хч, ТУ-6-09-3375-78;
Эфир диэтиловый
(для наркоза);
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76;
Натрий едкий, хч,
ГОСТ 4328-66;
Уксусная кислота (ледяная), чда, ГОСТ 61-69;
Свинец уксуснокислый или свинец
уксуснокислый основной, чда, ТУ 6-09-4140-76;
Лимонная кислота, чда,
ГОСТ 3652-69;
Бромфеноловый синий, чда, ТУ МГ УХП 271-59;
Серебро азотнокислое, ч,
ГОСТ 1277-75;
Дифос - стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл препарата.
2.3. Приборы
аппаратура и посуда
Пластинки "Силуфол"
производства ЧССР;
Центрифуга лабораторная стандартная ИЛС-3
или аналогичная (объем стаканов 80 - 100 мл);
Шкаф вытяжной;
Шкаф сушильный;
Аппарат для встряхивания АВУ-1 или
аналогичный;
Весы технические;
Весы торсионные, тип ВТ,
ТУ 64-1-900-77;;
Посуда химическая
по ГОСТ 23932-79Е (колбы конические с притертыми пробками - 100 мл; воронки
делительные - 200 мл; воронки конические - 5 см; пробирки мерные - 10 мл;
цилиндры - 10, 50, 100 мл; пипетки, микропипетки, стаканы химические);
Чашки фарфоровые выпарительные дм 5 - 7 см;
Камеры хроматографические;
Камера для опрыскивания хроматограмм;
Опрыскиватели стеклянные.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление 20-процентного
водного раствора уксуснокислого свинца:
20 г уксуснокислого свинца растворяют в
80 мл дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца
20 г его растворяют при легком подогревании в 80 мл 5-процентной уксусной
кислоты и рН раствора доводят едким натрием до 5,4 - 5,6. Хранят в закрытой
посуде.
2.4.2. Приготовление 10-процентного
водного раствора уксусной кислоты.
10 мл ледяной уксусной кислоты смешивают
с 90 мл дистиллированной воды.
2.4.3. Приготовление проявляющегося
реактива:
Реактив 1,25 мг бромфенолового
синего растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50
мл 0,25-процентным раствором азотнокислого серебра (0,125 г азотнокислого
серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и добавляют 35 мл ацетона).
Хранят в закрытой посуде из темного стекла при температуре +4 - 6 °С в течение месяца.
Реактив 2,2-процентный раствор лимонной
кислоты. 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят
в закрытой посуде при температуре +4 - 6 °С в течение
5 - 6 дней.
2.4.4. Отбор проб производят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб
сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР
21.08.1979 за N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов.
Навеску
мяса, печени, почек, легкого, сердца
по 10 г, жира 2 - 3 г
измельчают
ножницами и помещают в колбу с притертой пробкой, молока берут
10 мл. Пробы
заливают 10 мл ацетона, тщательно перемешивают и экстрагируют
на аппарате
для встряхивания в
течение 80 минут.
Ацетоновый экстракт
фильтруют в
чистую колбу через воронку с ватным
фильтром. Пробы промывают
10 мл ацетона и
пропускают через тот же фильтр. К объединенному ацетоновому
экстракту приливают
20 мл дистиллированной воды,
2 мл раствора
уксуснокислого свинца
и помещают в
испаритель холодильника на 1 час.
(Экстракты жира
лучше оставлять в испарителе холодильника
на ночь.) После
этого содержимое переносят в центрифужные стаканы
и центрифугируют на
-1
протяжении 3 - 5
мин. при
частоте вращения 3000
мин. Надосадочную
жидкость сливают
в чистую делительную воронку.
(Если на поверхности
экстракта имеются
взвешенные частицы, его дополнительно
фильтруют через
воронку
фильтром.) В делительную воронку
добавляют 10 мл 10-процентной
уксусной кислоты
и 60 мл дистиллированной воды. Дифос реэкстрагируют из
этой смеси трижды
н-гексаном,
используя каждый раз 10
мл экстракта.
При плохом
разделении слоев, в связи с образованием
эмульсии, добавляют
5 мл насыщенного
раствора натрия сернокислого.
Объединенные гексановые
экстракты сушат над натрием сернокислым безводным в течение 10 - 15 минут.
Упаривание экстракта проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до
объема 0,2 - 0,3 мл.
2.5.2. Хроматографирование.
Сконцентрированный гексановый
экстракт наносят на пластинку "силуфол" на
расстоянии 1,5 см от нижнего края и 3,5 см от правого вертикального края.
Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.
Для выявления дифоса
используют двухмерную хроматографию. Сначала пластинку помещают в хроматографическую камеру горизонтально (на левый край),
куда налита смесь ацетона с гексаном (1:5). После
того, как фронт растворителей пройдет всю пластинку, ее подсушивают на воздухе
и данную процедуру повторяют еще дважды.
Слева от нанесенной пробы наносят на
пластинку стандартный раствор дифоса. Пластинку
помещают в вертикальном положении в камеру со смесью растворителей эфир - н-гексан (1:2). Общий объем подвижных растворителей в камере
подбирают таким образом, чтобы хроматографические
пластинки погружались на 0,4 - 0,5 см. После того, как фронт растворителей
поднимется на высоту 10 см от старта, пластинку вынимают и сушат на воздухе.
2.5.3. Проявление.
После испарения растворителей пластинку
опрыскивают бромфеноловым синим с азотнокислым
серебром и помещают на 5 минут в сушильный шкаф при температуре 30 °С. Затем пластинку опрыскивают раствором лимонной кислоты. Дифос проявляет в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне.
На обработку одной пластины расходуют 3 - 5 мл проявляющих реактивов. Величина Rf составляет 0,32.
2.6. Обработка
результатов
Количество дифоса
в анализируемом объеме определяют путем сравнения площади и интенсивности
окраски пятна пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы:
А х 1,25 100
Х = -------- х ----, мк/кг или мг/л,
М К
где:
К - количество препарата в исследуемом
материале (мк/кг; мг/л);
А - количество препарата, выявленное на
пластинке (мкг);
М - масса исследуемой пробы (г, мл);
1,25 - поправка с учетом потерь пестицида
в процессе анализа.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые при работе с химическими реактивами.