Утверждены

Минздравом СССР

12 мая 1983 г. N 2803-83

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА

ПЛИКТРАН И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (ОКСИДА ДИЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВА,

ЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВЯННОЙ КИСЛОТЫ) В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ

МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ И ОЛОВА

В ТЕХ ЖЕ СРЕДАХ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны Ю.А. Бунятяном, Г.О. Оганесяном (Филиал ВНИИГИНТОКС); Е.Н. Овсепян (Ереванский Государственный Университет).

 

    Пликтран  -  трициклогексилоловогидроксид.   Брутто-формула  C  H  OSn.

                                                                  18 34

Молекулярная  масса  385,26.  Общепринятое  название  цигексатин,  торговые

названия - пликтран, тенхайд.

Химически чистое д.в. препарата пликтран - белое кристаллическое соединение с т. пл. 245 °C. Т. пл. технического продукта (95 - 96-процентной чистоты) 196 - 198 °C. Пликтран растворим в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан, метанол, ацетилацетон и др.), растворимость в воде ограничена (менее 1 мг/л). Пликтран стабилен при температуре до 52 °C. Водная суспензия пликтрана стабильна в слабокислой и щелочной средах. При взаимодействии с сильными кислотами образуется соль. Препаративная форма пликтрана стабильна в течение двух лет при хранении в нормальных условиях.

Трициклогексилоловогидроксид под воздействием УФ-лучей, а также в воде, почве, растениях и животном организме превращается в дициклогексилоловооксид, циклогексилоловянную кислоту и неорганическое олово.

Пликтран - высокоэффективный акарицид для наземного опрыскивания плодово-ягодных, цитрусовых, овощных, бахчевых культур и хлопчатника против растительноядных клещей, включая популяции, устойчивые к органофосфорным или другим акарицидам. Активен как фунгицид. МДУ в хлопковом масле - 0,01 мг/кг, в винограде, яблоках - не допускается, ПДК в воде - 0,001 мг/л, ОДК в почве - 0,1 мг/кг, ДСД - 0,0075 мг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении трициклогексилоловогидроксида, дициклогексилоловооксида и циклогексилоловянной кислоты из анализируемой пробы и хроматографировании смеси веществ в тонком слое на пластинках "Силуфол", проявлении хроматограмм спиртовым раствором гематоксилина (можно также кверцетином или пирокатехоловым фиолетовым), а затем извлечении из той же пробы неорганического олова методом влажного сожжения и последующем определении продукта его реакции с дитиолом методом спектрофотометрии.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 44.

 

Таблица 44

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЛИКТРАНА

 

┌──────────────────────────────┬────────┬────────────────────────┐

│          Показатель          │Опреде- │  Анализируемый объект  │

│                              │ляемое  ├─────┬─────┬────────────┤

│                              │вещество│вода │почва│растительный│

│                              │<*>     │     │     │  материал  │

├──────────────────────────────┼────────┼─────┼─────┼────────────┤

│Предел обнаружения в          │1       │0,3  │0,3  │0,3         │

│анализируемой пробе, мкг      │2       │0,3  │0,3  │0,3         │

│                              │3       │0,3  │0,3  │0,3         │

│                              │4       │10   │5    │2,5         │

│Предел определения,           │1       │0,003│0,003│0,003       │

│мг/л, мг/кг                   │2       │0,003│0,003│0,003       │

│                              │3       │0,003│0,003│0,003       │

│                              │4       │0,1  │0,1  │0,1         │

│Среднее значение определения  │1       │93,4 │95,5 │94,3        │

│(n = 15), %                   │2       │95,2 │95,2 │92,5        │

│                              │3       │96,0 │94,6 │83,12       │

│                              │4       │93,0 │87,0 │86,6        │

│Стандартное отклонение        │1       │6,84 │6,22 │6,87        │

│(n = 15), +/- %               │2       │5,02 │6,22 │5,77        │

│                              │3       │7,4  │5,32 │9,4         │

│                              │4       │6,71 │3,6  │5,47        │

│Доверительный интервал        │1       │8,48 │7,7  │8,52        │

│(n = 5, p = 0,95), +/- %      │2       │6,23 │7,7  │7,16        │

│                              │3       │9,18 │6,6  │11,66       │

│                              │4       │8,34 │4,48 │6,79        │

└──────────────────────────────┴────────┴─────┴─────┴────────────┘

 

--------------------------------

<*> 1 - трициклогексилоловогидроксид; 2 - дициклогексилоловооксид; 3 - циклогексилоловянная кислота; 4 - неорганическое олово.

 

Избирательность метода. Определению на мешают препараты акрекс, кельтан, антио, рогор, применяемые, как и пликтран, против растительноядных клещей.

    Реактивы   и   растворы.   Уксусная  кислота  х.ч.  н-Гексан  ч.  Олово

гранулированное  ч.д.а.  Хлороводородная  кислота  ч.д.а.,  водный  раствор

(1:3).  Вода  дистиллированная.  Серная  кислота  концентрированная ч.д.а.,

48-процентная,  44-процентная, 0,2 н  водные  растворы.  Гематоксилин х.ч.,

0,1-процентный  этанольный  раствор.  Этиловый  спирт х.ч.  Кверцетин х.ч.,

0,1-процентный этанольный раствор.  Пирокатехоловый  фиолетовый, индикатор,

ч.д.а.,  насыщенный  раствор в  этиловом  спирте.  Лимонная  кислота  х.ч.,

0,5-процентный  водный  раствор.   Натр  едкий  х.ч.,  5-процентный  водный

раствор.  Цинк-дитиол ч.д.а. Тиогликолевая кислота ч. Додецил-сульфокислоты

натриевая  соль ч., 2-процентный  водный  раствор.   Калий  йодид   ч.д.а.,

20-процентный  водный  раствор.  Уголь  активированный  марки БАУ. Бумажные

фильтры  обеззоленные  ("синяя  лента").  Натрия  сульфат  безводный ч.д.а.

Азотная  кислота  ч.д.а.   Хроматографические  пластинки  "Силуфол"  УФ   .

                                                                       254

Стандартные             растворы             трициклогексилоловогидроксида,

дициклогексилоловооксида,  циклогексилоловянной  кислоты  с содержанием 100

мкг в 1 мл смеси  гексан-уксусная  кислота (20:3), готовят из х.ч. веществ,

хранят  в  холодильнике  не дольше 1 мес. Стандартные растворы олова (500 и

100 мкг/мл). Растворы хранят в холодильнике в течение 3 мес.

Приборы и посуда. Весы технические. Весы аналитические. Спектрофотометр (СФ-16, СФ-26 или др.). Аппарат для встряхивания. Испаритель ротационный типа ИР-1М. Сита почвенные. Камера для хроматографирования. Камеру для опрыскивания. Пульверизаторы стеклянные. Осветитель ультрафиолетовый. Баня водяная. Плитка электрическая. Колбы: мерные на 25; 50; 100; 1000 мл; конические на 50; 100; 250 мл; круглодонные на 100 мл. Цилиндры мерные на 10; 20; 50; 100; 250 мл. Воронки лабораторные. Стаканы химические на 50 и 100 мл. Хроматографические колонки стеклянные размером 2 х 20 см. Воронки делительные на 250 мл. Пипетки на 0,1; 1; 5; 10; 15 и 20 мл. Стеклярус диаметром 4 мм.

Подготовка к определению. Приготовление растворов. Стандартные растворы трициклогексилоловогидроксида, дициклогексилоловооксида и циклогексилоловянной кислоты (100 мкг/мл): 25 мг х.ч. вещества помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют смесью гексана с уксусной кислотой (20:3). Из приготовленного раствора отбирают 10 мл в мерную колбу на 25 мл и доводят до метки смесью гексана с уксусной кислотой (20:3). Растворы необходимо как можно меньше держать на свету.

Стандартные растворы олова. Раствор N 1 - 500 мкг/мл. Растворяют 0,125 г гранулированного олова в 75 мл хлороводородной кислоты и доводят водой в мерной колбе до 250 мл. Раствор N 2 - 4 мкг/мл. Отбирают 8 мл стандартного раствора олова (500 мкг/мл) в колбу на 250 мл, добавляют 25 мл концентрированной серной кислоты и 2,5 мл концентрированной азотной кислоты. Нагревают до появления густого белого дыма серной кислоты. Добавляют 17,5 мл концентрированной хлороводородной кислоты, переносят в мерную колбу на 1 л и доливают до метки водой.

0,1-процентный раствор гематоксилина в 95-процентном этиловом спирте. Гематоксилин (0,1 г) помещают в колбу на 100 мл, добавляют 1 каплю концентрированной хлороводородной кислоты и доводят до метки 95-процентным этиловым спиртом. Реагент хранят в темной склянке не дольше недели.

0,1-процентный раствор кверцетина в 96-процентном этиловом спирте. Кверцетин (0,5 г) растворяют в 300 мл этилового спирта при слабом нагревании, охлаждают, добавляют 25 мл концентрированной хлороводородной кислоты и доводят объем до 500 мл этиловым спиртом. Реагент хранят в темной склянке не дольше недели.

0,5-процентный раствор лимонной кислоты. Лимонную кислоту (0,5 г) растворяют в 99,5 мл дистиллированной воды. Реагент хранят не дольше 1 мес.

48-процентный водный раствор серной кислоты. Разбавляют 1 объем концентрированной серной кислоты 1,83 объемами воды, приливая кислоту в воду. Хранят в сухом прохладном месте не дольше 3 мес.

44-процентный водный раствор серной кислоты. Разбавляют 1 объем концентрированной серной кислоты 2,17 объемами воды, приливая кислоту в воду. Хранят в сухом прохладном месте не дольше 3 мес.

0,2 н раствор серной кислоты. Концентрированную серную кислоту (5,56 мл) разбавляют водой до 1 л. Хранят в сухом прохладном месте не дольше 3 мес.

5-процентный водный раствор едкого натра. Растворяют 5 г едкого натра в 95 мл воды. Хранят в сухом прохладном месте не дольше 1 мес.

0,3-процентный раствор цинк-дитиола. К 0,075 г цинк-дитиола добавляют 4 капли тиогликолевой кислоты и 10 мл 5-процентного водного раствора едкого натра, взбалтывают до растворения, приливают к раствору 15 мл воды. Раствор должен быть прозрачным и бесцветным. Его готовят непосредственно перед использованием в количествах, достаточных для разового применения.

2-процентный водный раствор натриевой соли додецилсульфокислоты. Сухую соль (20 г) растворяют в мерной колбе на 1 л водой и доводят до метки. Хранят в сухом прохладном месте до 3 мес.

20-процентный водный раствор йодида калия. Растворяют 200 г йодида калия в 800 мл воды. Хранят в прохладном, защищенном от света месте. Срок хранения 20 дней.

Приготовление хроматографической колонки с активированным углем. В стеклянную колонку размером 2 х 20 см, снабженную краном и стеклянным фильтром, помещают 2 г активированного угля. Колонку перед употреблением промывают 25 мл смеси гексана с уксусной кислотой (20:3).

Построение градуировочного графика для определения неорганического олова. В мерную колбу на 50 мл вливают 1 мл стандартного раствора олова (4 мкг/мл) и разбавляют до 20 мл 44-процентной серной кислотой. Добавляют 3 капли тиогликолевой кислоты и 22 мл 2-процентного раствора натриевой соли додецилсульфокислоты, смешивают и добавляют 0,5 мл 0,3-процентного раствора цинк-дитиола, взбалтывают в течение 1 мин., затем добавляют воды до 50 мл.

Спектрофотометрируют в кварцевой кювете размером 10 х 10 мм при длине волны 530 нм, используя в качестве раствора сравнения воду. Повторяют процедуру, применяя шкалу стандартов (табл. 45). В качестве раствора сравнения также используют воду.

 

Таблица 45

 

ШКАЛА СТАНДАРТОВ

 

┌───────────────────────────────────────┬────────────────────────┐

│        Характеристика раствора        │    Номер стандарта     │

│                                       ├───┬────┬───┬───┬───┬───┤

│                                       │ 1 │ 2  │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │

├───────────────────────────────────────┼───┼────┼───┼───┼───┼───┤

│Стандартный раствор олова              │0  │1   │5  │10 │15 │20 │

│(4 мкг/мл), мл                         │   │    │   │   │   │   │

│Общее количество раствора в воде, мл   │50 │50  │50 │50 │50 │50 │

│Содержание олова, мкг/мл               │-  │0,08│0,4│0,8│1,2│1,6│

└───────────────────────────────────────┴───┴────┴───┴───┴───┴───┘

 

Строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс количества олова в мкг/мл, а по оси ординат - соответствующие им значения величины оптической плотности.

Транспортировка проб. Пробы транспортируют в защищенной от света таре. Анализы проводят в день отбора проб или на следующий день.

Ход анализа. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) переносят в коническую колбу на 250 мл и заливают 5 мл смеси гексан-уксусная кислота (20:3). Экстрагируют на встряхивателе в течение 5 мин. Переносят смесь в делительную воронку и разделяют водный слой. Гексановую фракцию собирают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл. Водный слой трижды экстрагируют смесью гексан-уксусная кислота (по 5 мл) и снова собирают в круглодонную колбу. Водный слой переносят в коническую колбу на 250 мл и сохраняют для определения неорганического олова.

Измельченную и просеянную почву (50 г) помещают в коническую колбу на 250 мл и заливают 30 - 35 мл смеси растворителей - гексана с уксусной кислотой (20:3). Экстрагируют на встряхивателе в течение 5 мин. Сливают экстракт через фильтр в колонку с активированным углем. Элюат собирают в круглодонную колбу. Экстракцию повторяют еще трижды тем же растворителем порциями по 10 - 15 мл и переносят через фильтр в ту же колбу, после очистки экстракта на колонке образец почвы оставляют для дальнейшего определения неорганического олова.

Измельченный растительный материал (25 - 30 г) помещают в коническую колбу на 250 мл и заливают 50 мл смеси гексан-уксусная кислота (20:3). Экстрагируют на встряхивателе в течение 5 мин. Декантируют растворитель через 5 г безводного сульфата натрия в колонку с активированным углем, и элюат собирают в колбу прибора для отгонки растворителя. Материал трижды экстрагируют порциями растворителей по 10 - 15 мл. Растительный материал оставляют для дальнейшего определения неорганического олова.

Хроматографирование и проявление хроматограмм. Удалив растворитель, сухой остаток растворяют в минимальном количестве смеси гексан-уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку при помощи капилляра. Через 5 мин. развивают хроматограмму в 59,5 мл системы подвижных растворителей: гексан-уксусная кислота (49:10,5). После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Хроматограммы проявляют одним из трех способов: 1) опрыскивание 1 мл 0,1-процентного раствора гематоксилина в 95-процентном этиловом спирте, УФ-облучение в течение 5 мин. и опрыскивание 1 мл 0,5-процентного водного раствора лимонной кислоты; 2) УФ-облучение в течение 10 мин. и опрыскивание 1 мл насыщенного этанольного раствора пирокатехолового фиолетового; 3) опрыскивание 1 мл 0,2 н раствора серной кислоты, УФ-облучение в течение 10 мин. и опрыскивание 1 мл 0,1-процентного этанольного раствора кверцетина.

    При  наличии  трициклогексилоловогидроксида,  дициклогексилоловооксида,

циклогексилоловянной   кислоты   в  пробе  на  хроматограмме,  обработанной

гематоксилином, появляются сиреневые пятна на розовом фоне; пирокатехоловым

фиолетовым   -   синие  пятна  на  светло-коричневом  фоне;  кверцетином  -

интенсивно   желтые   пятна   на   светлом  фоне.  Величина  R   составляет

                                                              f

соответственно 0,76 +/- 0,01; 0,26 +/- 0,01; 0,14 +/- 0,01.

Содержание трициклогексилоловогидроксида и его двух метаболитов в пробе находят путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен с пятнами стандартных растворов.

Определение олова. В колбы с образцами воды, почвы, растительного материала, оставшимися после экстракции оловоорганических соединений, добавляют 50 мл концентрированной серной кислоты и 7 - 8 г стекляруса. Оставляют на 15 - 20 мин., время от времени помешивая, затем под вытяжным шкафом нагревают до кипения на электроплите. Нагрев прекращают при появлении густых белых паров. Охлаждают до комнатной температуры, добавляют 50 мл воды и оставляют на 5 - 6 мин. Раствор декантируют в колбу на 300 мл. Остаток в колбе экстрагируют сначала 25 мл воды, а затем 25 мл хлороводородной кислоты (1:3) и снова 25 мл воды. Все эти экстракты сливают в ту же колбу на 300 мл и, добавив немного стекляруса, нагревают на плите до появления густого белого дыма серной кислоты. Охлаждают до комнатной температуры, добавляют 25 мл воды, 50 мл раствора, состоящего из трех равных по объему веществ: 20-процентного йодида калия, 48-процентной серной кислоты и воды. Перемешивают и переносят в делительную воронку. Колбу трижды ополаскивают гексаном порциями по 10 - 15 мл и переносят в ту же делительную воронку. Экстрагируют, водный слой отделяют, а гексановый слой переносят в высокий стакан на 200 мл. Водный слой еще раз экстрагируют 10 мл гексана и объединяют гексановые вытяжки. Добавляют 5 мл азотной кислоты и дают гексану испариться при комнатной температуре в вытяжном шкафу, оставив на ночь. Затем добавляют 4 мл серной кислоты и нагревают на электрической плите до появления густого белого дыма.

После охлаждения при комнатной температуре добавляют 10 мл воды, перемешивают и нагревают до тех пор, пока кислота не будет стекать со стенок стакана. Охлаждают и добавляют 15 мл воды, обмывая стенки стакана. Переносят раствор в мерную колбу на 50 мл, ополаскивают стакан 5 мл воды и переносят в ту же мерную колбу. Добавляют 0,02 мл стандартного раствора олова (100 мкг/мл), 3 капли тиогликолевой кислоты и 2 мл 2-процентного раствора натриевой соли додецилсульфокислоты, взбалтывают, добавляют к смеси 0,5 мл 0,3-процентного свежеприготовленного раствора цинк-дитиола и перемешивают в течение 1 мин. Доводят раствор водой до метки и спектрофотометрируют в кварцевой кювете при длине волны 530 нм, используя в качестве раствора сравнения воду.

Обработка результатов анализа. Количество оловоорганических соединений в воде, почве и растительном материале (X, мг/л или мг/кг) рассчитывают по формуле:

 

                                      A

                                  X = -,

                                      P

 

    где:

    A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;

    P - объем или масса исследуемой пробы, взятой для анализа, мл, г.

    Количество  олова  в  исследуемом  растворе  находят по градуировочному

графику. Концентрацию олова (X, мг/кг, мг/л) рассчитывают по формуле:

 

                                  (C - C )a

                                        о

                              X = ---------,

                                      A

 

    где:

    C - концентрация  олова  в  исследуемом растворе пробы, определенная по

градуировочному графику, мкг/мл;

    C  - концентрация олова в растворе холостого опыта, содержащего 0,02 мл

     о

стандартного раствора олова и все реактивы, определенная по градуировочному

графику, мкг/мл;

    a - объем исследуемого раствора, мл;

    A - объем или масса пробы, взятой для анализа, мл, г.

Требования безопасности. При работе с пликтраном и его метаболитами следует беречь глаза, руки, а также соблюдать все правила безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами.