Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 апреля 1984 г. N 3001-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПЛАНТВАКСА В ЗЕРНЕ И ВОДЕ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
1. Краткая
характеристика препарата
Плантвакс (оксикарбоксин) -
2-метил-5,6-дигидро-1,4-оксатиин-4,4-диоксид-5-карбоновой кислоты анилид.
Структурная формула:
----
/
\
O
SO
\ ____ /
2
/ ---- \
H C
CONHC H
3 6 5
Эмпирическая формула: C H NO
S.
12 13 4
Молекулярная масса: 267,3.
Температура плавления: 127,5 - 130 °C.
В 1 л растворителя растворяется (г плантвакса): в воде 1, в бензоле 34, в ацетоне 360, в
метаноле 70, в этаноле 30.
Выпускается в виде 20-процентного к.э., 10-процентного дуста и 5-процентных гранул.
ЛД
для крыс - 2000 мг/кг.
50
Плантвакс - системный фунгицид, рекомендуемый для борьбы с ржавчиной пшеницы.
2. Методика
определения плантвакса в зерне и воде
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении пестицида из
исследуемой пробы хлороформом и дальнейшем определении методом хроматографии в
тонком слое адсорбента ("Силуфол",
силикагель).
В качестве подвижного растворителя
использовали смесь хлороформа и эфира в соотношении = 5:2.
Обнаружение зон локализации пестицида в
тонком слое сорбента основано на термическом либо
УФ-разложении препарата до аминосоединения, диазотировании его нитритом натрия в солянокислой среде и азосочетании полученных солей фенилдиазония
с N-(1-нафтилэтилендиамином) либо альфа-нафтиламином,
альфа-нафтолом.
Возможно обнаружение зон локализации плантвакса другим способом: УФ-разложение
препарата, N-галогенирование с последующим проявлением образующихся продуктов
о-толидином (или йод-крахмальным реактивом).
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Нижний предел обнаружения плантвакса с помощью реакции диазотирования
и азосочетания - 0,2 мкг (N-1-нафтилэтилендиамин),
0,5 мкг (альфа-нафтиламин), 1,0 мкг (альфа-нафтол), с
помощью реакции N-галогенирования - 0,5 - 1,0 мкг.
Чувствительность определения плантвакса в зерне - 0,07 мг/кг, в воде - 0,015 мг/л.
Средний процент определения заданных
количеств пестицида (0,1 мг/л или мг/кг) - 68,0 (в зерне), 35,0 (в воде),
стандартное отклонение 17,6% (зерно), 5% (вода).
Диапазон определяемых концентраций - 0,5
- 10 мкг.
Доверительный интервал среднего при P =
0,95 и n = 5 85,0 - +/- 4,9% (для воды) и 68,0 +/- 14,0% (для зерна).
2.2. Реактивы и
растворы
Алюминия окись II степени активности,
МРТУ 6-09-5296-68.
Ацетон хч, ГОСТ
2603-71.
Гипс
(кальций сернокислый CaSO x 2H O). В течение 2 суток прокаливают
4 2
при 180 °C и
просеивают через сито 100 меш.
Калия йодид хч,
ГОСТ 4232-74.
Кислота соляная хч,
ГОСТ 3116-77.
Калий едкий чда,
ГОСТ 9286-78.
Крахмал водорастворимый ч, ГОСТ 10163-76.
Метилен хлористый, ТУ 6-09-3716-74, хч.
Натрий азотистокислый
хч, ГОСТ 4197-75.
Пластинки "Силуфол"
(ЧССР).
Натрий сернокислый безводный, ГОСТ
4166-76, хч.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75, хч.
альфа-Нафтиламин
чда, ГОСТ 8827-74.
альфа-Нафтол чда,
ГОСТ 5838-70.
N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч, ТУ
6-09-2544-72.
о-Толидин, МРТУ
6-09-6337-69.
Силикагель "Л" (5 - 40 мк), ЧССР.
Хлороформ хч,
ГОСТ 200-15-74.
Эфир для наркоза, Госфармакопея
СССР.
Проявляющие реагенты (готовят
непосредственно перед проявлением): N 1: а) <*> К смеси, состоящей из 46
мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют 1
г азотистокислого натрия;
--------------------------------
<*> Расход реагентов на одну
пластинку - 5 мл.
б) N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид,
1-процентный раствор в этиловом спирте;
в) альфа-нафтиламин,
10-процентный раствор в этиловом спирте;
г) альфа-нафтол (3 г едкого калия
растворяют в 50 мл дистиллированной воды, прибавляют 0,5 г альфа-нафтола).
N 2. Хлорирующий реагент. Готовят смесь
равных объемов 1,5-процентного раствора перманганата калия и 12-процентного
раствора соляной кислоты.
о-Толидиновый
реагент: а) 0,1 г о-толидина растворяют в 0,1 мл
уксусной кислоты; б) 0,4 г йодистого калия растворяют в небольшом количестве
дистиллированной воды.
Растворы "а" и "б"
объединяют и разбавляют водой до 100 мл.
Йод-крахмальный реагент. Готовят 1-процентный раствор йодистого калия и 2-процентный
водный раствор крахмала, последний заваривают. Смешивают эти растворы в
соотношении 1:1.
Стандартный раствор плантвакса
готовят растворением 10 мг препарата в ацетоне (50 мл). Раствор содержит 200
мкг/мл.
2.3. Приборы и
посуда
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ
26-13-64.
Воронки делительные, емк. 250, 500 мл,
ГОСТ 10054-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 11-430-70.
Камера для хроматографирования
размером 150 - 200 мм.
Колбы мерные емк. 50, 100 мл, ГОСТ
1776-74.
Колбы круглодонные, н/ш, емк. 150, 200
мл, ГОСТ 10-394-63.
Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7.
Микропипетка, ГОСТ 1770-74 (для нанесения
стандартного раствора).
Пластинки стеклянные размером 90 x 120
мм.
Пипетки емк. 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Прибор для отгонки растворителя.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Цилиндры мерные, емк. 25, 50, 100, 250
мл, ГОСТ 1770-74.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление пластинок
1,5 г растворимого крахмала заваривают в
15 мл воды, прибавляют 110 мл воды и 40 г силикагеля "Л" (или 60 г
окиси алюминия), размешивают до образования однородной массы и по 5 г наносят
на стеклянные пластинки, равномерно распределяя ее по поверхности. Сушат
пластинки на воздухе в течение суток при комнатной температуре.
2.4.2. Отбор проб
Пробы для проведения анализа отбираются
согласно "Унифицированным правилам отбора сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденным зам. Главного
государственного санитарного врача СССР, N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция, очистка экстракта
Зерно. 25 - 50 г зерна (пшеница, овес)
помещают в коническую колбу, приливают хлороформ в таком количестве (~ 50 мл),
чтобы проба была полностью покрыта им, и экстрагируют в течение 1 часа,
периодически перемешивая пробу.
Экстракцию повторяют еще дважды по 50 мл
растворителя, проводя экстракцию в течение 30 мин. каждый раз. Экстракты
объединяют и фильтруют через бумажный фильтр ("синяя лента").
Упаривают на ротационном испарителе досуха. Колбы охлаждают. Прибавляют 20 мл
смеси воды и ацетона в соотношении 3:1. Помещают колбы в морозильную камеру
холодильника на 1,5 - 2 часа. Производят фильтрование растворов через плотный
бумажный фильтр ("синяя лента"). Прибавляют несколько капель соляной
кислоты (конц.) до pH = 1 и
производят экстракцию хлороформом трижды по 20 мл каждый раз в течение 5 мин.
Экстракты объединяют и пропускают через воронку, заполненную б/в сернокислым натрием. Упаривают на ротационном испарителе
до небольшого объема (0,05 мл) и наносят на хроматографическую
пластинку. В качестве свидетеля наносят стандартный раствор плантвакса
(200 мкг/мл) в количестве 5 - 10 мкг.
Вода. 200 мл анализируемой воды помещают
в делительную воронку, подкисляют соляной кислотой до pH
= 1 и экстрагируют хлороформом или хлористым метиленом трижды по 50 мл.
Экстракты объединяют и фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и
упаривают до небольшого объема (0,05 мл). Сконцентрированную пробу
количественно наносят на хроматографическую
пластинку.
2.5.2. Хроматографирование
Производят
хроматографирование экстрактов
в системе растворителей
хлороформ + эфир
= 5:2 <*>. Когда фронт растворителя поднимется на высоту
10 см, пластинку вынимают, сушат на воздухе и облучает УФ-светом в течение
30 мин.
на расстоянии 25 см от
источника. Обрабатывают пластинку
проявляющим
реактивом N 1 (вначале реактивом "а"), через 1 мин. - реактивом
"б" или
"в", "г". При
наличии плантвакса появляются
пятна сиреневого
(N -1-нафтилэтилендиамин)
или розового цвета
(альфа-нафтиламин,
1
альфа-нафтол).
Величина R плантвакса 0,38
- 0,40 ("Силуфол"), 0,77
f
(силикагель) и
0,70 (окись алюминия).
--------------------------------
<*> Объем подвижной фазы на камеру
размером h = 20 см, d = 14 см составляет 50 мл.
Другой метод обнаружения плантвакса состоит в следующем. После УФ-разложения
препарата производят хлорирование, поместив пластинку в эксикатор, на дне
которого находится хлорирующий реактив, в течение 3-х минут. Пластинку вынимают
из эксикатора и оставляют в вытяжном шкафу в течение 1 часа для удаления
избытка хлора. Обрабатывают пластинку о-толидиновым
или йод-крахмальным реактивом. Сушат пластинку на
воздухе и облучают УФ-светом в течение 5 мин. При
наличии плантвакса появляются пятна сине-фиолетового
цвета.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение производится
путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных
растворов.
Пропорциональная зависимость между
площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 мкг. При большем
содержании на пластинку наносят часть раствора.
Содержание препарата в анализируемой
пробе рассчитывают по формуле:
A x S
2
X = ------,
P x S
1
где:
X - содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг;
A - содержание препарата в стандартном
растворе, мкг;
S -
площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
P - масса пробы, взятой на анализ, г.
2.7. Требования
техники безопасности
Соблюдать требования техники
безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями, УФ-светом.