Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
31 июля 1984 г. N 3073
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА А-1
МЕТОДОМ ГЖХ В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
1. Краткая
характеристика препарата
Натриевая соль бензоилмуравьиной
кислоты д.э. препарата А-1 (92%).
В препарате содержится и натриевая соль
бензойной кислоты (8%).
O
││
// \ -CCOONa
│ ││
C H O Na.
\\ /
8 5 3
Молекулярная масса 172.
А-1 - белое или слегка с желтоватым
оттенком кристаллическое вещество, без запаха. Растворимость (г/100 мл при 20 °C): в воде - 41,0, в этаноле - 2,0, ксилоле
- 0,05, ацетоне - 0,04, в хлороформе практически нерастворим.
МДУ и ПДК не установлены.
Препарат А-1 применяется в качестве
стимулятора роста хлопчатника путем предпосевной замочки семян хлопчатника.
2. Методика
определения действующего вещества
препарата А-1 в воде, почве, растительном
материале
газохроматографическим методом
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении бензоилмуравьиной кислоты из анализируемого объекта диэтиловым эфиром и последующем определении в виде
метилового эфира на газовом хроматографе с использованием
пламенно-ионизационного детектора.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций: для
воды - 0,05 - 4,0 мг/л; для почвы - 0,4 - 4,0 мг/кг; для растительного
материала - 0,5 - 4,0 мг/кг.
Предел обнаружения в хроматографируемом
объеме: для воды - 2,5 нг; для почвы - 4 нг; для растительного материала - 10 нг.
_
Среднее
значение определения стандартных количеств (C) при n = 5 для
_
воды 90%,
стандартное отклонение (S) -
8,04, относительное стандартное
отклонение (Sr) - 8,9%,
доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n =
5 (ЭПСИЛОН )
- +/- 9,9%, соответственно
аналогичные характеристики
альфа,k
_ _
для почвы: C - 85%, S - 12,06, Sr - 14,1%, ЭПСИЛОН
- +/- 14,9; для
_ _ альфа,k
растительного материала: C - 82%, S - 14,47, Sr - 17,6%, ЭПСИЛОН
-
альфа,k
17,9%.
2.1.3. Избирательность метода
Иные стимуляторы роста, применяемые на
хлопчатнике (пикс, тур), определению препарата А-1 не
мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Бензоилмуравьиная кислота хч.
Соляная кислота чда,
ГОСТ 3118-77.
Диэтиловый эфир (медицин.) фарм.
Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Серная кислота чда,
ГОСТ 4204-77.
Метиловый спирт чда,
ГОСТ 6995-77.
Гидразин-гидрат чда, ГОСТ 5832-65.
Кали едкое осч,
ОСТ 6-01-301-74.
Хлороформ хч,
ГОСТ 215-74.
Фильтры беззольные, ТУ 6-09-1678-77.
Стандартные растворы метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в хлороформе с содержанием 0,5,
5, 10, 25, 50, 100 мкг/мл.
Наполнитель для хроматографической
колонки: хроматон N-AW силанизированный
ГМДС с 10% К-301.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Хроматограф с пламенно-ионизационным
детектором.
Стеклянная хроматографическая
колонка 3 x 3000 мм.
Водяная баня, ТУ 46-22-587-75.
Цилиндры мерные на 250, 100, 25 мл, ГОСТ
1770-74.
Делительные воронки на 100 мл, ГОСТ 8613-75.
Колбы конические на 250 мл, ГОСТ
10394-72.
Аппарат Сокслета,
ГОСТ 9777-74.
Колбы мерные на 100, 50, 25 мл, ГОСТ
1770-74.
Прибор для получения диазометана
(рис. 1 - не приводится).
Колбы круглодонные для отгонки
растворителей на 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Прибор для отгонки растворителей, ТУ
25-11-917-74, тип ИР-1.
Микрошприц МШ-10.
2.4. Отбор проб
производится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб,
утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, N 2051-79.
2.5. Получение диазометана
В реакционную колбу прибора для получения
диазометана (рис. 1) помещают 6 г едкого кали, 3 мл
метанола и 3 мл гидразин-гидрата. В приемную колбу
наливают 50 мл диэтилового эфира. Из капельницы
подают хлороформ со скоростью 1 капля за секунды. Окончание реакции получения диазометана определяют по появлению красно-бурой окраски
реакционной смеси или по выделению белых паров в реакционной колбе. Эфирный
раствор диазометана интенсивно желтого цвета
предпочтительно применять свежеполученным, но можно
хранить 3 - 5 дней в темной склянке на холоде.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция из воды
Пробу воды в 250 мл концентрируют на
ротационном испарителе до 25 - 30 мл, к охлажденному раствору в делительной
воронке добавляют 1 мл соляной кислоты и встряхивают 5 минут. Выделившуюся
кислоту экстрагируют 100 мл (5 x 20 мл) диэтилового
эфира. Объединенные эфирные вытяжки сушат над безводным сульфатом натрия и
отгоняют растворитель на ротационном испарителе до объема 3 - 5 мл.
2.6.2. Экстракция из почвы
К навеске почвы в 50 г добавляют 50 мл диэтилового эфира, 1 мл разбавленной (1:1) серной кислоты и
встряхивают 5 минут, экстракт фильтруют и повторяют извлечение еще 4 раза
эфиром, порциями по 25 мл, и соответствующим количеством разбавленной серной
кислоты. Собранные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и
отгоняют эфир до объема 3 - 5 мл.
2.6.3. Экстракция из семян хлопчатника
Навеску в 25 г измельчают и помещают в
патрон из фильтровальной бумаги, который вкладывают в аппарат Сокслета и экстрагируют с 200 - 250 мл диэтилового
эфира и 3 мл разбавленной (1:1) серной кислоты. Экстракцию продолжают 2 часа.
Полученный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют
эфир до объема 3 - 5 мл.
2.6.4. Метилирование
К концентратам экстрактов добавляют 0,5 -
1 мл метанола и 3 - 5 мл эфирного раствора диазометана.
Метилирование обычно длится 10 - 15 минут в колбочке
с пришлифованной пробкой. По окончании метилирования
избыток диазометана удаляют током азота и отгоняют
растворитель. Полученный метиловый эфир разбавляют хлороформом до 5 мл в мерной
посуде и далее хроматографируют.
2.6.5. Условия хроматографирования
-9
Хроматограф
с ДИП, рабочая шкала электрометра
- 10 x 10 А,
скорость
протяжки ленты
самописца - 720
мм/час, колонка стеклянная 3 x 3000 мм,
наполнитель колонки
- хроматон N-AW, силанизированный ГМДС с 10% E-301
(размеры частиц
0,20 - 0,25
мм), температура испарителя
- 300 °C,
температура термостата
колонок - 140
°C, газ-носитель - азот, скорость
азота - 45 мл/мин., водорода - 55 мл/мин., воздуха
- 360 мл/мин., вводимые
в испаритель объемы - 1 мкл,
абсолютное время удерживания метилового эфира
бензойной
кислоты - 3 мин., бензоилмуравьиной кислоты - 10 мин.
2.7. Обработка
результатов анализа
Содержание д.в. препарата А-1 определяют
методом соотношения со стандартом по площади пика.
Концентрацию д.в. препарата А-1 в
анализируемой пробе (X, мг/л или мг/кг) вычисляют по формуле:
C x S x V
2 2
X = ----------- x K,
S x V x P
1 1
где:
C - количество метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в стандартном
растворе, введенном в хроматограф, мкг;
S -
площадь пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, кв.
1
мм;
S -
площадь пика препарата в хроматографируемом объеме,
кв. мм;
2
V -
объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
1
V -
общий объем экстракта в хлороформе перед хроматографированием,
мл;
2
P - навеска или объем анализируемой пробы, г/мл;
K
- коэффициент пересчета
метилового эфира в
натриевую соль
бензоилмуравьиной кислоты (1,05).
3. Требования
безопасности
Соблюдать правила предосторожности,
необходимые при работе с ядовитыми и взрывоопасными веществами. Обратить особое
внимание на стадию получения диазометана, обладающего
высокой токсичностью и взрывоопасностью.