Утверждены
Минздравом СССР
24 августа 1983 г. N 2827-83
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТАЧИГАРЕНА В ПОЧВЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).
Краткая
характеристика препарата. Действующее
начало препарата
тачигарен - 3-гидрокси-5-метил-изоксазол. Брутто - формула C H O N.
4 5 2
Молекулярная масса
99,08. Общепринятое название
- гимексазол. Чистое
вещество - бесцветные игольчатые кристаллы, т. пл. 86
- 87 °C. Стабильно к
действию кислот
и щелочей. Растворимость в воде при 25 °C 8,5 г в 100 мл,
хорошо растворим
в метаноле, ацетоне.
Препарат рекомендуется для
протравливания семян
сахарной свеклы. Применяется в виде 70-процентного
с.п.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении тачигарена из пробы дистиллированной водой
с последующим определением методом ТСХ. Оценка содержания тачигарена
на хроматограммах проводится сравнением площади и
окраски пятен стандарта с пятнами пробы. Для этих целей можно также
использовать денситометр.
Метрологическая характеристика метода.
Предел определения в почве 0,07 мг/кг. Для определения концентраций больших,
чем 1,0 мг/кг, берется аликвотная часть. Среднее значение определения стандарта
тачигарена 80%. Относительное стандартное отклонение
+/- 5,6%. Минимально открываемое количество на тонкослойных хроматограммах
1 мкг.
Реактивы и растворы. Аммиак водный, ч.д.а. Ацетон х.ч. Бензол ч.д.а. н-Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч. Сульфат
натрия безводный, ч.д.а. Нитрит натрия ч.д.а. Нитропруссид натрия ч.д.а, 0,5-процентный водный
раствор. Бромфеноловый синий ч.д.а.
Хлороводородная кислота ч. Ледяная уксусная кислота х.ч. Нитрат серебра ч.д.а.
Силикагель КСК, N 2. Силикагель ЛС 5/40 мю для тонкослойной хроматографии с 13%
гипса. Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч.
Хлороформ х.ч. Вода дистиллированная. Проявляющие
реагенты: N 1 (пластинку последовательно обрабатывают 0,5-процентным водным
раствором нитропруссида натрия, 10-процентным водным
раствором нитрита натрия, ледяной уксусной кислотой и затем помещают на 5 - 10
мин. в эксикатор, на дно которого налит 25-процентный водный раствор аммиака).
Необходимо использовать свежеприготовленный реактив; N 2 - в мерную колбу на
100 мл помещают 0,05 г бромфенолового синего, 10 мл
ацетона и доводят до метки 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором
азотнокислого серебра (0,5 г азотнокислого серебра растворяют в смеси 24 мл
ацетона и 76 мл дистиллированной воды). Годен для
употребления в течение месяца при хранении в темной склянке с притертой пробкой.
Стандартный раствор тачигарена в н-гексане 0,5 мг/мл. Годен для
употребления в течение 6 мес. при хранении в холодильнике.
Приборы и посуда. Ротационный испаритель.
Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Колбы: мерные на 100 мл; круглодонные
на 250 мл со шлифом. Делительные воронки на 1 л. Водяная баня. Микропипетки.
Электроплитки. Сушильный шкаф. Стеклянный лабораторный холодильник ХПТ. Аппарат
для встряхивания. Центрифуга лабораторная стационарная. Стеклянные пластинки
размером 150 x 150 мм. Пластинки "Силуфол".
Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок.
Камера для обработки пластинок. Камера хроматографическая.
Эксикатор.
Приготовление хроматографических
пластинок. Силикагель (14 г) и сернокислый кальций (1 г)
смешивают в 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин. Сорбционную массу (5
- 7 г) равномерно наносят на 1 одну пластинку и сушат при комнатной температуре
12 ч. Затем пластинки активируют в сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и
хранят в эксикаторе над слоем хлорида кальция.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстракта. При разработке методических указаний использована
серая суглинистая почва с содержанием гумуса 1,5 - 2,0%. Навеску воздушно-сухой
почвы (100 г), растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм,
помещают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 100
мл дистиллированной воды с pH 10 (водный раствор
аммиака) и экстрагируют тачигарен на аппарате для
встряхивания в течение 15 мин. Затем содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. Водный раствор
сливают, к остатку в стакане добавляют 50 мл дистиллированной воды с pH 10, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию
повторяют еще 2 раза. Объединенный водный экстракт переносят в делительную
воронку, доводят pH до 2 - 3 концентрированной хлороводородной кислотой, насыщают хлоридом натрия из
расчета 33 г на 100 мл экстракта и экстрагируют тачигарен
диэтиловым эфиром (100; 50 и 50 мл). Объединенный
экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) и упаривают на
ротационном испарителе (температура водяной бани 30 °C) до объема 0,5 - 1,0 мл.
Экстракцию из почвы можно также провести 100 мл смеси растворителей н-гексан-ацетон (4:2). После экстракции смесь растворителей
сливают через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия, а остаток в колбе
дважды промывают этой же смесью растворителей порциями по 50 мл и фильтруют.
Объединенный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 1,0 мл,
прибавляют 10 мл диэтилового эфира и фильтруют через
бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Колбу дважды ополаскивают эфиром
порциями по 10 мл, сливая растворитель через тот же фильтр. Объединенный
фильтрат упаривают до объема 0,5 - 1,0 мл.
Идентификация и
количественное определение тачигарена. Остаток после
упаривания эфирного
экстракта количественно наносят на хроматографическую
пластинку с тонким
слоем силикагеля (могут быть
использованы пластинки,
приготовленные в
лабораторных условиях, и пластинки "Силуфол").
На эту же
пластинку наносят
2; 5 и 10 мкг тачигарена и проводят хроматографирование в
системе растворителей
бензол-уксусная
кислота (4:1) в хроматографической
камере, насыщенной
в течение 2 ч парами
подвижных растворителей. Для
насыщения стенки
камеры обкладываются фильтровальной бумагой,
которая
пропитывается смесью
подвижных растворителей. После
окончания процесса
хроматографирования
пластинку извлекают из
камеры и сушат на воздухе в
вытяжном шкафу. Для
обнаружения тачигарена пластинку
последовательно
обрабатывают 0,5-процентным водным
раствором нитропруссида натрия,
10-процентным водным раствором нитрита натрия, ледяной
уксусной кислотой и
затем помещают
на 5 - 10 мин. в эксикатор,
на дно которого
налит
25-процентный водный раствор
аммиака. Тачигарен обнаруживается в виде
сине-фиолетовых пятен
на белом фоне с величиной R
0,72 +/- 0,01.
f
Минимально
открываемое количество на хроматограммах 1 мкг.
Для
повышения надежности
идентификации тачигарена хроматографирование
может быть также
проведено в системе растворителей бензол-ацетон (3:1). Для
обнаружения тачигарена пластинку
обрабатывают проявляющим реагентом N 2.
Тачигарен
обнаруживается в виде
светло-желтых пятен на
синем фоне с
величиной R
0,88 +/- 0,01.
Минимально открываемое количество
на
f
хроматограммах
2 - 3
мкг. Для определения
тачигарена
может быть
использовано также двукратное хроматографирование в хлороформе и затем в
системе
растворителей бензол-уксусная кислота (4:1).
Обработка результатов анализа. Оценку
содержания тачигарена в пробе проводят путем
сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с пятнами пробы. Для
определения содержания тачигарена в почве (X, мг/кг)
используют формулу:
100A
X = ----,
P
где:
A - количество тачигарена
в пробе, найденное сравнением со стандартом, мкг;
P - масса пробы, г.
Требования безопасности. Соблюдаются
общие требования безопасности, рекомендуемые при работе с пестицидами и
химическими реактивами.