Утверждены
Минздравом СССР
21 ноября 1984 г. N 3161-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 4-ХЛОР-2-МЕТИЛФЕНОКСИУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ
(2М-4Х) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ И ПРОДУКТАХ
ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
В.Д. Чмилем, С.В. Чулковой (ВНИИГИНТОКС).
Краткая
характеристика препарата. 2М-4Х
(дикотекс,
МЦПА) -
2-метил-4-хлорфеноксиуксусная кислота.
Брутто-формула C H O Cl.
9 9 3
Молекулярная масса 200,6. Белое кристаллическое вещество
со слабым запахом
крезола, т.
пл. 120 -
120,2 °C. Хорошо растворимо в
этаноле, толуоле,
четыреххлористом углероде, диэтиловом эфире,
дихлорэтане, хлорбензоле и
плохо -
в воде (0,15
г в 100 г
H O при 25 °C). Выпускается в виде
2
80-процентного
водорастворимого порошка и 40-процентного водного раствора.
Применяется в
качестве гербицида в
посевах льна, зерновых и злаковых
культур, чаще всего в виде натриевых
и калиевых солей.
В зерне, рисе,
картофеле, подсолнечном масле МДУ 0,05 мг/кг; горохе -
0,05 мг/кг. В воде
рыбохозяйственных водоемов
ПДК 0,02 мг/л;
в водоемах санитарно-бытового
водопользования
- 0,25 мг/л.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции 2М-4Х из гидролизованной пробы (растительный материал, молоко,
масло) органическим растворителем, из проб воды и почвы - органическим
растворителем с последующим определением методом ТСХ. С помощью предлагаемого
метода можно определить 2М-4Х, находящуюся в анализируемой пробе
как в свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов
с эндогенными веществами пробы.
Метрологическая характеристика метода.
Предел определения, мг/л или мг/кг: вода - 0,05; почва - 0,10; сено - 0,40;
зерно - 0,03; молоко - 0,40; масло сливочное - 0,70; мясо - 0,50. Среднее
значение определения при n = 6, %: 85; 75; 65; 65; 65; 85; 65; 75
соответственно.
Реактивы и растворы. Аммиак
водный ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а.
Ацетон х.ч. Гидрокарбонат натрия ч.д.а.,
0,4 М водный раствор. Бромкрезоловый зеленый ч.д.а. н-Гексан х.ч. Гидроксид натрия х.ч., 0,1 М
водный раствор. Пластинки для метода ТСХ типа "Силуфол".
Проявляющие реагенты: N 1 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата
серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака, 25-процентный водный
раствор, и доводят до метки ацетоном). При хранении в плотно
закрытой склянке без доступа света годен для применения в течение
месяца; N 2 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,04 г бромкрезолового
зеленого, растворяют в 96-процентном этаноле, добавляют 0,1 М раствор
гидроксида натрия до явно выраженного синего окрашивания и доводят до метки
этанолом). Срок применения не ограничен. Силикагель ЛС 5/40 М для тонкослойной
хроматографии с 13% гипса. Силикагель КСК. Хлороводородная
кислота ч., 2 М водный раствор. Бензол х.ч.
Стандартный раствор 2М-4Х в ацетоне концентрацией 100 мкг/мл. Уксусная кислота х.ч., ледяная. Фосфорно-вольфрамовая
кислота х.ч., 40-процентный в.р.
Хлороформ х.ч. Эфир. Этиловый спирт.
Приборы и посуда. Делительная воронка на
1 л. Колба Бунзена на 500 мл. Воронка Бюхнера,
диаметр 13 см. Ротационный испаритель. Источник УФ-света.
Водяная баня. Колбы: мерные на 10 и 100 мл; конические на 500 мл; двухгорлая круглодонная на 500 мл. Вакуумный водоструйный
стеклянный насос. Лабораторный холодильник стеклянный. Камера для хроматографирования. Микропипетки. Пластинки стеклянные
размером 90 x 120 мм. Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для
обработки пластинок. Электроплитка. Аппарат для встряхивания. Сушильный шкаф.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. Пробу воды 250 - 750 мл помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1,
тщательно перемешивают и экстрагируют тремя порциями диэтилового
эфира (100; 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную
воронку, промывают небольшими порциями дистиллированной воды (15 - 20 мл) до
нейтральной реакции промывных вод и затем трижды экстрагируют 0,5 М водным
раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50 мл. Объединенный водный экстракт
2 раза промывают хлороформом порциями 20 мл и 20 мл н-гексана,
отбрасывая эти растворители, подкисляют хлороводородной
кислотой до pH 1 и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный
эфирный экстракт промывают дистиллированной водой порциями по 15 - 20 мл до
нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном
испарителе до объема 2 мл и затем досуха током сухого воздуха.
Пробу сухой почвы
100 г, растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в
коническую колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 25 - 35 мл дистиллированной
воды, 5 мл концентрированной хлороводородной кислоты,
тщательно перемешивают, добавляют 150 мл ацетона и помещают на аппарат для
встряхивания на 1 ч. Затем растворитель отфильтровывают под вакуумом на воронке
Бюхнера через бумажный
фильтр и почву на фильтре трижды промывают ацетоном порциями по 20 мл. Затем
ацетон удаляют на ротационном испарителе, остаток из колбы переносят 100 мл
дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной
кислотой до pH 1, в делительную воронку, трижды
экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и
далее поступают так, как это описано при определении в воде.
Тщательно измельченную навеску из травы,
сена, соломы, зерна 25 г (навеска зерна 50 г) помещают в круглодонную колбу на
1 л, приливают 100 мл 85-процентного водного раствора этилового спирта,
тщательно перемешивают, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на
кипящую водяную баню на 1 ч, периодически перемешивая содержимое колбы. После
охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "черная
лента" под вакуумом на воронке Бюхнера и
промывают осадок на фильтре двумя порциями по 50 мл 85-процентного водного
раствора этилового спирта. Затем этиловый спирт упаривают из фильтрата на
ротационном испарителе, к остатку добавляют 12 мл концентрированной хлороводородной кислоты, 5 мл дистиллированной воды и
нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч для
разрушения конъюгатов 2М-4Х. После охлаждения гидролизат фильтруют через бумажный фильтр "черная
лента" на воронке Бюхнера под вакуумом и
промывают остаток на фильтре тремя порциями по 20 мл 2 М водного раствора хлороводородной кислоты. Объединенный фильтрат переносят в
делительную воронку, трижды экстрагируют диэтиловым
эфиром порциями по 100; 50 и 50 мл и далее поступают так, как это описано при
определении в воде.
Пробу молока 25 -
50 мл помещают в круглодонную колбу на 250 мл, прибавляют концентрированную хлороводородную кислоту (4,4 - 8,8 мл), тщательно
перемешивают, присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную
баню для гидролиза на 1 ч. После охлаждения в колбу приливают 7,5 - 15,0 мл
40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, энергично
встряхивают, приливают 100 - 200 мл дистиллированной воды и содержимое колбы
фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 раза 2 М водным
раствором хлороводородной кислоты порциями по 50 мл и
далее поступают так, как это описано при определении в растительном материале.
Пробу сливочного масла (25 г) растворяют
в 100 мл н-гексана, помещают в двугорлую круглодонную
колбу на 500 мл, приливают 100 мл 2 М водного раствора хлороводородной
кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на кипящую
водяную баню на 1 ч. Содержимое колбы перемешивают с помощью электромешалки. После охлаждения содержимого колбы слои
разделяют в делительной воронке и гексановый слой
дважды экстрагируют 2 М водным раствором хлороводородной
кислоты порциями по 50 мл. Объединенный хлороводородный
экстракт промывают дважды н-гексаном порциями по 25
мл, отбрасывая этот растворитель, и затем экстрагируют диэтиловым
эфиром 3 раза по 50 мл. Эфирный экстракт промывают небольшими количествами (10
- 15 мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод, трижды
экстрагируют 2М-4Х 0,5 М водным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50
мл и далее поступают так, как это описано выше.
Пробу из мяса (25 - 50 г) измельчают на
мясорубке, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, приливают 2 М хлороводородную кислоту (100 - 200 мл), присоединяют
обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч для гидролиза,
перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки.
После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40-процентного водного раствора
фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды, тщательно
перемешивают и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 2 М водным раствором хлороводородной кислоты, объединенный фильтрат трижды
экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и
далее поступают так, как это описано выше.
Перед проведением серийных анализов
необходимо установить процент определения, т.е. процент возврата препарата из
проб, к которым были добавлены различные количества препарата.
Тонкослойная хроматография. Сухой
остаток после упаривания эфирного
экстракта растворяют
в 1 мл
ацетона и количественно
наносят на
хроматографическую
пластинку с тонким
слоем силикагеля или на пластинку
"Силуфол". На
эту же пластинку наносят 2, 5 и 10 мкг 2М-4Х в виде раствора
в ацетоне и
проводят хроматографирование в системе растворителей н-гексан-
диэтиловый эфир-уксусная
кислота (50:50:2). Для
хроматографирования
используют
насыщенную камеру. Для
насыщения стенки камеры
обкладывают
фильтровальной бумагой,
которая касается смеси
растворителей и
пропитывается. Через
2 ч быстро
открывают крышку камеры
и помещают
пластинку для
развития хроматограмм.
После окончания хроматографирования
пластинку извлекают
из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для
обнаружения
2М-4Х пластинку обрабатывают проявляющим реагентом N 1, сушат и
облучают УФ-светом
в течение 10 -
15 мин. При наличии в пробе 2М-4Х на
пластинке появляется
серо-черное пятно на
белом фоне с
величиной
R 0,30 +/-
0,01. В качестве второго проявляющего
реагента может быть
f
использован бромкрезоловый зеленый. После развития хроматограммы
пластинку
сушат на воздухе
и помещают в сушильный шкаф при
110 °C на 20 мин. для
удаления
следов уксусной кислоты
и затем обрабатывают проявляющим
реагентом N 2.
Препарат 2М-4Х проявляется в виде желтого пятна
на
голубом
фоне. Минимально детектируемое количество на хроматограммах 1 мкг.
Для
повышения надежности идентификации может быть использована вторая
система подвижных растворителей: бензол-уксусная кислота
(5:1). Величина
R 2М-4Х в этой системе 0,54 +/- 0,01.
f
Определить
2М-4Х можно в присутствии 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты
2,4-Д и
2,4-дихлорфенола. Величины R для этих
соединений в системе
f
н-гексан-диэтиловый эфир-уксусная
кислота (50:50:2) - 0,25
и 0,50, в
системе бензол-уксусная кислота (5:1) - 0,48 и 0,65 соответственно.
Обработка результатов анализа. Содержание
2М-4Х в пробе оценивают визуально, сравнивая размер и интенсивность окраски
пятен стандартного соединения с размером и интенсивностью пятен пробы. Для
определения содержания 2М-4Х в пробах (X, мг/л или мг/кг) используют формулу:
A
X = --,
PR
где:
A - количество 2М-4Х в пробе, найденное
сравнением со стандартом, мкг;
P - объем или масса пробы, мл или г;
R - процент определения, найденный
предварительно.
Требования безопасности. Соблюдаются
требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими
реактивами.