Утверждены
Минздравом СССР
31 июля 1984 г. N 3064-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАВАКСА В ЗЕРНЕ И ВОДЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая
характеристика препарата. Витавакс -
2-метил-3-
фенилкарбамоил-5,6-дигидро-1,4-оксатиин. Белое
кристаллическое
вещество, т.
пл. 91,5 - 92,5 °C.
Общепринятое название -
карбоксин.
Брутто-формула C H NO
S. Молекулярная масса 235,3.
12 13 2
Растворимость в воде
0,17 г в
100 г. Хорошо растворяется в
хлороформе, ацетоне, бензоле, метаноле и этаноле.
Используется для
протравливания
семян зерновых культур в борьбе с пыльной головней.
Эффективен также
против ржавчинных грибов на различных культурах.
Выпускается в форме 75%-ного с.п. В растениях в
течение 6 недель
витавакс
подвергается окислению, образуя
в основном сульфоксид
(5,6-дигидро-2-метил-1,4-оксатиин-3-карбоксанилид-4-оксид) и в
небольших количествах - сульфон
(5,6-дигидро-2-метил-1,4-
оксатиин-3-карбоксанилид-4,4-диоксид). В
воде при pH 2 и pH 4
через несколько
недель обнаружены витавакс, сульфоксид и в
незначительных количествах - сульфон. В почве окисление витавакса
до сульфоксида полностью
завершается за 2
недели. Окисление
витавакса до сульфоксида наблюдается
в растворах некоторых
органических
растворителей.
Принцип метода. I вариант. Суммарное
определение витавакса и его метаболитов. Метод
определения витавакса и его метаболитов основан на их
экстракции органическим растворителем, окислении витавакса
перманганатом калия до сульфоксида, очистке
экстракта, реэкстракции в органический растворитель и
дальнейшем определении в тонком слое адсорбента ("Силуфола"
или силикагеля на пластинках). В качестве подвижной фазы используют смесь
хлороформ - эфир (5:2). Зоны локализации витавакса и сульфоксида витавакса в тонком
слое сорбента обнаруживают после разложения его УФ-светом
до аминосоединения, диазотирования
нитритом натрия в хлороводородной среде и азосочетания полученных солей фенилдиазония
с N-(1-нафтилэтилендиамином) либо с 1-нафтолом, 1-нафтиламином.
II вариант. Определение витавакса. Метод основан на экстракции его из анализируемой
пробы органическим растворителем, очистке экстракта перераспределением
пестицида в системе органический растворитель - вода - органический
растворитель с последующим определением в тонком слое силикагеля КСК-2,5 или
"Силуфола". Подвижная фаза - смесь н-гексан - ацетон (3:2) или н-гексан
- эфир (1:1). Обнаружение зон локализации пестицида проводят смесью реагентов:
0,05-процентного раствора бромфенолового синего в
50-процентном этаноле и 1-процентного нитрата серебра в воде с последующей
обработкой пластинок 2-процентным раствором лимонной кислоты. Продукты
окисления витавакса данным реагентом не
обнаруживаются. Возможно обнаружение витавакса по
реакции, описанной выше (УФ-разложение, диазотирование и азосочетание).
Метрологическая характеристика метода.
Нижний предел обнаружения сульфоксида витавакса с помощью реакции азосочетания:
азосоставляющая N-(1-нафтилэтилендиамин) - 0,5 - 1,0
мкг и азосоставляющие 1-нафтиламин, 1-нафтол - 1,0 -
1,5 мкг. Диапазон определяемых концентраций 1 - 30 мкг. Метрологическая
характеристика метода представлена в таблице 146.
Таблица 146
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌────────────────┬─────────────┬────────────┬───────────────┬─────────────┐
│ Наименование
│Нижний предел│
Среднее │ Стандартное
│Доверительный│
│
анализируемого │ определения,│
значение │ отклонение, % │ интервал
│
│ объекта
│ мг/л или │определения,│ │среднего при │
│ │ мг/кг
│ % │ │ p = 0,95, % │
├────────────────┼─────────────┼────────────┼───────────────┼─────────────┤
│Вода │0,02 │88,0 │+/- 2,6 │+/- 3,2 │
│(I,
II варианты)│ │ │ │ │
│Зерно
пшеницы │0,1 │85,0 │+/- 8,0 │+/- 8,7 │
│(I
вариант) │ │ │ │ │
│Зерно
пшеницы │0,1 │83,0 │+/- 4,0 │+/- 6,1 │
│(II
вариант) │ │ │ │ │
└────────────────┴─────────────┴────────────┴───────────────┴─────────────┘
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан ч. Гипс (сульфат
кальция). В течение 2 сут. прокаливают при 180 °C и
просеивают через сито 100 меш. Едкий кали ч.д.а.
Перманганат калия ч.д.а., 0,1-процентный раствор. Крахмал
водорастворимый ч. Хлороводородная кислота хч., концентрированная, 0,3-процентная.
N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч. 1-Нафтиламин. 1-Нафтол. Гидроксид калия ч.
Лимонная кислота. Щавелевая кислота 1 н. Сульфат натрия безводный х.ч. Нитрит натрия х.ч. Этиловый
спирт-ректиф. 96-процентный. Нитрат серебра.
Хлороформ х.ч. Эфир серный. Пластинки "Силуфол". Силикагель для хроматографии (КСК-2,5, Л -
измельчают, просеивают через сито 100 меш). Проявляющие реагенты: N 1: а - к
смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты, прибавляют 1 г нитрита натрия; б -
N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч, 1-процентный раствор в этиловом спирте; в -
1-нафтиламин ч.д.а., 1-процентный раствор в этиловом
спирте; г - 1-нафтол ч.д.а.
(3 г гидроксида калия растворяют в 50 мл дистиллированной воды, затем
прибавляют 0,5 г 1-нафтола). Реагенты готовят непосредственно перед
употреблением. Расход реагентов 4 - 5 мл на одну пластинку; N
2: а - 0,05-процентный раствор бромфенолового синего ч.д.а. в 50-процентном этаноле; б - 1-процентный водный
раствор нитрата серебра ч.д.а. Растворы а и б
смешивают в соотношении 1:1; в - 2-процентный водный раствор лимонной кислоты х.ч. Растворы хранят в темной посуде в течение месяца.
Стандартный раствор витавакса (200 мкг/мл) готовят,
растворяя 10 мг препарата в 50 мл ацетона. Раствор устойчив при хранении в
холодильнике в течение 3 мес.
Приборы и посуда. Аппарат для
встряхивания. Баня водяная. Воронки делительные на 250, 500 мл. Камера для опрыскивания.
Камера для хроматографирования размером 150 x 200 мм.
Колбы: мерные вместимостью 50, 100 мл; круглодонные со шлифами вместимостью
150, 200 мл. Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7. Микропипетка для нанесения
стандартного раствора. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм. Пипетки на 1,
5, 10 мл. Прибор для отгонки растворителя. Пульверизатор стеклянный. Цилиндры
мерные на 25, 50, 100, 250 мл.
Подготовка к определению. Приготовление
пластинок. Силикагель марки Л (40 г) либо КСК-2,5 растирают в фарфоровой ступке
с 2 г гипса. Прибавляют небольшими порциями 90 мл воды и размешивают до
образования однородной массы. На пластинку размером 9 x 12 см наносят 5 г
массы, равномерно распределяют ее по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в
течение суток при комнатной температуре. Приготовление "свидетеля". В
колбочку вносят 0,025 - 0,05 мл стандартного раствора витавакса
(200 мкг/мл), что соответствует 5 - 10 мкг препарата. Упаривают в токе теплого
воздуха, прибавляют 10 мл 0,1%-ного раствора
перманганата калия. Раствор оставляют на 1 мин. Затем прибавляют 10 мл 0,3%-ного раствора хлороводородной
кислоты и 5 мл 1 н щавелевой кислоты и после обесцвечивания раствора трижды
экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл в течение 3 - 5 мин. каждый раз.
Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают до
небольшого объема. Сконцентрированную пробу количественно наносят на пластинку.
Ход анализа. Экстракция. Анализируемую
пробу воды (200 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют
хлороформом порциями по 50 мл в течение 5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют
и фильтруют через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на
ротационном испарителе. При необходимости определения в воде суммы витавакса и его метаболитов (I вариант) к сухому остатку
прибавляют 10 мл 0,1%-ного раствора перманганата
калия и определяют так, как описано в приготовлении "свидетеля". При
определении только метаболитов витавакса растворы
перманганата калия и щавелевой кислоты не прибавляют. Для определения витавакса в воде по II варианту сконцентрированный
хлороформный экстракт наносят на пластинку, покрытую тонким слоем адсорбента, и
хроматографируют.
Пробу зерна пшеницы (50 - 100 г) помещают
в коническую колбу, прибавляют 60 - 120 мл хлороформа и экстрагируют 2 ч на
аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют еще раз в течение 30 мин.
Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют через
бумажный фильтр "синяя лента" и упаривают досуха на ротационном
испарителе. При определении в зерне суммы витавакса и
его метаболитов (I вариант) к сухому остатку добавляют 10 мл 0,1%-ного раствора перманганата калия. Оставляют раствор на 15
мин. Затем прибавляют 10 мл 0,3%-ного раствора хлороводородной кислоты и 5 мл 1 н раствора щавелевой
кислоты. После обесцвечивания раствора прибавляют 20 мл ацетона и ставят в
морозильную камеру на 60 мин. Фильтруют раствор через плотный бумажный фильтр
"синяя лента". Экстрагируют трижды хлороформом по 50 мл в течение 3 -
5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и
упаривают до небольшого объема. Сконцентрированную пробу количественно наносят
на пластинку. В случае определения в пробе только метаболитов в ходе анализа
перманганат калия и щавелевую кислоту не прибавляют.
Для определения в зерне витавакса по II варианту к сухому остатку, полученному
после упаривания сконцентрированного хлороформного экстракта, добавляют
дистиллированную воду (30 - 35 мл), раствор тщательно перемешивают стеклянной
палочкой и оставляют на 2 ч, периодически перемешивая. Водный экстракт
переносят в делительную воронку на 250 мл через бумажный фильтр "синяя
лента". Экстракцию витавакса повторяют еще 2
раза в течение 30 мин. и переносят экстракт в ту же воронку. В воронку
прибавляют 0,1 г хлорида натрия, 15 мл хлороформа и встряхивают содержимое в
течение 5 мин. Хлороформенный слой отделяют.
Экстракцию витавакса из водного раствора повторяют
еще 3 раза. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают
на ротационном испарителе до небольшого объема (0,1 мл). Остаток наносят на хроматографическую пластинку.
Хроматографирование. При
определении в анализируемых
пробах
суммы витавакса и его метаболитов (I вариант) используют подвижную
фазу хлороформ -
серный эфир (5:2). В качестве "свидетеля" наносят
стандартные растворы витавакса,
обработанные перманганатом калия,
как описано
выше. После хроматографирования пластинку сушат и
облучают УФ-светом в течение
20 мин. Зоны локализации сульфоксида
витавакса
обнаруживают путем последовательной обработки пластинки
раствором нитрита
натрия в солянокислой
среде и раствором
N-(1-нафтилэтилендиамина) либо
1-нафтиламина (1-нафтола). При
наличии витавакса или метаболитов
появляются пятна фиолетового или
розового цвета.
Величина R сульфоксида 0,38
("Силуфол") и 0,65
f
(силикагель).
При
определении витавакса по II варианту в
качестве подвижной
фазы используют смесь н-гексан
- ацетон (3:2) или н-гексан - эфир
(1:1). В
качестве
"свидетеля"
наносят стандартный раствор
витавакса (200 мкг/мл)
в количестве 0,005
- 0,05 мл,
что
соответствует 1
- 10 мкг
пестицида. После хроматографирования
пластинку сушат
и обрабатывают смесью растворов бромфенолового
синего в
ацетоне и нитрата серебра в воде в соотношении 1:1. Для
обесцвечивания фона
пластинку обрабатывают 2%-ным раствором
лимонной кислоты.
Витавакс
проявляется в виде
синих пятен на
светло-желтом фоне. Величина R витавакса 0,50 (н-гексан - ацетон
f
в соотношении
3:2) на силикагеле и 0,38; 0,65 (н-гексан -
эфир в
соотношении 1:1) на "Силуфоле"
и силикагеле соответственно. Зоны
локализации витавакса можно
также обнаружить по
реакции
азосочетания (I вариант).
Обработка результатов анализа.
Количественно препарат определяют путем сравнения интенсивности окраски и
размера пятен пробы и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе (X,
мг/л или мг/кг) рассчитывают по формуле:
AS
2
X = ---,
PS
1
где:
A - содержание препарата в стандартном
растворе, мкг;
P - объем или масса пробы, взятой на
анализ, мл или г;
S
и S -
площади соответственно стандартного раствора и
1
2
анализируемой
пробы, кв. мм.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать правила работы с токсичными веществами и органическими растворителями.