Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
24 августа 1983 г. N 2854-83
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ РАУНДАПА
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
O
││
HN-CH -C-OH
│ 2
CH
│ 2
O=P-OH
│
OH
М.м. 170.
Раундап (синоним - глифосат, действующее начало -
N-фосфонометилглицин) - белое кристаллическое
вещество. Т. разложения 230 °С. Растворимость в воде при 25 °С - 1%. Плохо
растворим в органических растворителях. Практически не летуч. При применении
может находиться в воздухе в виде аэрозоля.
I. Характеристика
метода
1. Определение основано на хроматографировании раундапа в
тонком слое ионообменной смолы пластинок "Фиксион
50 х 8" с последующим обнаружением зоны локализации препарата с помощью
раствора нингидрина.
2. Отбор проб проводится с
концентрированием (фильтр АФА-ХА-20).
3. Предел измерения в анализируемом
объеме пробы - 1 мкг.
4. Предел измерения в воздухе - 0,5
мг/куб. м (при отборе 2 л воздуха).
5. Диапазон измеряемых концентраций - 0,5
- 15 мг/куб. м.
6. Определению раундапа
мешают соединения, содержащие в своем составе первичные и вторичные
аминогруппы, дающие цветную реакцию с нингидрином.
7. Граница суммарной погрешности
измерения +/- 12%.
8. Ориентировочно безопасный уровень
воздействия раундапа - 1,0 мг/куб. м.
II. Реактивы,
растворы, материалы
Раундап, хч.
Вода бидистиллированная.
Натрий тетраборнокислый,
чда, ГОСТ 4199-76, 0,05 М водный раствор (pH 9,18).
Нингидрин, чда, ТУ 6-09-2737-73.
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
Кадмий уксуснокислый, чда,
ГОСТ 5824-71.
Уксусная кислота (ледяная), хч, ГОСТ 61-75.
Этиловый спирт, 96%, ТУ 6-09-1710-77.
Медь азотнокислая (II), хч, ТУ 6-09-3757-74.
Азотная кислота, хч,
ГОСТ 4461-77.
Ионообменная смола КУ-2-8, ГОСТ 20298-74.
Соляная кислота, хч,
ГОСТ 3118-77, 25-процентный водный раствор.
Стекловата.
Пластинки хроматографические
"Фиксион 50 х 8" (ВНР).
Ионообменная хроматографическая колонка
с КУ-2-8, катионит КУ-2-8 с
размером зерен 0,4 - 1,5 мм, помещают в химический
стакан емкостью 250 мл,
заливают бидистиллированной водой
и оставляют на 24 часа для
набухания.
Воду затем
сливают, а катионит заливают
25-процентной соляной кислотой и
встряхивают на встряхивателе в течение
1 часа, затем промывают трижды
бидистиллированной
водой и осторожно
переносят вместе с
водой в
хроматографическую
колонку (высота столбика
смолы 16 - 17 см). Сверху
катионит уплотняют
тампоном из стекловаты. Через колонку пропускают 50 мл
25-процентной соляной
кислоты при скорости
элюации
3 - 4
мл/мин. и
промывают бидистиллированной водой до pH 7.
Переведенный
таким образом в
+
Н -форму катионит готов для проведения хроматографических
разделений.
Для регенерации катионита после хроматографического разделения колонку
заливают 10-процентным
водным раствором едкого
натра, оставляя его в
контакте с катионитом
в течение 30 -
40 минут. После этого раствор из
колонки удаляют,
а к катиониту прибавляют свежую
порцию раствора щелочи.
Такую обработку
катионита проводят 2 - 3 раза. Затем катионит промывают
+
бидистиллированной водой и переводят в Н -форму,
как описано выше.
Подвижная фаза: 0,05 М раствор натрия тетраборнокислого в бидистиллированной
воде.
Проявляющий реактив N 1: 1-процентный
раствор нингидрина в ацетоне. Стабилен
в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив N 2: 1 г кадмия
уксуснокислого в смеси 50 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл воды. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив 1а: 0,2-процентный
раствор нингидрина в этаноле и 3 мл ледяной уксусной
кислоты. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в
холодильнике.
Проявляющий реактив 2а: 1 мл насыщенного
водного раствора меди азотнокислой с 0,2 мл 10-процентной азотной кислоты
доводят до 100 мл этиловым спиртом. Стабилен в течение
1 месяца при хранении в холодильнике.
Стандартный раствор раундапа
в дистиллированной воде концентрации 1000 мкг/мл. Готовят из хч препарата. Стабилен в течение 1
месяца при хранении в холодильнике.
III. Приборы и
посуда
Денситометр БИАН-170, модель 714.
Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатели.
Фильтры АФА-ХА-20.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100, 1000
мл.
Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 50
мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 10394-72, на 250
мл.
Стаканы химические, ГОСТ 10394-72, на
100, 250 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1, 1, 2, 5 с
делениями.
Баня водяная, ТУ 46-22-608-75.
Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-76,
тип ИР-1М.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 1065-75.
Ванна термостатируемая
для хроматографической камеры.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-74.
Хроматографическая колонка (внутренний диаметр 1,5 см, высота 30 см).
Камера для опрыскивания.
Микрошприц МШ-10.
Шкаф сушильный.
Вентилятор или фен.
Встряхиватель, ТУ 64-1-1081-73, тип АВУ-1.
IV. Условия отбора
проб воздуха
Воздух со скоростью 2 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ХА-20. Для определения 1/2 ОБУВ
раундапа достаточно отобрать 2 л.
V. Условия анализа
Фильтры переносят в коническую колбу на
50 мл и экстрагируют трижды по 10 мл бидистиллированной
воды. Экстрагируют глифосат при периодическом
встряхивании в течение 10 - 15 минут. Объединенные экстракты вводят в хроматографическую колонку непосредственно на поверхность
катионита. Открывают кран колонки и собирают элюат в
химический стакан на 100 мл. После того как экстракт войдет в слой смолы,
промывают колонку еще 50 мл бидистиллированной воды и
собирают в тот же стакан. Переносят содержимое стакана в круглодонную колбу на
250 мл, ополаскивают стакан еще 10 - 15 мл бидистиллированной
воды и переносят в ту же колбу. Подсоединяют колбу к прибору для отгонки
растворителя под вакуумом и, нагревая на водяной бане не выше 40 °С, отгоняют воду, при этом температуру бани медленно
поднимают до 40 °С. Сухой остаток растворяют в минимальном количестве бидистиллированной воды и количественно наносят микрошприцом или пипеткой, последней предпочтительнее, на
пластинку "Фиксион 50 х 8" на 2 см от
нижнего края пластинки, не повреждая слоя смолы, и пятном не более 0,5 см в
диаметре, подсушивая рассеянной струей воздуха. Пластинку помещают в хроматографическую камеру с 1 см слоем 0,05 М раствора
натрия тетраборнокислого в бидистиллированной
воде. Хроматографическую камеру предварительно
помещают в термостатируемую водяную ванну (50 °С). Термостатирование осуществляют на все время развития хроматограммы восходящим способом. Хроматографическую
камеру в ванну устанавливают под небольшим наклоном, чтобы конденсирующиеся на
крышке камеры водяные капли стекали с нее по стенке
камеры, не попадая на хроматографическую пластинку.
Для этого достаточно подложить под одну из сторон камеры стеклянный валик диам. 1 см.
После окончания хроматографирования
(около 90 минут) пластинку высушивают на воздухе и обрабатывают проявляющими
растворами. Проявление проводят двумя возможными вариантами: 1) обрабатывают
пластинку смесью проявляющих растворов 1 и 2 (5:1 по объему), высушивают на
воздухе, а затем в сушильном шкафу 5 мин. при температуре 110
°С; 2) обрабатывают пластинку проявляющим реактивом 1а, высушивают на
воздухе и в сушильном шкафу 5 мин. при температуре 110 °С, а затем обрабатывают
проявляющим реактивом 2а.
Расход
всех реактивов для
обработки хроматограмм должен
быть
минимальным, а струя
растворов - рассеянной. Раундап проявляется в виде
розовато-красных
пятен на светло-желтом фоне пластинки (R
- 0,82).
f
Содержание вещества в пробе находят по
калибровочному графику, отражающему зависимость площади пятна от концентрации раундапа в пробе [S кв. мм = f(с)]. Для построения калибровочного
графика поступают следующим образом. На ряд пластинок наносят стандартные
растворы раундапа с содержанием 1; 2; 5; 10; 20; 30
мкг вещества. Развивают и обрабатывают хроматограммы,
как описано выше. Затем в отраженном свете при помощи денситометра БИАН-170
снимают денситограмму площади пятен и строят график
зависимости площади пятен от концентрации раундапа.
Линейная зависимость функции S кв. мм = f(с) сохраняется в пределах 1 - 30 мкг.
Определяя денситометрически
площадь исследуемого пятна, по графику находят содержание раундапа
в пробе.
Концентрацию раундапа
в воздухе (Х) в мг/куб. м рассчитывают по формуле:
G
Х = ---,
V
20
где:
G - количество раундапа,
найденное в пробе, мкг;
V -
объем пробы воздуха,
отобранного для анализа и
приведенного к
20
стандартным
условиям, л.
VI. Требования
безопасности
Соблюдать правила предосторожности при
работе с ядовитыми, взрыво- и легковоспламеняющимися
веществами.
VII. Разработчики
Армянский филиал ВНИИГИНТОКСа,
г. Ереван.