Óòâåðæäåíû
Ìèíçäðàâîì ÑÑÑÐ
3 ÿíâàðÿ 1985 ã. N 3194-85
ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÓÊÀÇÀÍÈß
ÏÎ ÈÄÅÍÒÈÔÈÊÀÖÈÈ ÃÀÌÌÀ-ÃÕÖÃ, ÅÃÎ ÈÇÎÌÅÐÎÂ (ÀËÜÔÀ-,
ÁÅÒÀ
È ÄÅËÜÒÀ-ÃÕÖÃ) È ÌÅÒÀÁÎËÈÒÎÂ (ÏÎËÈÕËÎÐÈÐÎÂÀÍÍÛÕ
ÔÅÍÎËÎÂ)
 ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÕ ÆÈÄÊÎÑÒßÕ (ÊÐÎÂÈ), ÎÐÃÀÍÀÕ, ÒÊÀÍßÕ È
ÑÓÁÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÔÐÀÊÖÈßÕ ÏÅ×ÅÍÈ
ÒÅÏËÎÊÐÎÂÍÛÕ ÆÈÂÎÒÍÛÕ
ÌÅÒÎÄÎÌ ÒÎÍÊÎÑËÎÉÍÎÉ ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈÈ
Êðàòêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ïðåïàðàòîâ
ïðèâåäåíà â òàáëèöå 9.
Òàáëèöà 9
ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÈÊÀ ÏÐÅÏÀÐÀÒÎÂ
┌──────────────────────────┬────────────┬───────────────────────┬──────────────┐
│
Ïåñòèöèä │Ìîëåêóëÿðíàÿ│ Òåìïåðàòóðà, °C │Äàâëåíèå ïàðîâ│
│ │ ìàññà
├─────────────┬─────────┤ïðè
20 °C, Ïà │
│ │ │ ïëàâëåíèÿ
│ êèïåíèÿ │
│
├──────────────────────────┼────────────┼─────────────┼─────────┼──────────────┤
│1,2,3,4,5,6- │291 │112,8 │ │4,0 │
│Ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàí, │ │ │ │ │
│ãàììà-èçîìåð (ëèíäàí, │ │ │ │ │
│ãàììà-ÃÕÖÃ) │ │ │ │ │
│1,2,3,4,5,6- │291 │157,5 - 158,5│ │2,67 │
│Ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàí, │ │ │ │ │
│àëüôà-èçîìåð ÃÕÖà │ │ │ │ │
│1,2,3,4,5,6- │291 │309 │ │6,67 │
│Ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàí, │ │ │ │ │
│áåòà-èçîìåð ÃÕÖà │ │ │ │ │
│1,2,3,4,5,6- │291 │138 - 139 │ │2,67 │
│Ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàí, │ │ │ │ │
│äåëüòà-èçîìåð ÃÕÖà │ │ │ │ │
│4-Õëîðôåíîë (4-ÕÔ) │128,5 │49,9 │217 │- │
│2,4-Äèõëîðôåíîë (2,4-ÄÕÔ) │163 │45 │210 │- │
│2,4,5-Òðèõëîðôåíîë │197,5 │- │- │- │
│(2,4,5-ÒÕÔ) │ │ │ │ │
│2,4,6-Òðèõëîðôåíîë │197,5 │60 │246 │- │
│(2,4,6-ÒÕÔ) │ │ │ │ │
│2,3,4,6-Òåòðàõëîðôåíîë │221,5 │- │- │- │
│(2,3,4,6-ÒåÕÔ) │ │ │ │ │
│2,3,4,5,6-Ïåíòàõëîðôåíîë │226 │191 │310 │0,01 │
│(ÏÕÔ) │ │ │ │ │
│Ãåêñàõëîðáåíçîë (ÃÕÁ) │284,8 │231 │322 │- │
└──────────────────────────┴────────────┴─────────────┴─────────┴──────────────┘
Ïðèíöèï ìåòîäà. Ìåòîäèêà îñíîâàíà íà
òîíêîñëîéíîì õðîìàòîãðàôè÷åñêîì îïðåäåëåíèè ãàììà-ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàíà, åãî
àëüôà-, áåòà- è äåëüòà-èçîìåðîâ è ìåòàáîëèòîâ ïðè
ñîâìåñòíîì ïðèñóòñòâèè â áèîëîãè÷åñêîì ìàòåðèàëå òåïëîêðîâíûõ.
Ìåòðîëîãè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ìåòîäà
ïðèâåäåíà â òàáëèöå 10. Ïðåäåëû îáíàðóæåíèÿ èçîìåðîâ è ìåòàáîëèòîâ
ãåêñàõëîðöèêëîãåêñàíà óêàçàíû â òàáëèöå 11.
Òàáëèöà 10
ÌÅÒÐÎËÎÃÈ×ÅÑÊÀß ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÈÊÀ
ÌÅÒÎÄÀ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÈÇÎÌÅÐÎÂ ÃÕÖÃ È ÕËÎÐÔÅÍÎËÎÂ
ÒÎÍÊÎÑËÎÉÍÎÉ ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈÅÉ Â ÁÈÎÑÐÅÄÀÕ
┌─────────┬───────────────┬────────────┬───────────┬─────────────┬─────────────┐
│Ïåñòèöèä │
Àíàëèçèðóåìûé │ Ñðåäíåå │Ñòàíäàðòíîå│Îòíîñèòåëüíîå│Äîâåðèòåëüíûé│
│ │ îáúåêò
│ çíà÷åíèå │îòêëîíåíèå,│ ñòàíäàðòíîå │ èíòåðâàë,
│
│ │ │îïðåäåëåíèÿ,│ +/- %
│îòêëîíåíèå, %│ +/-
% │
│ │ │ %
│ │ │ │
├─────────┼───────────────┼────────────┼───────────┼─────────────┼─────────────┤
│ÃÕÁ │Êðîâü │44,00 │5,47 │0,12 │6,78 │
│ │Ïî÷êè │59,40 │16,79 │0,28 │20,81 │
│ │Ïå÷åíü │53,40 │14,52 │0,27 │17,99 │
│ │Ñåðäöå │63,00 │7,42 │0,12 │9,20 │
│ │Ìîçã │93,00 │15,65 │0,17 │19,39 │
│ │Æèð │53,50 │19,64 │0,37 │24,34 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │83,33 │10,79 │0,13 │26,84 │
│ │ßäðà │90,00 │7,07 │0,08 │17,59 │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │85,00 │11,18 │0,13 │27,81 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│àëüôà- │Êðîâü │50,00 │0 │0 │0 │
│ÃÕÖà │Ïî÷êè │59,03 │6,01 │0,10 │14,95 │
│ │Ïå÷åíü │27,77 │11,82 │0,42 │29,40 │
│ │Ñåðäöå │79,37 │12,62 │0,17 │31,39 │
│ │Ìîçã │55,56 │11,82 │0,21 │29,40 │
│ │Æèð │41,67 │0 │0 │0 │
│ │ßäðà │86,67 │15,99 │0,18 │39,77 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │86,67 │24,04 │0,28 │59,79 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│66,67 │12,47 │0,19 │31,02 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │70,00 │10,00 │0,14 │24,87 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│ãàììà- │Êðîâü │50,00 │0 │0 │0 │
│ÃÕÖà │Ïî÷êè │86,81 │6,01 │0,07 │14,95 │
│ │Ïå÷åíü │27,77 │11,82 │0,42 │29,40 │
│ │Ñåðäöå │62,50 │0 │0 │0 │
│ │Ìîçã │69,45 │12,02 │0,17 │29,90 │
│ │Æèð │41,67 │0 │0 │0 │
│ │ßäðà │86,67 │5,76 │0,07 │14,33 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │90,00 │0 │0 │0 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│70,00 │10,00 │0,14 │24,87 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │80,00 │20,00 │0,25 │49,75 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│áåòà-ÃÕÖÃ│Êðîâü │80,00 │0 │0 │0 │
│ │Ïî÷êè │83,34 │0 │0 │0 │
│ │Ïå÷åíü │31,25 │10,01 │0,32 │24,90 │
│ │Ñåðäöå │79,87 │6,94 │0,09 │17,26 │
│ │Ìîçã │76,39 │12,02 │0,16 │29,90 │
│ │Æèð │34,39 │12,04 │0,35 │29,95 │
│ │ßäðà │96,67 │5,76 │0,06 │14,33 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │96,67 │5,57 │0,06 │13,85 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│70,00 │10,00 │0,14 │24,87 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │80,00 │20,00 │0,25 │49,75 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│äåëüòà- │Êðîâü │56,67 │5,77 │0,10 │17,61 │
│ÃÕÖà │Ïî÷êè │86,81 │6,01 │0,07 │14,95 │
│ │Ïå÷åíü │41,67 │0 │0 │0 │
│ │Ñåðäöå │55,56 │12,03 │0,22 │29,92 │
│ │Ìîçã │48,61 │12,02 │0,25 │29,90 │
│ │Æèð │52,09 │10,41 │0,20 │25,89 │
│ │ßäðà │100,00 │0 │0 │0 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │93,33 │13,03 │0,14 │32,41 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│66,67 │12,47 │0,19 │31,02 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │80,00 │0 │0 │0 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│ÏÕÔ │Êðîâü │36,67 │5,76 │0,16 │17,61 │
│ │Ïî÷êè │26,48 │9,01 │0,35 │14,43 │
│ │Ïå÷åíü │21,08 │2,83 │0,07 │2,93 │
│ │Ñåðäöå │41,19 │5,35 │0,13 │5,61 │
│ │Ìîçã │51,28 │10,00 │0,20 │24,87 │
│ │Æèð │49,52 │5,12 │0,10 │6,35 │
│ │ßäðà │16,00 │7,07 │0,44 │17,56 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │80,00 │20,00 │0,25 │49,75 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│32,00 │8,00 │0,25 │19,90 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │53,33 │24,04 │0,28 │59,79 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│2,3,4,6- │Êðîâü │41,67 │2,88 │0,07 │8,80 │
│ÒåÕÔ │Ïî÷êè │71,43 │0 │0 │0 │
│ │Ïå÷åíü │61,09 │9,08 │0,15 │22,58 │
│ │Ñåðäöå │79,89 │13,06 │0,16 │13,71 │
│ │Ìîçã │85,00 │18,71 │0,22 │23,19 │
│ │Æèð │86,00 │21,91 │0,25 │27,15 │
│ │ßäðà │36,67 │5,76 │0,16 │14,33 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │60,00 │20,00 │0,33 │49,75 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│17,33 │4,62 │0,27 │11,49 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │80,00 │34,64 │0,43 │86,16 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│2,4,5-ÒÕÔ│Êðîâü │40,00 │0 │0 │0 │
│ │Ïî÷êè │78,17 │11,11 │0,14 │27,63 │
│ │Ïå÷åíü │32,78 │10,46 │0,32 │16,64 │
│ │Ñåðäöå │71,90 │7,45 │0,10 │9,23 │
│ │Ìîçã │62,22 │7,97 │0,13 │19,82 │
│ │Æèð │56,07 │7,92 │0,14 │12,60 │
│ │ßäðà │40,00 │0 │0 │0 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │86,67 │12,47 │0,14 │31,02 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│16,00 │4,00 │0,25 │9,95 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî-
│86,67 │12,47 │0,14 │31,02 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│2,4-ÄÕÔ │Êðîâü │28,33 │2,82 │0,10 │8,61 │
│ │Ïî÷êè │38,00 │7,42 │0,20 │9,20 │
│ │Ïå÷åíü │44,00 │11,18 │0,25 │13,85 │
│ │Ñåðäöå │36,00 │5,48 │0,15 │6,78 │
│ │Ìîçã │30,00 │0 │0 │0 │
│ │Æèð │40,00 │10,00 │0,25 │12,39 │
│ │ßäðà │33,33 │12,47 │0,37 │31,02 │
│ │Ìèòîõîíäðèè │57,33 │24,72 │0,43 │61,48 │
│ │Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│17,33 │4,62 │0,27 │11,49 │
│ │ôðàêöèÿ │ │ │ │ │
│ │Ïîñòìèêðîñî- │66,67 │24,04 │0,36 │59,79 │
│ │ìàëüíàÿ
ôðàêöèÿ│ │ │ │ │
│4-ÕÔ │Êðîâü │37,50 │5,00 │0,13 │7,96 │
│ │Ïî÷êè │30,00 │5,77 │0,19 │9,18 │
│ │Ïå÷åíü │20,00 │10,00 │0,50 │24,87 │
│ │Ñåðäöå │37,50 │17,09 │0,46 │27,19 │
│ │Ìîçã │40,00 │8,19 │0,20 │13,03 │
│ │Æèð │35,00 │5,77 │0,16 │9,18 │
│ │Ñóáêëåòî÷íûå │44,00 │12,00 │0,27 │29,85 │
│ │ôðàêöèè
ïå÷åíè │ │ │ │ │
└─────────┴───────────────┴────────────┴───────────┴─────────────┴─────────────┘
Òàáëèöà 11
ÏÐÅÄÅËÛ ÎÁÍÀÐÓÆÅÍÈß ÃÀÌÌÀ-ÃÕÖÃ,
ÅÃÎ ÈÇÎÌÅÐÎÂ È ÌÅÒÀÁÎËÈÒÎÂ Â ÁÈÎÑÓÁÑÒÐÀÒÀÕ
┌───────────┬───────────────────────┐┌────────────┬───────────────────────┐
│
Ïåñòèöèä │
Àíàëèçèðóåìûé îáúåêò ││ Ïåñòèöèä
│ Àíàëèçèðóåìûé îáúåêò │
│ ├───────────────┬───────┤│ ├───────────────┬───────┤
│ │ êðîâü,
│îðãàíû,││
│ êðîâü, │îðãàíû,│
│ │ ñóáêëåòî÷íûå │òêàíè, ││ │ ñóáêëåòî÷íûå │òêàíè, │
│ │ôðàêöèè ïå÷åíè,│ ìã/êã ││ │ôðàêöèè ïå÷åíè,│ ìã/êã
│
│ │ ìã/ë
│ ││ │ ìã/ë
│ │
├───────────┼───────────────┼───────┤├────────────┼───────────────┼───────┤
│ÃÕÁ │0,02 │0,1 ││2,3,4,6-ÒåÕÔ│0,01 │0,05 │
│àëüôà-ÃÕÖÃ
│0,1 │0,5 ││2,4,6-ÒÕÔ │0,01 │0,05 │
│ãàììà-ÃÕÖÃ
│0,1 │0,5 ││2,4,5-ÒÕÔ │0,01 │0,05 │
│áåòà-ÃÕÖà │0,1
│0,5 ││2,4-ÄÕÔ │0,02 │0,1 │
│äåëüòà-ÃÕÖÃ│0,1 │0,5 ││4-ÕÔ │0,02 │0,1 │
│ÏÕÔ │0,01 │0,05 ││ │ │ │
└───────────┴───────────────┴───────┘└────────────┴───────────────┴───────┘
Èçáèðàòåëüíîñòü ìåòîäà. Ìåòîä èçáèðàòåëåí
â ïðèñóòñòâèè ÃÕÁ, ÃÕÏÊ, ÃÏÕ, 2,4'- è 4,4'-ÄÄÒ, ÄÄÄ, ÄÄÝ è íåêîòîðûõ äðóãèõ
ÕÎÏ.
Ðåàêòèâû è ðàñòâîðû. Àöåòîí ÷. í-Ãåêñàí
÷. Ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèô. 2-Ôåíîêñèýòàíîë ÷. Àììèàê âîäíûé 25-ïðîöåíòíûé ÷.
Ïåðîêñèä âîäîðîäà ÷. Ñóëüôàò íàòðèÿ áåçâîäíûé ÷. (ïðîêàëåííûé). Õëîðèä íàòðèÿ
õ.÷. Íèòðàò ñåðåáðà õ.÷.
Ïðîÿâëÿþùèå ðåàãåíòû. N 1: ê ðàñòâîðó 0,5
ã íèòðàòà ñåðåáðà â 5 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 7 - 10 ìë
25-ïðîöåíòíîãî âîäíîãî àììèàêà. Ïîëó÷åííóþ ñìåñü ðàçáàâëÿþò àöåòîíîì äî 100 ìë
è ïåðåìåøèâàþò. Õðàíÿò â ñêëÿíêå òåìíîãî ñòåêëà.
N 2: ê ðàñòâîðó 0,1 ã íèòðàòà ñåðåáðà â 1
ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 10 ìë 2-ôåíîêñèýòàíîëà, 190 ìë àöåòîíà, 1 -
2 êàïëè ïåðîêñèäà âîäîðîäà, òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò. Õðàíÿò â ñêëÿíêå òåìíîãî
ñòåêëà.
Ñòàíäàðòíûå ðàñòâîðû ïðåïàðàòîâ â
í-ãåêñàíå ñ êîíöåíòðàöèåé 100 è 10 ìêã/ìë õðàíÿò â õîëîäèëüíèêå â ïîñóäå ñ
ïðèøëèôîâàííûìè ïðîáêàìè.
Ïðèáîðû
è ïîñóäà. Àïïàðàò
äëÿ âñòðÿõèâàíèÿ. Áàíÿ âîäÿíàÿ.
Èñïàðèòåëü ðîòàöèîííûé
ÈÐ-1Ì. Ìèêðîèçìåëü÷èòåëü òêàíåé
ÐÒ-2.
Îáëó÷àòåëü ðòóòíî-êâàðöåâûé íàñòîëüíûé
ÎÊÍ-11. Óñòàíîâêà
êîìïðåññîðíàÿ. Öåíòðèôóãà ëàáîðàòîðíàÿ êëèíè÷åñêàÿ ÎÏÍ-3.
Âîðîíêè
äåëèòåëüíûå è
êîíè÷åñêèå. Êàìåðû õðîìàòîãðàôè÷åñêèå. Êîëáû:
êîíè÷åñêèå,
ãðóøåâèäíûå íà øëèôå,
ìåðíûå. Ìèêðîïèïåòêè
âìåñòèìîñòüþ 0,1 ìë. Ìèêðîøïðèöû íà 10 ìêë ÌØ-10. Ïèïåòêè
ìåðíûå.
Ïðîáèðêè ìåðíûå
íà øëèôå. Ïóëüâåðèçàòîðû ñòåêëÿííûå. Öèëèíäðû
ìåðíûå. Ïëàñòèíêè
õðîìàòîãðàôè÷åñêèå ñòàíäàðòíûå "Ñèëóôîë" èëè
"Êèçåëüãåëü
60" F ðàçìåðîì 20 x 20 ñì.
254
Îòáîð è õðàíåíèå ïðîá. Ïðîáû îòáèðàþò â
ëàáîðàòîðíûõ óñëîâèÿõ è ñðàçó æå ïîìåùàþò â èñïàðèòåëüíóþ êàìåðó õîëîäèëüíèêà
(õðàíÿò íà ëüäó íå äîëüøå 5 ñóò.).
Õîä àíàëèçà. Ýêñòðàêöèÿ. Ñóùåñòâóþò äâà
ñïîñîáà ýêñòðàêöèè ïðåïàðàòà èç ïðîá êðîâè.
1. Öåëüíóþ êðîâü (1 - 5 ìë) ïîìåùàþò â
ìåðíóþ ïðîáèðêó íà øëèôå, ïðèëèâàþò 3 - 5 ìë í-ãåêñàíà, ïåðåìåøèâàþò è äàëåå
ýêñòðàãèðóþò íà àïïàðàòå äëÿ âñòðÿõèâàíèÿ ñî ñðåäíåé èíòåíñèâíîñòüþ â òå÷åíèå 5
- 7 ìèí.
Ïîñëå ðàçäåëåíèÿ ñëîåâ ãåêñàíîâûé
ýêñòðàêò (âåðõíèé ñëîé) îòäåëÿþò ñ ïîìîùüþ ïèïåòêè, ñîåäèíåííîé ñ ðåçèíîâîé
ãðóøåé, è ôèëüòðóþò ÷åðåç ñëîé áåçâîäíîãî ñóëüôàòà íàòðèÿ, ïîìåùåííîãî â
êîíè÷åñêóþ âîðîíêó ñ ïîäëîæêîé èç îáåçæèðåííîé âàòû. Ýêñòðàêöèþ ïîâòîðÿþò,
ýêñòðàêòû îáúåäèíÿþò.
Åñëè îáðàçóåòñÿ óñòîé÷èâàÿ ýìóëüñèÿ è
ôàçû ðàçäåëèòü òðóäíî, â ïðîáèðêó âíîñÿò íåñêîëüêî êàïåëü ýòàíîëà èëè 0,1 - 0,2
ã (íà êîí÷èêå ñêàëüïåëÿ) õëîðèäà íàòðèÿ.
2. Ïðîáó êðîâè (1 - 5 ìë) òùàòåëüíî
ðàñòèðàþò ñ èçáûòî÷íûì êîëè÷åñòâîì áåçâîäíîãî ñóëüôàòà íàòðèÿ (äî ñûïó÷åãî
ñîñòîÿíèÿ). Ïîìåùàþò â ïëîñêîäîííóþ êîëáó íà øëèôå è ýêñòðàãèðóþò í-ãåêñàíîì, âçÿòûì â 1,5-êðàòíîì ïî îòíîøåíèþ ê ãîìîãåíàòó îáúåìå.
Ýêñòðàêò îñòîðîæíî äåêàíòèðóþò, äîïîëíèòåëüíî ôèëüòðóÿ ÷åðåç ñëîé áåçâîäíîãî
ñóëüôàòà íàòðèÿ.
Ïðîáó ñóáêëåòî÷íîé ôðàêöèè ýêñòðàãèðóþò
í-ãåêñàíîì (ñì. ñïîñîá 1 äëÿ êðîâè). Ïðè îáðàçîâàíèè óñòîé÷èâîé ýìóëüñèè
ñëåäóåò ïðîâåñòè öåíòðèôóãèðîâàíèå ñìåñè ïðè 3000 - 5000 îá./ìèí. â òå÷åíèå 3 - 5 ìèí.
Ãåêñàíîâûé ýêñòðàêò îòäåëÿþò è ôèëüòðóþò
÷åðåç ñëîé áåçâîäíîãî ñóëüôàòà íàòðèÿ. Ýêñòðàêöèþ ïîâòîðÿþò, ýêñòðàêòû
îáúåäèíÿþò.
Íàâåñêó îðãàíîâ è òêàíåé (ïå÷åíè, ïî÷åê,
ñåðäöà è äð.) òùàòåëüíî èçìåëü÷àþò íîæíèöàìè, çàòåì ïîìåùàþò â òåôëîíîâóþ
ïðîáèðêó, çàëèâàþò í-ãåêñàíîì (5 ìë ðàñòâîðèòåëÿ íà 1 ã ïðîáû) è ãîìîãåíèçèðóþò
íà ìèêðîèçìåëü÷èòåëå òêàíåé ïðè 3000 - 5000 îá./ìèí. â òå÷åíèå 5 ìèí. Ýêñòðàêò äåêàíòèðóþò ÷åðåç ñëîé
áåçâîäíîãî ñóëüôàòà íàòðèÿ â ïðèåìíóþ êîëáó. Ýêñòðàêöèþ ïîâòîðÿþò, ýêñòðàêòû
îáúåäèíÿþò.
Êîíöåíòðèðîâàíèå ýêñòðàêòîâ ïðîâîäÿò â
âàêóóìå íà ðîòàöèîííîì èñïàðèòåëå ïðè òåìïåðàòóðå âîäÿíîé áàíè 35 - 38 °C,
çàòåì â òîêå àçîòà îñîáîé ÷èñòîòû äî îáúåìà 0,1 - 0,2 ìë.
Õðîìàòîãðàôèðîâàíèå â
òîíêîì ñëîå ñîðáåíòà. Àëèêâîòíóþ ÷àñòü
(0,1 ìë)
ýêñòðàêòà ñ ïîìîùüþ ìèêðîïèïåòêè (ìèêðîøïðèöà) íàíîñÿò íà
õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ ïëàñòèíêó
"Ñèëóôîë" èëè "Êèçåëüãåëü 60" F .
254
Ðÿäîì ñ ïðîáîé íàíîñÿò ðàçëè÷íûå êîëè÷åñòâà
ñòàíäàðòíûõ ðàñòâîðîâ
èçîìåðîâ ÃÕÖÃ, õëîðèðîâàííûõ
ôåíîëîâ (ïî 0,2; 1; 2; 5 ìêã êàæäîãî
êîìïîíåíòà).
Ïëàñòèíêó
ïîìåùàþò â êàìåðó
äëÿ õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ,
ñîäåðæàùóþ ñìåñü
í-ãåêñàíà ñ àöåòîíîì
â ñîîòíîøåíèè 4:1
("Ñèëóôîë")
èëè 6:1 ("Êèçåëüãåëü 60" F ). Âðåìÿ íàñûùåíèÿ êàìåðû
254
30 ìèí.
Ïîñëå õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ (äëèíà ïðîáåãà
ðàñòâîðèòåëÿ 15 - 17 ñì) ïëàñòèíêó ïðîâåòðèâàþò â ãîðèçîíòàëüíîì ïîëîæåíèè, à
çàòåì îáðàáàòûâàþò îäíèì èç ïðîÿâëÿþùèõ ðåàãåíòîâ ñ ïîìîùüþ ïóëüâåðèçàòîðà,
ïîäêëþ÷åííîãî ê âîçäóøíîìó êîìïðåññîðó.
Çîíû
ëîêàëèçàöèè ãàììà-, àëüôà-, áåòà-
è äåëüòà-ÃÕÖÃ,
ïåíòàõëîðôåíîëà, 2,3,4,6-òåòðàõëîðôåíîëà, 2,4,6- è
2,4,5-òðèõëîðôåíîëà,
2,4-äèõëîðôåíîëà, 4-õëîðôåíîëà îáíàðóæèâàþòñÿ
íà õðîìàòîãðàììàõ ïîñëå îáëó÷åíèÿ
ÓÔ-ñâåòîì â âèäå áóðûõ ïÿòåí
(âåëè÷èíû R ïðèâåäåíû â òàáëèöå 12).
f
Òàáëèöà 12
ÂÅËÈ×ÈÍÛ R ÈÇÎÌÅÐΠÃÅÊÑÀÕËÎÐÖÈÊËÎÃÅÊÑÀÍÀ
F
È ÍÅÊÎÒÎÐÛÕ ÕËÎÐÈÐÎÂÀÍÍÛÕ ÔÅÍÎËÎÂ ÍÀ
ÏËÀÑÒÈÍÊÀÕ
"ÑÈËÓÔÎË" È
"ÊÈÇÅËÜÃÅËÜ 60" F
254
┌─────────────────────────┬─────────────────────┬─────────────────────────┐
│ Ïåñòèöèä │"Êèçåëüãåëü 60"
F ,│"Ñèëóôîë",
ïîäâèæíàÿ ôàçà│
│ │ 254 │ ãåêñàí - àöåòîí (4:1) │
│ │ ïîäâèæíàÿ ôàçà │ │
│ │ãåêñàí - àöåòîí
(6:1)│ │
├─────────────────────────┼─────────────────────┼─────────────────────────┤
│ÃÕÁ │0,96 │- │
│àëüôà-ÃÕÖà │0,87 │0,98 │
│ãàììà-ÃÕÖà │0,79 │0,81 │
│áåòà-ÃÕÖà │0,73 │0,77 │
│äåëüòà-ÃÕÖà │0,64 │0,74 │
│2,3,4,5,6-Ïåíòàõëîðôåíîë
│0,18 │0,69 │
│2,3,4,6-Òåòðàõëîðôåíîë │0,39 │0,71 │
│2,4,6-Òðèõëîðôåíîë │0,57 │0,73 │
│2,4,5-Òðèõëîðôåíîë │0,43 │0,68 │
│2,4-Äèõëîðôåíîë │0,42 │0,65 │
│4-Õëîðôåíîë │0,34 │0,60 │
└─────────────────────────┴─────────────────────┴─────────────────────────┘
Êîëè÷åñòâåííóþ îöåíêó ñîäåðæàíèÿ èçîìåðîâ
ÃÕÖÃ è ïîëèõëîðèðîâàííûõ ôåíîëîâ â ïðîáå ïðîâîäÿò âèçóàëüíî èëè
äåíñèòîìåòðè÷åñêè íà ïðèáîðå òèïà "Îïòîí".
Îñòàâøóþñÿ ÷àñòü ýêñòðàêòà ïðè
íåîáõîäèìîñòè òàêæå ïîäâåðãàþò õðîìàòîãðàôèðîâàíèþ ïîñëå ýêñïðåññ-î÷èñòêè
êîíöåíòðèðîâàííîé ñåðíîé êèñëîòîé.
Ê ýêñòðàêòó, êîëè÷åñòâåííî ïåðåíåñåííîìó
â öåíòðèôóæíóþ ïðîáèðêó, ïðèáàâëÿþò 2 - 3 êàïëè êîíöåíòðèðîâàííîé ñåðíîé
êèñëîòû, ïîñëå ÷åãî ñîäåðæèìîå âñòðÿõèâàþò. Ïîñëå ðàçäåëåíèÿ ôàç (÷åðåç 5 - 7
ìèí.) ýêñòðàêò íàíîñÿò ñ ïîìîùüþ ìèêðîïèïåòêè íà õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ ïëàñòèíêó è
äàëåå ïîñòóïàþò òàê æå, êàê îïèñàíî âûøå.  ýòîì ñëó÷àå îáíàðóæèâàþòñÿ âñå
ïåðå÷èñëåííûå êîìïîíåíòû, êðîìå 4-õëîðôåíîëà.
Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà. Ñîäåðæàíèå
ãàììà-ÃÕÖÃ, åãî èçîìåðîâ è ìåòàáîëèòîâ â àíàëèçèðóåìîì îáúåêòå (X, ìã/êã, ìã/ë)
ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå:
AV
2
X = K ---,
V P
1
ãäå:
K - ïîïðàâî÷íûé êîýôôèöèåíò, ïðèâåäåííûé â
òàáëèöå 13;
A
- ñîäåðæàíèå ïðåïàðàòà,
îáíàðóæåííîå â àëèêâîòå ýêñòðàêòà,
âçÿòîé äëÿ õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ, ìêã;
V
- îáúåì àëèêâîòû
ýêñòðàêòà, íàíåñåííîé íà
1
õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ
ïëàñòèíó, ìë;
V -
êîíå÷íûé îáúåì ýêñòðàêòà, ìë;
2
P - ìàññà (îáúåì) ïðîáû, ã (ìë).
Òàáëèöà 13
ÏÎÏÐÀÂÎ×ÍÛÉ ÊÎÝÔÔÈÖÈÅÍÒ Ê ÐÀÑ×ÅÒÀÌ ÑÎÄÅÐÆÀÍÈß
ÃÀÌÌÀ-ÃÕÖÃ,
ÅÃÎ ÈÇÎÌÅÐÎÂ È ÌÅÒÀÁÎËÈÒÎÂ Â ÁÈÎÑÓÁÑÒÐÀÒÀÕ
┌────────────────┬───┬──────┬──────┬─────┬───────┬───┬────────┬──────┬──────┬────┬────┐
│
Îáúåêò │ÃÕÁ│àëüôà-│ãàììà-│áåòà-│äåëüòà-│ÏÕÔ│2,3,4,6-│2,4,6-│2,4,5-│2,4-│4-ÕÔ│
│
èññëåäîâàíèÿ │ │ ÃÕÖà │ ÃÕÖà │ÃÕÖà │
ÃÕÖÃ │ │
ÒåÕÔ │ ÒÕÔ │ ÒÕÔ
│ÄÕÔ │<*> │
├────────────────┼───┼──────┼──────┼─────┼───────┼───┼────────┼──────┼──────┼────┼────┤
│Êðîâü
│2,3│2,0 │2,0 │1,7
│1,8 │2,7│2,4 │2,7 │2,5
│3,5 │2,7 │
│Ïî÷êè
│1,7│1,7 │1,2 │1,2
│1,2 │3,9│1,4 │1,4 │1,3
│2,6 │3,3 │
│Ïå÷åíü
│1,9│3,6 │3,6 │3,2
│2,4 │4,7│1,6 │1,2 │3,0
│2,3 │5,0 │
│Ñåðäöå
│1,6│1,3 │1,6 │1,3
│1,8 │2,4│1,1 │1,2 │1,4
│2,8 │2,7 │
│Ìîçã
│1,1│1,8 │1,4 │1,3
│2,0 │1,9│1,2 │1,2 │1,6
│3,3 │2,5 │
│Æèð
│1,9│2,4 │2,4 │2,9
│1,9 │2,0│1,8 │1,2 │1,8
│2,5 │2,8 │
│ßäðà
│1,1│1,2 │1,2 │1,0
│1,0 │6,0│2,7 │2,7 │2,5
│3,0 │2,3 │
│Ìèòîõîíäðèè
│1,2│1,2 │1,1 │1,0
│1,1 │1,3│1,7 │1,7 │1,2
│1,7 │2,3 │
│Ìèêðîñîìàëüíàÿ
│- │1,5 │1,4
│1,4 │1,5 │3,1│2,9 │2,7 │6,0
│5,7 │2,3 │
│ôðàêöèÿ
│ │ │ │ │ │
│ │ │ │
│ │
│Ïîñòìèêðîñîìàëü-│1,2│1,4 │1,3
│1,3 │1,3 │1,9│1,7 │1,2 │1,2
│1,5 │2,3 │
│íàÿ ôðàêöèÿ
│ │ │ │ │ │
│ │ │ │
│ │
└────────────────┴───┴──────┴──────┴─────┴───────┴───┴────────┴──────┴──────┴────┴────┘
--------------------------------
<*> Áåç ïðèìåíåíèÿ î÷èñòêè
ýêñòðàêòà ñåðíîé êèñëîòîé.
Òðåáîâàíèÿ áåçîïàñíîñòè. Íåîáõîäèìî
ñîáëþäàòü îáùåïðèíÿòûå ïðàâèëà áåçîïàñíîñòè ïðè ðàáîòå ñ îðãàíè÷åñêèìè
ðàñòâîðèòåëÿìè è òîêñè÷íûìè âåùåñòâàìè. Íå äîïóñêàòü ïîïàäàíèÿ
ïîëèõëîðèðîâàííûõ ôåíîëîâ íà êîæó!