Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
3 января 1985 г. N 3198-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУЛЬФИДОФОСА В МЯСЕ, МОЛОКЕ И КОРМАХ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Сульфидофос - 0,0-диметил-0(3-метил-4-метилтиофенил)тиофосфат, действующее
вещество - фентион.
Структурная формула:
CH O
S CH
3 \ // --- / 3
P -O-// \\-S-CH C H O PS
/
\ ___ / 3 10 15 3 2
CH O ---
3
М.м. 278,3.
Химически чистое вещество - бесцветная
маслянистая жидкость с температурой кипения 105 - 109 °С
при 0,01 мм рт. ст., давление пара при 20 °С - 3 х 10 мм рт. ст., летучесть -
0,46 мг/куб. м. Растворимость в воде при 20 °С около 54 мг/л. Хорошо растворим
в большинстве органических растворителей. Гидролизуется
в кислой и щелочных средах.
Выпускается в
виде 50-процентного эмульгирующего концентрата.
Действующее
вещество препарата умеренно токсично для теплокровных животных.
ЛД для крыс при оральном применении - 250
мг/кг. Нанесение на кожу крыс
50
1000 мг/кг не
вызывает симптомов отравления.
Сульфидофос является инсектицидом контактного и кишечного действия. Наряду с
высокой токсичностью в отношении некоторых насекомых обладает длительным
защитным действием.
Сульфидофос опасен для пчел, и его нельзя применять во время цветения растений.
Синонимы сульфидофоса
- байтекс, лебайцид, тигувон.
2. Определение сульфидофоса в мясе, молоке и кормах
методом тонкослойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод
основан на извлечении сульфидофоса из проб исследуемых объектов
органическими растворителями, очистке
и концентрировании экстрактов
с
последующим хроматографическим разделением
на тонком слое
сорбента и
проявлением. Идентификацию препарата
проводят по величине
R
f
соответствующих стандартов, а количественное определение -
путем измерения
площадей пятен
пробы и стандартов,
учитывая визуально интенсивность их
окраски.
2.1.2. Избирательность метода
Определению сульфидофоса
не мешают пестициды, применяемые в настоящее время в сельском хозяйстве.
2.1.3. Метрологическая характеристика
метода
Сульфидофос определяемых концентраций 0,05 - 1 мг/кг. Предел обнаружения 0,5 мкг
в анализируемой пробе, что соответствует 0,05 мг/кг. Среднее значение
определения стандартных количеств составляет в органах и тканях 90%, в кормах -
80%, число параллельных определений n = 5.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; хлороформ, х.ч.,
ТУ 6-09-4263-76; н-гексан, х.ч.,
ТУ 6-09-3375-78; спирт-ректификат 96%, ТУ 6-09-1710-77; сернокислый натрий б/в,
ч.д.а., ГОСТ 4166-76; бромфеноловый
синий, ч.д.а., ТУ 6-09-3719-83; азотнокислое серебро,
х.ч., ГОСТ 1277-75; лимонная кислота, х.ч., ГОСТ 3652-74.
2.3. Приборы и
посуда
Хроматографическая пластинка "Силуфол" (ЧССР), хроматографическая камера, пипетки и микропипетки разные,
колбы мерные, склянки с притертой пробкой, стеклянные палочки, стеклянные
воронки, делительные воронки, фарфоровые чашки, фильтровальная бумага,
обезжиренная вата, ступка.
Приготовление стандартного раствора сульфидофоса. На торсионных весах взвешивают 10 мг
препарата и растворяют в мерной колбе 100 мл ацетона. В одном мл содержится 1
мкг препарата.
Приготовление проявляющего реактива.
Смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого
серебра. 1) 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра
(1:3); 2) 0,05 г бромфенолового синего растворяют в
10 мл ацетона. Последний разбавляют раствором азотнокислого серебра до объема
100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Срок хранения 10 дней.
Лимонная кислота 2-процентный раствор. Необходима для осветления фона пластинки после опрыскивания
проявляющей смесью.
2.4. Описание
определения
2.4.1. Экстракция и очистка
Ткани животных. Исследуемые пробы мышц,
печени, почек, сердца, легких и др. весом 10 г тщательно измельчают, переносят
в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 - 15 г сернокислого безводного
натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформом при
комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через
смоченный бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухие остатки
растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора. Экстракт переносят в
делительную воронку, сюда же добавляют 25 мл дистиллированной воды и 30 мл
хлороформа. Осторожно смесь взбалтывают в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ
и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 0,5 мл ацетона и хроматографируют.
Молоко. Пробы молока (10 мл) переносят в
склянки, добавляют 30 мл ацетона и взбалтывают в течение 2-х минут. Затем
экстракт фильтруют через вату в фарфоровую чашку, добавляют 70 мл
дистиллированной воды и ставят в морозильную камеру холодильника на 1 час.
После чего экстракт через обезжиренный слой ваты фильтруют в делительную
воронку и экстрагируют с 30 мл хлороформа в течение 2-х минут. Отделяют
хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20-процентного
спиртоводного раствора. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении
препарата в тканях животных.
Зеленые растения (клевер, трава и т.д.).
Пробы весом 5 г измельчают, переносят в
склянки с притертой пробкой, добавляют 10 г безводного сернокислого натрия,
перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформа при комнатной
температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный
хлороформом бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухой
остаток растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора, перемешивая
стеклянной палочкой. Экстракт фильтруют через смоченную спиртоводным раствором
вату в делительную воронку. Дальнейший ход анализа такой же, как и при
определении препарата в тканях животных.
2.4.2. Хроматографирование
Анализируемый экстракт наносят при помощи микропипетки в
одну точку на
расстоянии 1,5 -
2 см от
края пластинки так, чтобы диаметр пятна не
превышал 1
см. Справа и
слева от пробы
на расстоянии 2 см наносят
стандартный раствор,
содержащий 0,5, 1 и 5 мкг препарата. Пластинки с
нанесенными
растворами помещают в камеру для хроматографирования,
в которую
налита смесь
н-гексана
и ацетона в соотношении 20:80. Край пластинки с
нанесенными растворами должен быть погружен в
растворитель не более чем на
0,5 см. Пластинку выдерживают в камере до тех
пор, пока фронт растворителя
не поднимется
на высоту 10 см. После чего ее вынимают, отмечают фронт
растворителя,
подсушивают на воздухе и опрыскивают сначала смесью растворов
бромфенолового
синего и азотнокислого серебра. Затем пластинки опрыскивают
2-процентным
раствором лимонной кислоты. В присутствии сульфидофоса
сразу
же после
опрыскивания на желтом фоне сорбента появляются ярко-синие пятна в
зависимости от
концентрации препарата. Чувствительность метода составляет
0,05 мг/кг,
R сульфидофоса равна 0,5. Точность
метода в зависимости от
f
объекта
составляет 80 - 90 +/- 10%.
2.5. Обработка
результатов
Расчет производят по формуле:
х С
Х = ---,
с в
где:
Х - содержание препарата, мг/кг, мг/л;
х - площадь пятна исследуемой пробы, кв.
мм;
с - площадь пятна стандарта, кв. мм;
С - количество препарата в стандарте,
мкг;
в - навеска пробы, г.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и фосфорорганическими
соединениями.
4. Настоящие Методические указания
разработаны Т.Г. Аббасовым и Г.У. Узаковой
(ВНИИ ветеринарной санитарии).