Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 апреля 1984 г. N 3012-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РОНСТАРА В ПОЧВЕ,
РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
1. Краткая
характеристика препарата
1.1. Ронстар -
гербицид для борьбы с сорняками в посадках риса, лаванды, шалфея, герани, мяты.
Действующее начало препарата - 2-трет-бутил-4/5-изопропокси-2,4-дихлорфенил/1,3,4-оксадиазолин-5.
O
O / \
C(CH ) C H Cl N O .
(CH ) -CHO \\/
\/ 3 2 15 18 2 2 3
3 2
\_____ │ │
//
\\__N└───┘N Мол. масса 345,2.
Cl-\_____/
-----\
Cl
1.2. Название ИСО - оксадиазон.
1.3.
В чистом виде
- белое кристаллическое вещество, температура
плавления 90 °C.
Растворимость в воде 0,7 мг/л, хорошо растворим в этаноле,
-6
ацетоне,
хлороформе, бензоле. Давление
насыщенного пара 10 мм рт. ст.
Выпускается в
виде смачивающегося порошка
и гранул. ЛД для крыс 8000
50
мг/кг.
2. Методика
определения ронстара в почве, растениях
и эфирных маслах
газожидкостной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении ронстара из почвы и растений ацетоном, очистке экстрактов
перераспределением в системе двух несмешивающихся жидкостей, дополнительной
очистке растительных экстрактов на колонке с окисью алюминия и
газохроматографическом определении с помощью детекторов: с постоянной скоростью
рекомбинации и термоионного. Из эфирных масел ронстар
извлекают диметилсульфоксидом, промывают н-гексаном и определяют методом газожидкостной хроматографии
с термоионным детектором.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество ронстара:
- с детектором постоянной скорости
рекомбинации - 0,1 н;
- с термоионным детектором - 0,5 нг.
Нижний предел определения, мг/кг:
- почва: с ДПР - 0,002, с ТИД - 0,01;
- эфиромасличные растения: с ДПР - 0,004,
с ТИД - 0,02;
- эфирные масла - 0,1.
_
Среднее значение процента определения C при
n = 5, %:
- почва - 88,3;
- эфиромасличные растения - 70,7;
- эфирные масла - 73,9.
Стандартное отклонение S , %:
x
- почва - 18,6;
- эфиромасличные растения - 13,1;
- эфирные масла - 19,4.
Относительное стандартное отклонение S_, %:
x
- почва - 8,3;
- эфиромасличные растения - 5,9;
- эфирные масла - 8,7.
Доверительный интервал среднего при P =
0,95 и n = 5, %:
- почва - 23,1;
- эфиромасличные растения - 16,3;
- эфирные масла - 24,2.
Размах варьирования R:
- почва - 77,4 - 96,8;
- эфиромасличные растения - 62,4 - 82,7;
- эфирные масла - 62,1 - 84,4.
2.1.3. Избирательность метода
Метод не селективен
в присутствии гербицидов нитрохлора и дактала при использовании для хроматографического
определения ронстара детектора постоянной скорости
рекомбинации, поэтому в качестве дополнительного способа идентификации
необходимо использовать газожидкостную хроматографию с термоионным детектором.
2.2. Реактивы и
растворы
Диметилсульфоксид, МРТУ 6-09-5097-68, хч.
Ацетон, ГОСТ 2603-79, осч.
н-Гексан, ТУ
6-09-3375-78, ч, свежеперегнанный.
Ацетонитрил, МРТУ 6-09-3534-74, ч.
Окись алюминия для хроматографирования,
МРТУ 6-09-5296-68, ч, II ст. активности.
Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76, хч.
Диэтиловый эфир (для наркоза), фармакопея СССР.
Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% XE-60, ЧССР.
Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% SE-30, ЧССР.
Стандартные растворы ронстара
в ацетоне с содержанием 100, 10 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора
берут на аналитических весах навеску ронстара 10 мг
+/- 0,0002 г, помещают ее в мерную колбу емкостью 100 мл. Навеску растворяют в
10 - 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Раствор содержит
100 мкг/мл ронстара. Из раствора пипеткой переносят в
мерную колбу на 100 мл 10 мл раствора и доводят до метки ацетоном. Раствор
содержит 10 мкг/мл ронстара, растворы стабильны при
хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.
2.3. Приборы и
посуда
Хроматограф "Цвет-106" с
детектором термоионным, ТУ 1.550.003.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73.
Ротационный вакуумный испаритель, RV
0-64, ЧССР.
Делительные воронки на 250 мл, 500 мл,
ГОСТ 10054-75.
Колбы плоскодонные, конические на 250 мл,
ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ
10394-72.
Мерные цилиндры на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Микрошприцы на 1 мкл (МШ-1) и 10 мкл
(МШ-10).
Пипетки на 1 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колонки для хроматографирования
100 x 15 мм.
2.4. Подготовка к
определению
Органические растворители (ацетон, н-гексан) перед началом работы необходимо перегнать, сульфат
натрия прокалить при температуре 300 - 400 °C. Хроматографическую
колонку и детектор кондиционируют в режимных условиях в течение 2-х часов.
Отбор проб для анализа проводят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб
сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N
2051-79 от 21.08.79. Для анализа отбирают среднюю пробу почвы - 100 г, растений
эфиромасличных культур - 50 г, эфирного масла - 10 г.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Почва
100 г измельченной и просеянной через
сито почвы помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 150 мл ацетона и
встряхивают 1 час с помощью механического встряхивателя,
оставляют на ночь. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в плоскодонную
колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают ацетоном 2 x 30 мл. Фильтрат
упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 50
°C до 10 мл. Остаток количественно с 30 мл н-гексана
переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, прибавляют 200 мл
дистиллированной воды и реэкстрагируют ронстар н-гексаном, 3 x 30.
Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская
через 35 г безводного сульфата натрия, и концентрируют на ротационном испарителе
досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл ацетона, закрывают и
вращают колбу. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл
раствора. Хроматографируют с ТИД и ДПР.
2.5.2. Эфиромасличные растения
50 г свежесрезанных растений гомогенизируют
со 150 мл ацетона в течение
15 - 20 мин. со
скоростью 8000 об./мин.,
встряхивают 30 - 40 мин. Экстракты
фильтруют через
бумажный фильтр в
колбу емкостью 250
мл. Стакан
гомогенизатора промывают
3 x 20 мл ацетоном и через фильтр присоединяют
смыв к
основному фильтрату. Упаривают ацетон на ротационном испарителе до
10 мл при
температуре бани 50 °C. Остаток
количественно с 50 мл
ацетонитрила переносят в делительную воронку
емкостью 250 мл с 50 мл
н-гексана.
Встряхивают 1 -
2 мин. и отделяют
верхний слой. Операцию
проводят еще
дважды. Нижний слой переносят на
делительную воронку емкостью
500 мл
10% Na
SO и реэкстрагируют
ронстар 3 x 50 мл н-гексана.
Собирают
2 4
верхний слой,
объединяют, высушивают, пропуская
через безводный сульфат
натрия, и
упаривают до 5 мл на ротационном
испарителе. Остаток переносят
на колонку с 6
г окиси
алюминия, промытую 12 мл смеси н-гексан -
ацетон
(9:1). После
того как раствор полностью впитается
в слой адсорбента,
отгонную колбу
смывают 5 мл смеси гексан - ацетон (9:1)
и переносят на
колонку,
операцию проводят 3 раза. Ронстар элюируют
100 мл смеси н-гексан -
ацетон (9:1). Элюат упаривают
на ротационном испарителе
досуха. Остаток
растворяют в
1 мл ацетона
и 2 мкл вводят
в испаритель хроматографа,
хроматографируют с ТИД в ДПР.
2.5.3. Эфирные масла
Навеску
10 г эфирного масла мяты, лаванды, шалфея, герани
помещают в
делительную
воронку емкостью 250 мл с 50 мл диметилсульфоксида,
выдерживают
20 мин. для
растворения. Прибавляют 50 мл н-гексана,
встряхивает 2 мин. и
отделяют верхний
слой. Операцию повторяют
дважды. Оставшийся раствор
переносят в
делительную воронку емкостью
500 мл с 200 мл 10% Na SO
,
2 4
предварительно насыщенного
15 мл серного эфира, и реэкстрагируют ронстар
серным эфиром 3 x 30 мл. Объединенные экстракты
собирают, сушат, пропуская
через безводный
сульфат натрия, и концентрируют
досуха на ротационном
испарителе при температуре водяной бани 30 °C. К сухому
остатку прибавляют
1 мл ацетона, встряхивают и
2 мкл вводят
в испаритель хроматографа.
Хроматографирование проводят с ТИД.
УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ
┌─────────────────────────────────────────────┬─────────────┬─────────────┐
│ │ 5% SE-30
│ 5% XE-60 │
├─────────────────────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Размер
колонки, мм │100 x 3 │100 x 3 │
│Материал
колонки │стекло │стекло │
│Форма
колонки │спираль │спираль │
│Расход
газа-носителя, мл/мин., при работе с │40 │40 │
│ТИД
при работе с ДПР │60 │60 │
│Расход
воздуха, мл/мин. │400 │400 │
│Расход
водорода, мл/мин. │16 │16 │
│Температура
испарителя, °C │230 │230 │
│Температура
термостата колонок, °C │190 │190 │
│Хроматографируемый объем, мкл │2 │2 │
│Время
удерживания ронстара, мин.: │ │ │
│при
работе с ТИД │8,2 │11,5 │
│при
работе с ДПР │17,5 │24,2 │
│Число
теоретических тарелок: │ │ │
│при
работе с ТИД │697 │681 │
│при
работе с ДПР │784 │767 │
│ВЭТТ: │ │ │
│при
работе с ТИД │1,4 │1,4 │
│при
работе с ДПР │1,3 │1,3 │
│Линейный
динамический диапазон, нг: │ │ │
│при
работе с ТИД │0,5
- 500 │0,5 - 500 │
│при
работе с ДПР │0,1
- 10 │0,1 - 10 │
│Рабочая
шкала электрометра: │ │ │
│ │ -12
│ -12 │
│при
работе с ТИД │100
x 10 А│100
x 10 А│
│ │ -12
│ -12 │
│при
работе с ДПР │20 x 10 А │20 x
10 А │
└─────────────────────────────────────────────┴─────────────┴─────────────┘
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественный расчет препарата в
анализируемой пробе проводят по следующей формуле:
H x V
1
X = ------ x A,
K x V
2
где:
X - количество ронстара
в пробе, мг/кг;
H - высота пика препарата в анализируемой
пробе, мл;
V -
объем анализируемой пробы, мл;
1
V -
объем инъектируемой пробы, мкл;
2
A - навеска, г;
K
- калибровочный коэффициент,
который определяется по следующей
формуле:
H H H
1 1
2 n
K = - x [------ + ------ + ... + ------],
n C x V
C x V C x V
1 2 n
где:
H , H , H
- высоты пиков стандартного раствора ронстара,
мм;
1
2 n
V , V , V
- объемы стандартного
раствора ронстара, вводимые
в
1
2 n
хроматограф, мкл;
C - концентрация стандартного раствора ронстара, 10 мкг/мл.
Содержание микроколичеств
ронстара в пробах вычисляют как среднее из трех
параллельных определений.
3. Требования
безопасности
При выполнении операций по определению ронстара следует руководствоваться требованиями
безопасности при работе с соединениями 3-го класса токсичности (ронстар), а также с легколетучими растворителями.