Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 апреля 1984 г. N 2990-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИКЛОРАМА В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Дополнение к Методическим указаниям по
определению торфена в почве, воде методом
газожидкостной хроматографии N 1978-79.
1. Краткая
характеристика препарата
1.1. Пиклорам.
1.2. 4-амино-3,5,6-трихлорпиколиновая
кислота.
1.3. NH
2 C H Cl
N O .
Cl /
\\Cl 6 3 3 2 2
││ │
Cl \
//COOH Мол. масса 241,46.
N
1.4. Тордон, хлорамп.
1.5. В чистом
виде белое кристаллическое
вещество со слабым запахом
хлора с Т пл. 209,5 - 210 °C и Т кип. 190 °C при 12 мм рт. ст. Константа
-3 -7
диссоциации 1,3
x 10 .
Упругость паров при 35 °C - 6 x 10
мм рт. ст.
Стабильно при
хранении. Растворимость (г/л при
25°) в воде -
0,43,
бензоле - 0,20, ацетонитриле -
1,60, этаноле - 1,05
и ацетоне -
1,98.
Малотоксичен для теплокровных: ПДК в почве 0,5 мг/кг,
содержание в капусте,
зерне хлебных злаков не допускается.
Применяется для борьбы с двудольными и трудноискореняемыми сорняками в посевах зерновых культур в
виде солей и в смеси с 2,4-Д и 2М-4Х, а также для уничтожения многолетних
сорняков.
2. Методика
определения пиклорама
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении пиклорама из растительных проб 0,05 М раствором гидроокиси
натрия и из почвенных образцов подкисленным щавелевой кислотой 50% водным
ацетоном; очистке экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися
растворителями и на колонке с окисью алюминия; последующем определении
газожидкостной хроматографией с детектором постоянной скорости рекомбинации. С
помощью предлагаемого метода можно определить пиклорам,
находящийся в растительном материале как в свободном,
так и в связанном состоянии в виде конъюгатов с
эндогенными веществами пробы.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество -
0,02 мг.
Нижний предел определения пиклорама в воде - 0,001 мг/л, в почве - 0,005 мг/кг, в
траве - 0,01 мг/кг, в сене - 0,05 мг/кг и в зерне - 0,01 мг/кг.
Размах варьирования, %:
вода 89,1 - 99,2; почва 84,2 - 102,2; сено 65,1 - 80,1; зерно 73,2 -
89,0.
Открываемость метода при добавлении стандартных количеств пиклорама
составляет (при p = 0,95 и n = 5) для воды 94,2 +/- 2,8; для почвы 91,6 +/-
4,1; для травы 79,2 +/- 5,3; для сена 74,0 +/- 6,4 и для зерна 82,4 +/- 6,6%.
2.1.3. Избирательность метода
Гербицид типа 2,4-Д и дитиокарбаматные
фунгициды (цинеб, поликарбацин)
определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Азот газообразный осч,
ГОСТ 9293-74.
4-Амино-3,5,6-трихлорпиколиновая кислота хч.
Метиловый эфир
4-амино-3,5,6-трихлорпиколиновой кислоты хч.
Ацетон хч, ГОСТ
2603-79.
Бензол хч, ГОСТ
5955-75.
н-Гексан ч, ТУ
6-09-3375-78, перегнанный.
Диэтиловый эфир (для наркоза), фармакопея СССР.
Калий марганцовокислый хч, ГОСТ 20490-75, насыщенный водный раствор.
Натрий углекислый кислый чда, ГОСТ 4201-79.
Натрий гидроокись хч,
ГОСТ 4328-77.
Натрий гидросернистокислый
ч, ТУ МХП ГХП 126-56, 5 М водный раствор готовится непосредственно перед
употреблением.
Натрий сернокислый безводный хч, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый хч,
ГОСТ 4233-77.
Алюминия
окись для хроматографии ч, ТУ
6-09-3916-75, прокаливается 4
часа при 600 °C
и хранится в эксикаторе над P O .
2
5
Серная кислота хч,
4204-77.
Соляная кислота хч,
ГОСТ 3118-77.
Фосфорная кислота хч,
ГОСТ 6552-80.
Щавелевая кислота хч,
ГОСТ 22180-76.
Хлороформ чда,
ГОСТ 3160-51, перегнанный.
Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% или 5% SE-30 (0,20 - 0,25 мм).
Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% OV-225 (0,20 - 0,25 мм).
Нитрозометилмочевина.
Диазометан, свежеприготовленный эфирный раствор из нитрозометилмочевины.
Стандартный раствор метилового эфира пиклорама в гексане с содержанием
0,1 - 1 мкг/мл.
2.3. Приборы и
посуда
Газовый хроматограф с детектором по
захвату электронов или постоянной скорости рекомбинации ("Цвет-5",
"Цвет-106", "Цвет-110" и др.).
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,
ТУ 25-112917-74.
Вакуумный водоструйный стеклянный насос,
ГОСТ 10696-75.
Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
Микрошприцы МШ-1, МШ-10, ГОСТ 20292-74.
Почвенное сито с диаметром отверстий 1
мм.
Колбы конические плоскодонные на 100 мл с
притертыми пробками КПШ-100-29/32, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, ГОСТ
1770-74.
Колбы Эрленмейера
на 100 мл без шлифов, КПШ-100, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные на 100 и 500 мл, ГОСТ
8613-75.
Фильтры стеклянные N 2 и N 4, ГОСТ
9775-69.
Концентраторы (грушевидные колбы на 50 и
100 мл) на шлифах (N 14 или N 19) КТУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.
Пробирки градуированные с притертыми пробками на 20 мл.
Пипетки Мора на 1, 5 и 10 мл.
Пипетки мерные на 0,1, 1 и 5 мл, ГОСТ
20291-74.
Фильтры бумажные ("красная
лента"), ТУ 6-09-1706-72.
Универсальная индикаторная бумага.
Воронки Бюхнера,
ГОСТ 9147-73.
Колбы Бунзена на 500 мл, ГОСТ 6514-75.
Центрифуга.
Пробирки конические центрифужные,
ГОСТ 10515-75.
Секундомер, ГОСТ 16820-71.
Кофейная мельница.
2.4. Отбор и
подготовка проб
Воду фильтруют от механических примесей и
отбирают среднюю пробу.
Предварительно высушенную до
воздушно-сухого состояния пробу почвы растирают и просеивают через сито с
диаметром отверстий 1 мм. Из просеянной пробы отбирают среднюю пробу массой 20
г.
Растительный материал предварительно
высушивают до воздушно-сухого состояния, размалывают на кофейной мельнице и
отбирают среднюю пробу массой 5 г.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстрагирование пиклорама и очистка экстракта
Вода. 200 мл воды после подкисления
концентрированной серной кислотой до pH 2,0 помещают
в делительную воронку вместимостью 500 мл и трижды экстрагируют хлороформом (по
40 мл), встряхивая каждый раз в течение 2 минут. Объединенный хлороформный
экстракт сушат над безводным сернокислым натрием, концентрируют досуха на
ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C, остаток метилируют раствором диазометана
в диэтиловом эфире в течение 10 минут. Эфирный
раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30
°C, остаток растворяют в 1 - 5 мл гексана и раствор хроматографируют на газовом хроматографе.
Почва. 20 г почвы помещают в коническую
колбу на 100 мл, приливают 40 мл 50% водного ацетона, подкисленного 0,1 М
щавелевой кислотой до pH 2,0, и перемешивают на механическом встряхивателе в
течение 1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр ("красная
лента") и аликвоту фильтрата (20 мл) переносят в
делительную воронку вместимостью 100 мл. Приливают 20 мл дистиллированной воды
и 30 мл хлороформа, смесь встряхивают в течение 2 мин. и отделяют слой
хлороформа. Экстракцию хлороформом повторяют еще 2 раза. Объединенный
хлороформный экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и далее поступают
так, как описано выше.
Зерно. Навеску размолотого зерна (5 г)
заливают в центрифужном стакане (вместимостью 50 мл)
10 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия и экстрагируют при перемешивании 15
мин. Образец центрифугируют 10 мин. при 5000 об./мин. Супернатант сливают в мерный
цилиндр вместимостью 50 мл. К осадку приливают еще 15 мл 0,05 М раствора
гидроокиси натрия, перемешивают 15 мин. и суспензию центрифугируют при
указанных выше условиях. Супернатант сливают в цилиндр,
доливают до 50 мл дистиллированной водой и перемешивают. В делительную воронку
вносят 30 мл экстракта, 2 мл 85% фосфорной кислоты, 6 г хлористого натрия и
экстрагируют трижды диэтиловым эфиром (20, 10 и 10
мл) встряхиванием в течение 2 мин. при каждой экстракции. Объединенный эфирный
экстракт упаривают на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха током
сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл диэтилового
эфира и раствор переносят на стеклянный фильтр N 4 (d
= 2,5 см) с 1 г прокаленной нейтральной окиси алюминия. Помещают фильтр на
колбу Бунзена и при слабом отсасывании промывают последовательно 30 мл диэтилового эфира и 30 мл ацетона. Пиклорам
элюируют 30 мл 0,03 М водного раствора углекислого
кислого натрия. Элюат подкисляют 2 мл 3 М раствора
серной кислоты, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора марганцовокислого калия
и оставляют на 3 мин. при 20 °C. Добавляют по каплям 5 М раствор гидросернистокислого натрия до обесцвечивания раствора. К
раствору прибавляют 6 г хлористого натрия и экстрагируют трижды диэтиловым эфиром (20, 10 и 10 мл). Объединенный эфирный
экстракт промывают дистиллированной водой (10 - 15 мл), упаривают растворитель
на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха током сухого воздуха. Остаток метилируют и подготавливают для газохроматографического
определения таким же образом, как и при анализе воды.
Трава, сено, солома. Измельченную навеску
(5 г) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой,
приливают 50 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия и помещают на аппарат для
встряхивания на 15 мин. Гомогенат фильтруют через
тканевый фильтр (бязь) и остаток промывают 20 мл 0,05 М раствора гидроокиси
натрия. Объединенный фильтрат пропускают через стеклянный фильтр N 2,
содержащий односантиметровый слой промытого
водой фильтоцела. Осадок промывают двумя порциями по
10 мл 0,05 М раствора гидроокиси натрия. Фильтрат переносят в мерный цилиндр и
доводят дистиллированной водой до 90 мл. Отбирают 30 мл экстракта и далее
анализ вплоть до метилирования проводят так, как
описано в предыдущем разделе. Полученный после метилирования
сухой остаток растворяют в 2 мл диэтилового эфира и раствор вносят на стеклянный фильтр N 4 (d = 2,5 см)
с 1 г прокаленной нейтральной окиси алюминия. Помещают фильтр на колбу Бунзена
и метиловый эфир пиклорама элюируют
30 мл диэтилового эфира. Элюат
концентрируют на ротационном испарителе до объема 2 мл и затем упаривают досуха
током сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл гексана
и аликвоту раствора хроматографируют
на газовом хроматографе.
2.5.2. Условия хроматографирования
Хроматограф "Цвет-106" или
другой модели с детектором по захвату электронов или постоянной скорости
рекомбинации.
Стеклянная
колонка длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, заполненная
хроматоном
N-AW-DMCS с 5%
SE-30. Температура колонки,
испарителя и
детектора соответственно 160,
230 и 240 °C. Скорость потока
азота через
колонку 40
мл/мин., через детектор - 150 мл/мин. Рабочая шкала электрометра
-12
20 x
10 А. Скорость
движения диаграммной ленты - 0,4
см/мин. Время
удерживания
метилового эфира пиклорама - 6,5 мин.
В хроматограф вводят 1 - 3 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования
сохраняется в пределах 0,02 - 1,6 мг.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение проводят
методом соотношения со стандартами по высоте хроматографических
пиков. Содержание пиклорама в анализируемой пробе
вычисляют по формуле:
H x C
x V x 100
пр ст
C =
-------------------,
H x V x
P x K
ст a
где:
C - содержание пиклорама
в пробе, мг/кг или мг/л;
H -
высота пика анализируемой пробы, мл;
пр
H -
высота пика стандарта, мм;
ст
C -
содержание пиклорама в стандарте, нг;
ст
V -
объем вводимой в хроматограф аликвоты
рабочего раствора, мкл;
a
V - общий объем рабочего раствора пробы,
мл;
P - количество анализируемой пробы, г или мл;
K - открываемость
пиклорама в анализируемом объеме, %.
2.7. Альтернативная
колонка для газожидкостной
хроматографии
Колонка стеклянная длиной 2 м и
внутренним диаметром 3 мм, наполненная носителем газ-хромом
Q (100 - 120 меш), пропитанным 3% OV-225. Температура колонки, испарителя,
детектора соответственно 180, 230 и 250 °C. Скорость потока газа-носителя
(азота) 40 мл/мин. Время удерживания метилового эфира пиклорама
11,37 мин.
3. Требования
безопасности
Общепринятые установленные требования
техники безопасности при работе с ЛВЖ, вредными химическими веществами,
электроприборами, сосудами под давлением и вакуумом.