"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата пликтран и его метаболитов (окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты) в биосубстратах хроматографическим методом"

| На главную | Контакты | Поиск на текущей странице: "Ctr+F" |

Содержание библиотеки:

Комментарии пользователей / оставить комментарий >>>

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

27 апреля 1984 г. N 3003-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА ПЛИКТРАН

И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (ОКИСИ ДИЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВА,

ЦИКЛОГЕКСИЛОЛОВЯННОЙ КИСЛОТЫ) В БИОСУБСТРАТАХ

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

(Дополнение к Методическим указаниям N 2803-83)

1. Краткая характеристика препарата

Гидроокись трициклогексилолова, структурная формула:

/ \

│ │

\ /

-- │

/ \---Sn---OH

\ / │

-- / \

│ │

\ /

Эмпирическая формула: C H SnO.

11 34

Молекулярная масса: 385,156.

Синонимы и торговые названия: пликтран, цигексатин, тенкайд.

Химически чистое д.в. препарата пликтран - белое кристаллическое соединение с точкой плавления 245 °C. Точка плавления технического продукта (95 - 96% чистоты) - 196 - 198 °C.

Пликтран растворим в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан, метанол, этилацетат и др.). Растворимость в воде ограничена и составляет менее 1 мг/л.

Практически не летуч. Агрегативное состояние в рабочей зоне - гидрозоль.

Пликтран стабилен до 52 °C. Водная суспензия пликтрана стабильна в пределах pH от слабокислотной до щелочной.

Препаративная форма пликтрана стабильна в течение 2-х лет при хранении в нормальных условиях. При взаимодействии с сильными кислотами образуется соль.

Действующее вещество препарата пликтран - гидроокись трициклогексилолова в организме теплокровных образует два метаболита: окись дициклогексилолова и циклогексилоловянную кислоту.

Препарат пликтран обладает средней токсичностью, ЛД для белых крыс

540 мг/кг (орально). Острая оральная токсичность продуктов разложения для

белых крыс: окиси дициклогексилолова - 355 мг/кг, циклогексилоловянной

кислоты - 3600 мг/кг.

Препарат пликтран предлагается как высокоэффективный акарицид для наземного опрыскивания плодово-ягодных, цитрусовых, овощных, бахчевых культур и хлопчатника против растительных клещей, включая популяции, устойчивые к органофосфорным или другим акарицидам.

2. Методика определения д.в. препарата пликтран

и его метаболитов в биосубстратах хроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пликтрана и его двух метаболитов из анализируемого биосубстрата органическими растворителями, хроматографировании смеси веществ в тонком слое пластинок "Силуфол" и проявлении хроматограмм спиртовым раствором гематоксилина (альтернативно - кверцетином или пирокатехоловым фиолетовым).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.

┌──────┬──────┬───────┬────────┬───────┬──────┬──────────────┬────────┬────────┐

│Анали-│Анали-│Чувст- │Диапазон│Ср. │Стан- │ Величина │Относит.│Погреш- │

│зируе-│зируе-│витель-│опр-мых │процент│дарт- │ точного │ станд. │ность │

│мый │мое │ность │кон- │обнару-│ное │ измерения │отклон. │опреде- │

│объект│соеди-│методи-│центр., │жения │откло-│эпсилон │ Sr, % │ления │

│ │нение │ки, │мкг/г, │_ │нение │ альфа,K│ │дельта, │

│ │ │мкг/г, │мкг/мл │C, % │_ │ │ │% │

│ │ │мкг/мл │ │ │S │ │ │ │

├──────┼──────┼───────┼────────┼───────┼──────┼──────────────┼────────┼────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │

│Печень│I │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│ │III │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│Почки │I │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│ │III │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,6 │

│Легкие│I │0,2 │0,2 - 6 │95,0 │5,10 │+/- 6,34 │5,36 │+/- 6,67│

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │95,0 │5,30 │+/- 6,59 │5,57 │+/- 6,94│

│ │III │0,2 │0,2 - 6 │94,0 │5,90 │+/- 7,33 │6,27 │+/- 7,79│

│Мозг │I │0,2 │0,2 - 6 │90,0 │4,31 │+/- 5,36 │4,78 │+/- 5,95│

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │90,0 │4,72 │+/- 5,87 │5,24 │+/- 6,52│

│ │III │0,2 │0,2 - 6 │91,0 │4,96 │+/- 6,17 │5,45 │+/- 6,78│

│Кровь │I │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,30 │+/- 5,35 │4,52 │+/- 5,62│

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │95,1 │4,27 │+/- 5,31 │4,49 │+/- 5,58│

│ │III │0,1 │0,1 - 6 │94,0 │4,78 │+/- 5,94 │5,08 │+/- 6,32│

│Кал │I │0,2 │0,2 - 6 │87,0 │4,72 │+/- 5,87 │5,42 │+/- 6,75│

│ │II │0,2 │0,2 - 6 │86,0 │4,70 │+/- 5,84 │5,46 │+/- 6,79│

│ │III │0,1 │0,1 - 6 │90,1 │5,9 │+/- 7,33 │6,55 │+/- 8,13│

│Моча │I │0,1 │0,1 - 6 │97,4 │2,69 │+/- 3,34 │2,76 │+/- 3,43│

│ │II │0,1 │0,1 - 6 │97,4 │3,05 │+/- 3,79 │3,13 │+/- 3,89│

│ │III │0,1 │0,1 - 6 │97,4 │3,12 │+/- 3,88 │3,20 │+/- 3,98│

└──────┴──────┴───────┴────────┴───────┴──────┴──────────────┴────────┴────────┘

Примечание. I - трициклогексилоловогидроксид, II - дициклогексилоловооксид, III - циклогексилоловянная кислота.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают препараты акрекс, кельтан, антио, рагор, применяемые, как и пликтран, против растительноядных клещей.

2.2. Реактивы и материалы

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Уксусная кислота хч, ГОСТ 61-75.

Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.

Лимонная кислота хч, ГОСТ 908-79, 0,5-процентный водный раствор.

Гематоксилин хч, имп., 0,1-процентный этанольный раствор.

Кверцетин хч (ЧССР), 0,1-процентный этанольный раствор.

Пирокатехоловый фиолетовый индикатор чда, ТУ 6-09-07-1087-78, насыщенный раствор в этиловом спирте.

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Активированный уголь марки "БАУ", ТУ 6-09-3247-73.

Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:9).

Силикагель КСК, ТУ 6-09-2525-72 (0,28 - 0,45 мм и 0,10 - 0,14 мм).

Крахмал, ГОСТ 10163-62.

Пластинки хроматографические "Силуфол" - UV254 (ЧССР).

Фильтры обеззоленные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Пластинки стеклянные, 9 x 12 см.

Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты с содержанием 100 мкг в 1 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3), готовят из хч веществ.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Весы аналитические с погрешностью не более 0,001 г типа ВЛДП-100 г.

Весы технические с погрешностью не более 0,5 г, ГОСТ 19491-74.

Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 100, 250 мл.

Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 10394-72, на 100 мл.

Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1М.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100, 250 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1, 5, 25 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 25, 100 мл.

Стаканы химические, ГОСТ 10394-74.

Воронки лабораторные, ГОСТ 8613-75.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-66.

Камера для опрыскивания.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65.

Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 100, 250 мл.

Осветитель ультрафиолетовый, ТУ 25-05-2098-76.

Хроматографические колонки стеклянные (2 x 20 см).

Анализатор световой вибрационный 236-Б-Гр.

Водяные бани, ТУ 46-22-587-75.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление растворов

Стандартные растворы гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты (100 мкг/мл). I. 25 мг хч вещества помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и доводят до метки. II. Из I раствора 10 мл отбирают в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят смесью гексан - уксусная кислота до метки. Стандартные растворы хранят до 30 дней.

0,1-процентный раствор гематоксилина в 96% этаноле. 0,1 г гематоксилина помещают в 100 мл колбу и добавляют 96% этанол до метки. На каждые 100 мл раствора добавляют 1 - 2 капли конц. соляной кислоты. Реактив хранят в темной склянке до 60 дней.

0,1-процентный раствор кверцетина в 96% этаноле. 0,5 г кверцетина растворяют в 300 мл этилового спирта при слабом нагревании, охлаждают и доводят объем до 500 мл этиловым спиртом. Реактив хранят в темной склянке не более 1 недели.

0,5-процентный раствор лимонной кислоты. 0,5 г лимонной кислоты растворяют в 99,5 мл дистиллированной воды. Реактив хранят не более 1 месяца.

2.4.2. Приготовление хроматографической колонки с силикагелем

В стеклянную колонку размером 2 x 20 см, снабженную краном и пористым стеклянным фильтром, заливают на 1/2 высоты смесь гексан - уксусная кислота (20:3) и помещают 7 г силикагеля КСК (0,28 - 0,45 мм). Колонку перед употреблением промывают смесью гексан - уксусная кислота (20:3).

2.4.3. Приготовление хроматографических пластинок с тонким слоем сорбента

Из 40 г силикагеля КСК (0,10 - 0,14 мм), 1,5 г крахмала в 110 мл воды готовят сорбционную массу. Заваривают крахмал 15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. 10 г сорбционной массы наливают на пластинку и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Сушат в течение ночи при комнатной температуре. Хранят в эксикаторе.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка

Кровь. 5 мл крови экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия, удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, растворяют сухой остаток в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Моча. 25 мл мочи экстрагируют дважды по 25 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3), затем к моче добавляют 5 мл этанола и опять экстрагируют 5 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3). Последнюю экстракцию повторяют еще раз, предварительно добавив 5 мл этанола. Объединенные экстракты проводят через воронку с сульфатом натрия и далее поступают, как и при анализе крови.

Кал. 5 г кала экстрагируют трижды по 5 мл смесью гексан - уксусная кислота (20:3). К объединенным экстрактам добавляют 0,5 г активированного угля, перемешивают раствор в течение 5 минут, отфильтровывают от частичек угля и проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания, туда же собирают и смывы (гексан - уксусная кислота 20:3) угля и колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Удаляют растворитель на ротационном испарителе и далее поступают, как при анализе крови.

Печень, почки, мозг, легкие. 5 г пробы тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 15 мл смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и экстрагируют в течение 10 минут. Экстракцию повторяют еще дважды по 10 мл смеси. Собирают все экстракты в отдельную колбу, а к биоматериалу добавляют 5 мл разбавленной соляной кислоты (1:9), помешивают смесь 2 - 3 минуты и декантируют в колбу с первоначальными экстрактами. Процедуру повторяют еще раз. Объединенные экстракты проводят через колонку с силикагелем в колбу для выпаривания. Туда же собирают смывы колбы (2 x 10 мл), пропущенные через колонку. Выпаривают на ротационном испарителе растворители и далее поступают, как при анализе крови.

2.5.2. Хроматографирование и проявление

Удалив растворитель, сухой остаток растворяют в минимальном количестве смеси гексан - уксусная кислота (20:3) и количественно наносят на хроматографическую пластинку, через 5 минут развивают хроматограмму в системе подвижных растворителей гексан:уксусная кислота (49:10,5). После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей. Хроматограммы проявляют одним из нижеследующих способов.

1. Опрыскивание 0,1% раствором гематоксилина в 95% этиловом спирте, УФ-облучение в течение 5 минут и опрыскивание 0,5-процентным водным раствором лимонной кислоты.

2. УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание насыщенным этанольным раствором пирокатехолового фиолетового.

3. Опрыскивание 0,2 н раствором серной кислоты, УФ-облучение в течение 10 минут и опрыскивание 0,1-процентным этанольным раствором кверцетина.

При наличии гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова,

циклогексилоловянной кислоты в пробе на хроматограмме, обработанной

гематоксилином, появляются сиреневые пятна на розовом фоне; пирокатехоловым

фиолетовым - синие пятна на светлом фоне, с R соответственно: 0,76 +/-

0,01, 0,26 +/- 0,01, 0,14 +/- 0,01.

Содержание гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова, циклогексилоловянной кислоты в пробе находят путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен с пятнами стандартных растворов.

2.6. Обработка результатов анализа

Количество гидроокиси трициклогексилолова, окиси дициклогексилолова и циклогексилоловянной кислоты рассчитывают по формулам:

в крови и моче:

X = -,

где:

X - концентрация веществ в мкг/мл;

A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;

V - объем взятой для анализа крови или мочи, мл;

в печени, почках, мозге, легких, кале:

X = -,

где:

X - концентрация вещества, мкг/г;

A - количество вещества, обнаруженное на хроматограмме, мкг;

P - навеска биосубстрата, г.

3. Требования безопасности

При работе с пликтраном и его метаболитами беречь глаза, руки, а также соблюдать все требования безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами.

Интернет архив законодательства СССР. Более 20000 нормативно-правовых актов.
СССР, Союз Советских Социалистических республик, Советская власть, законодательство СССР, Ленин, Сталин, Маленков, Хрущев, Брежнев, Андропов, Черненко, Горбачев, история СССР.

© LibUSSR.RU, 2011 - 2024