Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
3 января 1985 г. N 3195-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ РЕЛДАНА
И ПРОДУКТА ЕГО ГИДРОЛИЗА 3,5,5-ТРИХЛОРПИРИДИНОЛА
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
1. Краткая
характеристика препаратов
Cl Cl
\/ \\/
││ │
S
/\ //\
││ OCH М.м. 322,6.
Cl N
O--P / 3
\
OCH
3
Релдан (хлорпирифосметил, даурелдан,
петрал, ДОWСО-214, ENT-27520, ОМ-1155) - O,O-диметил-O-(3,5,6-трихлорпиридил-2)тиофосфат.
Релдан - белый кристаллический порошок со слабым запахом меркаптана,
температура плавления 45,5 - 46,5 °C. Растворимость в воде 4 мг/л. Хорошо
растворим в ацетоне, ацетонитриле, бензоле,
сероуглероде, хлороформе, метиленхлориде, диэтиловом эфире, плохо растворим в алифатических
углеводородах и спиртах. В водных растворах гидролизуется
с образованием 3,5,6-трихлор-2-пиридинола и O,O-диметилфосфата,
Летучесть 0,014 мг/куб. м при 0 °C, 0,75 мг/куб. м при 25 °C, 3,1 мг/куб. м при
35 °C. В воздухе может находиться в виде аэрозоля и паров. ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м.
Во влажной атмосфере под действием УФ-света релдан гидролизуется до 3,5,6-трихлор-2-пиридинола.
2. Методика
определения релдана и 3,5,6-трихлорпиридинола
в воздухе рабочей зоны
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении релдана методом газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной (ТСХ)
хроматографии.
ГЖХ-определение релдана
проводят на газовом хроматографе, снабженном термоионным детектором (ТИД).
ТСХ-определение релдана
и 3,5,6-трихлор-2-пиридинола основано на хроматографировании
препаратов в тонком слое силикагеля и обнаружении обоих соединений по реакции с
азотнокислым серебром или обнаружении только релдана
по реакции с бромфеноловым реагентом.
Отбор проб с концентрированием.
2.1.2. Метрологическая характеристика
ГЖХ
Предел измерения в хроматографируемом
объеме - 0,0005 мкг (0,5 нг). Предел измерения в
воздухе - 0,02 мг/куб. м (при отборе 25 л воздуха).
Диапазон линейной зависимости величины хроматографического сигнала от величины количества
введенного в хроматограф релдана: 0,5 - 10 нг.
Диапазон измеряемых концентраций: 0,02 -
0,5 мг/куб. м.
Граница суммарной погрешности при
определении релдана методом ГЖХ составляет 15,8%.
ТСХ
При применении реагента на основе
азотнокислого серебра нижний предел измерения релдана
и 3,5,6-трихлор-2-пиридинола - 0,3 мкг (0,06 мг/куб. м); при применении
реагента на основе бромфенолового синего нижний
предел измерения релдана 0,5 мкг (0,1 мг/куб. м).
Граница суммарной погрешности при определении релдана
составляет 19,7%, 3,5,6-трихлор-2-пиридинола - 20,6%.
2.1.3. Избирательность метода
При определении релдана
методом ГЖХ с ТИД на колонке с фазой 5% SE-30 определению может мешать метафос. Для идентификации релдана
в присутствии метафоса используется альтернативная
колонка (фаза 5% OV-1), на которой время удерживания релдана
по отношению ко времени удерживания метафоса равно
0,76.
Сочетание методов ГЖХ и ТСХ также
позволяет идентифицировать релдан в присутствии метафоса и других фосфорорганических и хлорорганических
пестицидов.
2.2. Реактивы,
растворы, материалы
н-Гексан ч, ТУ
6-09-3375-78.
Ацетон ч, ГОСТ
2603-79.
Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6262-79.
Фильтры бумажные "синяя лента",
ТУ 6-09-1678-77.
Пенополиуретан (порезанный ножницами до размера 3 - 6 мм), отмытый ацетоном в
течение 12 часов в аппарате Сокслета.
Серебро азотнокислое хч,
ГОСТ 1277-75.
Аммиак водный чда,
ГОСТ 3780-74.
Бромфеноловый синий (индикатор) чда, ТУ 6-09-1058-76.
Уксусная кислота хч,
ГОСТ 22300-76.
Лимонная кислота осч,
ТУ 6-09-684-75.
Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Пластинки "Силуфол"
(Хемапол, ЧССР).
Неподвижные фазы:
5% SE-30 на хроматоне
N-AW-HMDS (0,16 - 0,20), Хемапол, ЧССР.
5% OV-1 на диатомите CZQ (80 - 100 меш).
Азот особой чистоты, содержание O не более 0,003%, ГОСТ 9293-74.
2
Водород из баллона или получаемый из
генератора водорода.
Воздух из баллона или нагнетаемый
компрессором.
Проявляющие реагенты:
1.
Реагент на основе
AgNO : 0,5
г AgNO растворяют
в 5 мл
3 3
дистиллированной воды,
после чего прибавляют
7 мл аммиака и разбавляют
раствор ацетоном
до объема 100 мл. Готовят в день употребления. Препараты
проявляются в
виде пятен серо-черного цвета.
2.
Реагент на основе бромфенолового синего (БФС) и AgNO . Готовят два
3
раствора: "а"
- 0,5% водно-ацетоновый раствор AgNO (1 часть воды и 3 ч.
3
ацетона) и
"б" - 0,05 г БФС
растворяют в 10 мл ацетона.
Раствор "б"
разбавляют раствором
"а" до объема
100 мл. Хранят в темном, прохладном
месте. Для осветления
фона пластинки после опрыскивания проявляющей смесью
"б"
используют 5% раствор уксусной кислоты или 2% раствор лимонной кислоты.
Релдан проявляется в виде сине-лилового пятна.
Основные стандартные растворы релдана (N 1) и 3,5,6-трихлор-2-пиридинола (N 2) в ацетоне,
100 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение 3-х месяцев.
Рабочие стандартные растворы релдана и 3,5,6-трихлор-2-пиридинола в ацетоне 1, 2, 5
мкг/мл готовят соответствующим разбавлением из основных стандартных растворов.
Хранят в холодильнике 6 дней.
2.3. Приборы и
посуда
Хроматограф с термоионным детектором.
Колонка стеклянная (1 м x 3 мм),
заполненная SE-30 5% на хроматоне N-AW-HMDS (0,16 -
0,20 мм).
Альтернативная стеклянная колонка (1,8 м
x 3 мм), заполненная 5% OV-1 на диатомите CZQ (80 - 100 меш).
Аспирационное устройство.
Аппарат для встряхивания АВУ-6с, ТУ
64-1-2451-78.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-76, с набором колб.
Колбы мерные вместимостью 25 мл, 50 мл,
100 мл, ГОСТ 1770-74.
Стаканы химические вместимостью 50, 100
мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы конические вместимостью 50, 100 мл,
ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные вместимостью 50 мл ОКШ
50-14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.
Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5
- 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Пипетки вместимостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ
1770-74.
Микропипетки вместимостью 0,1 мл, ГОСТ
1770-74.
Микрошприцы МШ-10М, ТУ 2-83-106.
Фильтродержатели.
Аллонжи, плотно заполненные
пенополиуретановой крошкой.
2.4. Отбор проб
Воздух, содержащий релдан
в виде паров и аэрозоля, протягивают со скоростью 1 л/мин. через бумажный
фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель,
и последовательно соединенный аллонж с пенополиуретановой крошкой. Для
определения 1/2 ПДК следует отобрать 4 л воздуха. Закрытые пробы могут сохраняться
в холодильнике до 10 дней.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Подготовка проб к анализу
Бумажные фильтры, содержащие аэрозоль,
вынимают из фильтродержателя, измельчают ножницами
(до 1 см), помещают в коническую колбу и заливают 25 мл ацетона, закрывают
колбу и встряхивают ее на аппарате для встряхивания в течение 30 минут. Сливают
растворитель, экстракцию повторяют. Объединенные экстракты переносят в колбу
для отгонки растворителей и упаривают на вакуумном ротационном испарителе при
температуре бани не более 40 °C до 2 мл. В эту же колбу переносят экстракт,
полученный при промывке аллонжа.
Аллонж с пенополиуретановой крошкой
промывают смесью н-гексан - ацетон (3:1). Для этого
конец аллонжа, который был присоединен со стороны фильтродержателя,
опускают в колбу для отгонки растворителей, а к противоположному концу
присоединяют на стык воронку и промывают сорбент 40 - 50 мл смеси, собирая
экстракт в колбу. Растворитель отгоняют, как описано выше, до 2 - 3 мл. Остаток
растворителя отгоняют под вакуумом при комнатной температуре до 0,5 мл и
переносят в мерную пробирку со шлифом, ополаскивая колбу н-гексаном.
Доводят объем в пробирке до 1 мл.
2.5.2. Условия хроматографического
анализа
Детектор - термоионный (ТИД).
Ввод проб в хроматограф через
самоуплотняющуюся мембрану.
Неподвижная фаза
SE-30 OV-1
Температура колонки, °C 190 225
Температура испарителя, °C 210 240
Скорость газа-носителя, мл/мин. 23 23
Скорость водорода, мл/мин. 14 - 17 14 - 17
Скорость воздуха, мл/мин. 400 400
Скорость диаграммной ленты, мм/час
240 240
-10
Шкала электрометра 2 x 10
Объем вводимой пробы - 5 мкл
Время удерживания, мин. 4,5 5,8
Линейный диапазон детектирования, нг 0,5 -
10 1 - 15
2.5.3. Условия анализа методом
тонкослойной хроматографии
Экстракт после определения методом ГЖХ
упаривают до 0,2 - 0,3 мл и количественно наносят при помощи микропипетки на хроматографическую пластинку "Силуфол"
так, чтобы диаметр пятна не превышал 0,5 см. Центр пятна должен быть на
расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Пробирку с экстрактом 2 - 3 раза
ополаскивают небольшими порциями (0,2 - 0,3 мл) эфира, который также наносят в
центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см от нее наносят
стандартные растворы, содержащие 1, 3, 5 или 10 мкг препарата. Пластинку с
нанесенными растворами помещают в хроматографическую
камеру, в которую налита смесь растворителей н-гексан
- ацетон (9:1). Время насыщения камеры 30 мин. Край пластинки должен быть
погружен в раствор не более чем на 0,5 см. После поднятия фронта подвижного
растворителя на 10 см пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько
минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку опрыскивают одним
из проявляющих реагентов.
1.
После обработки реагентом на
основе AgNO (N
1) пластинку помещают
3
под источник
УФ-света
на 5 минут до появления пятен
серо-черного цвета.
Нижний предел
обнаружения релдана и 3,5,6-трихлор-2-пиридинола - 0,3 мкг.
Величина R релдана 0,52,
3,5,6-трихлор-2-пиридинола - 0,29.
f
2.
После обработки бромфеноловым реагентом пластинку оставляют на 5
мин. на воздухе, а затем опрыскивают раствором 5% уксусной или 2% лимонной
кислоты для
осветления фона. Релдан проявляется в виде синего пятна на
желтом фоне. R
0,52, нижний предел
обнаружения - 0,5 мкг.
f
3,5,6-Трихлор-2-пиридинол
этим реагентом не обнаруживается.
2.5.4. Обработка результатов анализа
Метод газожидкостной хроматографии
Количественное определение проводят
методом абсолютной калибровки. Для этого до и после анализа проб вводят в
хроматограф по 5 мкл рабочих стандартных растворов
(см. п. 2.3), измеряют высоту пиков и вычисляют среднее арифметическое из 5
определений. Если при введении в хроматограф аликвотной части (5 мкл) конечного экстракта пробы получают слишком большие
пики или происходит "зашкаливание", пробу
разбавляют н-гексаном. Концентрацию препарата в
воздухе в мг/куб. м (X) рассчитывают по формуле:
Y x H x V
2
X = -------------,
H x V
x V
1 1
20
где:
Y
- количество препарата
в хроматографируемом объеме стандартного
раствора, мкг;
H -
высота пика на хроматограмме стандарта, мм;
1
H -
высота пика на хроматограмме пробы, мм;
2
V - общий объем анализируемого раствора,
мл;
V - хроматографируемый объем пробы, мл;
1
V
- объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным
20
условиям, л.
Метод тонкослойной хроматографии
Количественное определение проводят путем
сравнения интенсивности окраски и измерения пятен пробы и того стандарта,
площадь пятна которого наиболее близка по величине к площади пятна пробы.
Количество препарата в воздухе в мг/куб. м (X) рассчитывают по формуле:
Y x S
2
X = --------,
S x V
1 20
где:
Y - количество
пестицида в хроматографируемом объеме стандартного
раствора, мкг;
S -
площадь пятна на хроматограмме стандарта, кв. мм;
1
S -
площадь пятна на хроматограмме пробы, кв. мм;
2
V
- объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным
20
условиям, л.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима
и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.