Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
12 мая 1983 г. N 2782-83
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ
ФЕКАМА-ТРИБУФОНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
CH O O
3 \││
P-CH-CCl
/ │ 3
CH O O-CO-C H М.м. 327,5.
3 3 7
Фекама-трибуфон (бутонат) - активное вещество
0,0-диметил-(1-бутирокси-2,2,2-трихлорэтил)фосфонат.
Технический
продукт - прозрачная
маслянистая жидкость от желтого до
желто-коричневого цвета.
Нерастворим
в воде, растворим
в большинстве
органических растворителей. Устойчив
в нейтральной и слабокислых
водных
-3
средах. Давление
паров - 4 х 10
мм рт. ст. при 20 °С, летучесть - 71,7
мг/куб. м при 20
°С. ЛД для крыс - 1780 мг/кг.
50
I. Характеристика
метода
1. Определение основано на: а)
газожидкостной хроматографии фекама-трибуфона с
детектором постоянной скорости рекомбинации. Избирательность метода
обеспечивается использованием различных подвижных фаз. Для
дополнительной идентификации определение можно проводить на термоионном
детекторе;
б) хроматографировании
препарата в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зон локализации
препарата путем обработки растворами различных проявляющих реагентов: 1)
последовательная обработка пластинок 1-процентным раствором
4-нитробензил-пиридина в ацетоне, затем 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне; 2) раствором азотнокислого
серебра в ацетоне с последующим облучением УФ-светом.
2. Отбор проб воздуха с концентрированием
(бумажный фильтр "синяя лента", смесь ацетон - вода (7:3)).
3. Предел измерения в анализируемом
объеме пробы -
ГЖХ - 2,0 нг в
5 мкл;
ТСХ - 2 мкг.
4. Предел измерения в воздухе - 0,4
мг/куб. м.
5. Диапазон измеряемых концентраций -
ГЖХ - 0,4 - 8 мг/куб. м;
ТСХ - 0,5 - 15 мг/куб. м.
6. Определению не мешают другие
фосфорорганические пестициды.
7. Граница суммарной погрешности
измерения -
ГЖХ - 14,6%, ТСХ - 15,9%.
8.
ПДК фекама-трибуфона в
воздухе не установлен. ОБУВ
= 1,2
расч
мг/куб. м.
II. Реактивы,
растворы, материалы
Фекама-трибуфон, х.ч.
Основной стандартный раствор фекама-трибуфона, содержащий 500 мкг/мл действующего
вещества, готовят растворением 50 мг препарата в 100 мл ацетона в мерной колбе
с притертой пробкой. Хранят в холодильнике в течение 2-х месяцев.
Стандартный раствор фекама-трибуфона,
содержащий 10 мкг/мл действующего вещества в ацетоне. Хранят в холодильнике в
течение 2-х недель.
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79.
Бензол, ч., ГОСТ 5955-75.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ
4166-76.
Хлороформ, х.ч.,
ГОСТ 20015-74.
К методу ТСХ
Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.
Проявляющие реагенты:
N 1. а) 1-процентный раствор 4-(п-нитробензил)пиридина в ацетоне;
б) 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне.
N 2. Раствор азотнокислого серебра: 0,5 г
азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл
25-процентного аммиака, смесь доводят до 100 мл ацетоном.
Подвижный растворитель: бензол - ацетон
(3:1).
Азотнокислое серебро, х.ч.,
ГОСТ 1277-81.
Аммиак водный, ч., ГОСТ 3760-79.
К методу ГЖХ
Носитель хроматон
N-AW (80 - 100 меш) с 5% SE-30 или QF-17.
Азот газообразный особой чистоты,
содержание кислорода не более 0,003%, ГОСТ 9293-74.
III. Применяемая
посуда и приборы
Электроаспиратор для отбора проб воздуха, ТУ 64-1-862-77.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,
ТУ 25-11-917-74.
Склянка для промывания и очистки газов
(склянка Дрекселя) ТУ-25-11-1062-75.
Воронки делительные емк. 250 мл, ГОСТ
1770-74.
Колбы конические со шлифами емк. 100 мл,
ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные емк. 50, 100 мл, ГОСТ
10394-72.
Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Фильтры бумажные обеззоленные
"синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.
Пипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Цилиндры мерные емк. 50, 100 мл, ГОСТ
1770-74.
К методу ТСХ
Камера хроматографическая,
ГОСТ 10565-75.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Пластинки "Силуфол"
(Chemapol, ЧССР).
К методу ГЖХ
Газовый хроматограф с детектором по
захвату электронов (детектором постоянной скорости рекомбинации - ДПР) марки
"Цвет-106", "Цвет-110", "Газохром
1109" и др.
Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренний
диаметр 3 мм.
IV. Условия отбора
проб воздуха
Воздух со скоростью 0,5 л/мин.
последовательно аспирируют через помещенный в фильтродержатель бумажный фильтр "синяя лента" и
для поглощения паров через склянку Дрекселя со смесью
ацетон - вода 100 мл (7:3). Отбирают 10 л воздуха. Длительность хранения проб в
холодильнике не более 2 дней.
V. Условия анализа
Бумажные фильтры, содержащие аэрозоль, из
фильтродержателя помещают в коническую колбу и
заливают 40 мл ацетона. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 1 часа.
Экстракцию повторяют трижды. Экстракт сушат сернокислым натрием безводным (20
г) и сливают в колбу для отгонки растворителя. Смесь ацетон-вода из поглотителя
переносят в делительную воронку, прибавляют 100 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют препарат дважды по 30 мл хлороформа.
Объединенный хлороформный экстракт сушат сернокислым натрием безводным (20 г) и
сливают в колбу для отгонки растворителя, объединяя с экстрактом из фильтров.
Отгоняют растворитель под вакуумом при температуре бани 40 °С
до объема 0,2 - 0,3 мл. Досуха упаривают на воздухе. Остаток в колбе растворяют
в 1 мл гексана и хроматографируют
(ГЖХ и ТСХ).
Определение методом
газожидкостной хроматографии
Носитель - хроматон
N-AW (0,16 - 0,20 мм).
Ввод через самоуплотняющуюся мембрану.
Вводимый объем - 5 мкл.
Условия анализа приведены в таблице 1.
Таблица 1
УСЛОВИЯ АНАЛИЗА
┌────────────────────────────┬─────────────┬──────────────────┬───────────┐
│Хроматографические параметры│ ДПР
│ ДПР │ ТИД
│
├────────────────────────────┼─────────────┼──────────────────┼───────────┤
│Неподвижная
фаза │5% SE-30 │4% SE-30 + 6% QF-1│5%
SE-30 │
│Температура
колонки │180 °С │180
°С │200 °С │
│Температура
испарителя │220 °С │210
°С │210 °С │
│Температура
детектора │220 °С │230
°С │210 °С │
│Скорость
азота, мл/мин. │70 │70 │22 │
│Время
удерживания │2 мин. │3 мин. │2 мин. 23 с│
│Минимально
детектируемое │2 нг │0,4 нг │4 нг │
│количество │ │ │ │
│Линейный
диапазон │2 - 30 нг │1,25 -
10 нг │4
- 20 нг │
│детектирования │ │ │ │
│ │ -12
│ │ │
│Шкала
электрометра │-20 х 10 А│ │ │
└────────────────────────────┴─────────────┴──────────────────┴───────────┘
Количественное определение проводят
методом абсолютной калибровки. Для этого перед и после анализа проб вводят в
хроматограф по 5 мкл стандартного раствора препарата
N 2, измеряют высоту пиков и вычисляют среднее арифметическое из 5 определений.
Если при введении в хроматограф аликвотной части (5 мкл)
конечного экстракта получают слишком большие пики или происходит "зашкаливание", что свидетельствует о наличии большого
количества анализируемого вещества, готовят более разбавленные растворы,
добавляя в конечный раствор пипеткой замеренное количество гексана.
Концентрацию препарата в мг/куб. м (Х) в
воздухе вычисляют по формуле:
G х H х V
2 1
Х = ------------,
H х V х V
1 20
где:
G
- количество препарата
в стандартном растворе,
введенном в
хроматограф,
мкг;
H -
высота пика препарата в стандартном растворе, мм;
1
H -
высота пика препарата в анализируемом растворе, мм;
2
V - объем раствора пробы, введенный в
хроматограф, мл;
V -
общий объем раствора пробы, мл;
1
V -
объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным
20
условиям, л.
Определение методом
тонкослойной хроматографии
Экстракт после газожидкостного
определения доупаривают до 0,2 - 0,3 мл и
количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую
пластинку "Силуфол" так, чтобы диаметр пятна
не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от нижнего края
пластинки. Колбочку с экстрактом 2 - 3 раза омывают небольшими порциями эфира,
который также наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на
расстоянии 2 см от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 3,5 или 10
мкг действующего вещества препарата.
Пластинку с нанесенными растворами
помещают в хроматографическую камеру, в которую
налита смесь растворителей бензол - ацетон в соотношении 3:1. Время насыщения камеры
15 - 20 минут. Край пластинки не должен быть погружен в раствор более чем на
0,5 см. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку
поднимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения подвижного
растворителя. Затем пластинку обрабатывают одним из проявляющих реактивов:
1) 1-процентным раствором 4-(п-нитробензил)пиридина, нагревают пластинку в течение 5 минут
при температуре 110 °С, затем обрабатывают
10-процентным раствором тетраэтиленпентамина. Фекама-трибуфон проявляется в виде ярких фиолетово-синих
пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения - 0,5 мкг;
2)
раствором азотнокислого серебра
в ацетоне, затем
помещают под
источник УФ-света на 3 мин. Фекама-трибуфон
проявляется в виде черных пятен
на сером фоне. Нижний предел
обнаружения - 2 мкг. R фекама-трибуфона в
f
системе
бензол-ацетон (3:1) составляет 0,68 +/- 0,05.
В
качестве подвижного растворителя можно использовать смесь гексан-
ацетон (1:1),
R = 0,68 +/- 0,05.
f
Количество препарата в пробе определяют
сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.
Измерение площади проводится с помощью миллиметровой бумаги. Строится
калибровочный график зависимости количества препарата (в мкг) от площади пятна
(кв. мм). Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием
препарата в пятне соблюдается в интервале 1 - 10 мкг. Если содержание препарата
в пробе превышает 10 мкг, то для нанесения на пластинку необходимо брать
аликвотную часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.
Концентрацию препарата в мг/куб. м
воздуха (X) вычисляют по формуле:
G х V
1
X = -------,
V х V
20
где:
G
- количество препарата, найденное в анализируемом объеме
раствора,
мкг;
V -
общий объем пробы, мл;
1
V - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;
V -
объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным
20
условиям, л.
VI. Требования
техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими
веществами.
VII. Разработчики
ВНИИГИНТОКС, Киев.