Утверждены
Минздравом СССР
27 апреля 1984 г. N 2999-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АМИБЕНА В ПОЧВЕ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. Амибен -
2,5-дихлор-3-аминобензойная
кислота. Общепринятое
название - хлорамбен. Брутто
формула C H O Cl
N.
7 5 2 2
Молекулярная масса
206,04. Чистое вещество -
светло-фиолетовые кристаллы
без запаха с т.
пл. 200 - 201 °C. Препарат плохо растворим в воде (0,07% по
массе), разбавленных
кислотах, хлороформе, бензоле
и четыреххлористом
углероде.
Хорошо растворим в
спиртах, диэтиловом эфире,
ацетоне,
разбавленных щелочах. Применяют
во время предвсходовой обработки почвы для
борьбы с
сорняками на посевах томатов, моркови, сои.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении амибена из пробы водным раствором
гидрокарбоната натрия с последующим определением тонкослойной хроматографией.
Для оценки содержания амибена может быть
рекомендовано использование денситометра.
Метрологическая характеристика метода.
Предел определения амибена в лесостепной и
светло-серой суглинистой почве с содержанием гумуса 1,5 - 2,0% - 0,05 мг/кг.
Среднее значение определения 76,6%. Стандартное отклонение +/- 6,1%.
Реактивы и растворы. Аммиак водный ч.д.а. Ацетон х.ч. Нитрат серебра
ч.д.а. н-Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а.
Гидрокарбонат натрия ч.д.а. Оксид
алюминия нейтральный ч., прокаленный 4 ч
при 600
°C (сохраняется над P
O ). Хлороводородная кислота
ч. Уксусная
2 5
кислота
ледяная х.ч. Силикагель КСК, N 2. Силикагель ЛС 5/40 мю
для ТСХ с
13% гипса.
Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч. Вода
дистиллированная.
Проявляющий реагент: в мерную колбу на
100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака
и доводят до метки ацетоном. При хранении в плотно закрытой
склянке без доступа света годен для применения в течение 1 мес.
Стандартный раствор амибена в ацетоне (0,5 мг/мл).
Приборы и посуда. Ротационный вакуумный
испаритель. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Аппарат для встряхивания.
Центрифуга лабораторная стационарная. Колбы: мерные на 100 мл; плоскодонные со
шлифом на 500 мл; колба Бунзена на 500 мл. Делительные воронки на 500 мл. Баня
водяная. Микропипетки. Электроплитка. Сушильный шкаф. Круглодонные колбы на 250
мл со шлифом. Стеклянные пластинки размером 15 х 15 см. Пластинки "Силуфол". Сито капроновое (100 - 120 меш).
Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки
пластинок. Камера хроматографическая. Эксикатор.
Источники УФ-света. Воронка Бюхнера
диаметром 13 см. Фильтр стеклянный N 4.
Подготовка к анализу. Приготовление хроматографических пластинок. Гипс (14 г)
и сульфат кальция (1 г) смешивают с 50 мл дистиллированной воды в течение 10
мин. Сорбционную массу (5 - 7 г) равномерно наносят на одну пластинку (9 х 12
см) и сушат при комнатной температуре 12 ч. Затем пластинки активируют в
сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и хранят в эксикаторе над слоем
хлорида кальция.
Ход анализа. Воздушно-сухую почву (100 г),
растертую и просеянную через
сито с
размером отверстий 1 мм, помещают
в плоскодонную колбу с
пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 100 мл 0,03 М
водного раствора
гидрокарбоната натрия и экстрагируют амибен
на аппарате для встряхивания в
течение 30
мин. Затем содержимое колбы
переносят в центрифужный стакан и
центрифугируют в
течение 5 мин. Вместо
центрифугирования можно проводить
фильтрование под
вакуумом через фильтр
из стеклоткани. Водный раствор
сливают, к
остатку в стакане
добавляют 50 мл 0,03 М водного раствора
гидрокарбоната натрия,
перемешивают и снова
центрифугируют. Операцию
повторяют еще дважды. Объединенный водный экстракт
переносят в делительную
воронку на
500 мл, подкисляют хлороводородной
кислотой до pH 1 и трижды
экстрагируют амибен диэтиловым эфиром
(порциями 100; 50
и 50 мл).
Объединенный эфирный экстракт сушат над безводным
сульфатом натрия и затем
фильтруют через
1 г оксида
алюминия (нейтрального), помещенного
на
стеклянный фильтр
N 4 (диаметр 2,5 см). Затем амибен
элюируют из оксида
алюминия 50
мл 0,03 М
водного раствора гидрокарбоната натрия. Элюат
помещают в
делительную воронку, подкисляют хлороводородной
кислотой до pH 1
и трижды экстрагируют амибен
диэтиловым эфиром (порциями 340; 25 и 25 мл).
Объединенный эфирный
экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10
г) и
упаривают на ротационном
испарителе до объема 0,5 - 1,0 мл. Остаток
количественно наносят
на хроматографическую пластинку
"Силуфол",
предварительно
очищенную в растворе аммиака и затем выдержанную в
сушильном
шкафу при 120 °C в течение 15 мин. Можно
использовать и пластинки с тонким
слоем силикагеля,
приготовленные
в лабораторных условиях.
На эту же
пластинку наносят
1; 5 и 10 мкг амибена
и проводят хроматографирование в
системе растворителей
гексан-диэтиловый эфир-уксусная кислота
(25:25:1) в
камере, насыщенной
в течение 2
ч парами подвижных растворителей. Для
насыщения стенки
камеры обкладывают фильтровальной бумагой,
которая
пропитывается смесью
подвижных растворителей. После
окончания процесса
хроматографирования
пластинку извлекают из хроматографической
камеры и
сушат на
воздухе в вытяжном
шкафу. Для обнаружения амибена
пластинку
обрабатывают
проявляющим реагентом, сушат и облучают УФ-светом 10 -
15 мин.
Амибен обнаруживается в виде темных пятен на белом фоне с
величиной R 0,60
f
+/- 0,01.
Минимально обнаруживаемое количество на хроматограммах
1 мкг.
Обработка результатов анализа. Оценка
содержания амибена в пробе проводится путем
визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с
пятнами пробы. Содержание амибена в почве (X, мг/кг)
рассчитывают по формуле:
100A
X = ----,
P
где:
A - количество амибена
в пробе, найденное визуальным сравнением со стандартом, мг;
P - масса пробы, кг.
Требования безопасности. Соблюдают
правила безопасности, рекомендованные при работе с пестицидами и химическими
реактивами.