Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 мая 1985 г. N 3884-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИЛОРА В МЕДЕ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им.
Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном
санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемого пестицида
Дилор
(2,4,5,6,7,8,8-гептахлор-4,7-эндометиленбицикло/4.3.0/нонен-5).
Структурная формула:
Cl
│
/ \\
/\
Cl- / │ \\ / \
││Cl C │ \-Cl
C H Cl
││ 2 │ /
10 7 7
Cl- \ │ // \ /
\ //
\/
М.м. 375,34
│
Cl
Синонимы: БЛ 2487, ГС 9160,
бета-дигидрогептахлор.
Дилор - кристаллическое вещество
кремового цвета со слабым запахом, температура плавления 135 - 137 °С. Плохо
растворим в воде (при 21 °С 0,014 мг/л), но хорошо растворим почти во всех
органических растворителях.
ЛД
для крыс при введении в желудок 2000 - 9000 мг/кг.
50
Разрешен для применения в борьбе с колорадским жуком на картофеле, свекловичным
долгоносиком на сахарной свекле, листовой филлоксерой на виноградной лозе и
другими вредителями растений.
2. Методика
определения дилора в меде
методом тонкослойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении дилора из
водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан,
упаривании экстракта и очистке на колонке с окисью алюминия и определении
хроматографией на пластинках "Силуфол УФ-254".
Количественное определение препарата
проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и
стандарта.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
- Диапазон определения концентраций - 0,5
- 20 мкг пестицида в анализируемой пробе;
- предел обнаружения - 0,5 мкг или 0,05
мг/кг;
- размах варьирования - 88,4 - 97,4%;
- среднее значение определения
стандартных количеств дилора - 94,1%;
- стандартное отклонение - 3,54;
- относительное стандартное отклонение -
0,037;
- доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 9 - 94,1 +/- 2,7.
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен. Другие хлорорганические
пестициды определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Алюминия окись II степени активности,
просеянная через сито 250 меш и задержанная на сите 100 меш, ТУ 6-09-3916-75;
Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79;
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78;
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ
4166-76;
Свинец уксуснокислый, ТУ 6-09-4140-75;
Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81;
Спирт этиловый 96-процентный, ТУ
6-09-1710-77;
Эфир диэтиловый, хч, ГОСТ 6262-79;
Дилор, хч, или 80% с.п.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1 или
аналогичный, ТУ 1-1081-73;
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76;
Весы торсионные ВТ,
ТУ 64-1-990-77;
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82;
Камеры хроматографические, ГОСТ 10565-75;
Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ
25-11-430-70;
Колонки хроматографические стеклянные с
внутренним диаметром 8 - 9 мм - пипетки на 5 мл, ГОСТ 20292-74;
Пластинки для хроматографирования
"Силуфол УФ-254" производства ЧССР;
Посуда химическая по ГОСТ 23932-79Е
(колбы на 100 мл, микропипетки, пипетки, цилиндры мерные, стаканы химические,
пробирки);
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74;
Чашки фарфоровые выпарительные, ГОСТ
9147-73;
Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление стандартного
раствора дилора: 10 мг препарата хч или 12,5 мг 80% смачивающегося порошка
растворяют в 100 мл гексана. Содержание пестицида составляет 100 мкг в 1 мл.
Хранят в холодильнике в герметично закрытой посуде.
2.4.2. Приготовление проявляющего
реактива
0,5% раствор азотнокислого серебра в
этаноле - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 2 - 3 мл дистиллированной воды и
доводят 96% этиловым спиртом до 100 мл. Хранят в герметично закрытой посуде в защищенном
от света месте. Пригоден для анализа не менее месяца
при хранении в указанных выше условиях.
2.4.3. Приготовление хроматографических
колонок
В качестве хроматографических колонок
используют пипетки на 5 мл с внутренним диаметром 8 - 9 мм. Для
этого в узкой градуированной части отрезают часть пипетки (отрезок 5 - 6 см), а
в узкий конец оставшейся большей части пипетки вставляют ватный тампон и через
воронку насыпают последовательно слой натрия сернокислого безводного, окиси
алюминия II степени активности и натрия сернокислого безводного. Высота
слоя окиси алюминия - 2 см, натрия сернокислого безводного - по 1 см.
Подготовленную таким образом колонку фиксируют в штативе. Готовят колонку
обычно перед использованием.
2.4.4. Приготовление хроматографических
пластинок "Силуфол УФ-254".
Пластинку помещают в камеру с водой и
после прохождения воды через всю пластинку ее вынимают и выдерживают в
сушильном шкафу при температуре 65 - 70° в течение 5 - 10 минут. Пластинки
могут быть использованы непосредственно после приготовления или через 1 - 2
суток.
2.4.5. Отбор проб проводят в соответствии
с унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств
пестицидов, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного
врача СССР 21.08.1979, за N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
В колбу отвешивают 10 г меда, помешивая
стеклянной палочкой, растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из водного
раствора меда препарат экстрагируют 30 мл ацетона путем встряхивания пробы в
течение 15 минут. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку. После
разделения слоев нижний (водный раствор меда) сливают в колбу и повторно
экстрагируют 10 - 15 мл ацетона, встряхивая колбу в течение 10 минут. С помощью
делительной воронки отделяют ацетоновый экстракт и объединяют его с первой
порцией ацетона. Затем объединенный ацетоновый экстракт переносят в делительную
воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и 15 мл гексана и встряхивают в
течение 2 минут. После разделения слоев нижний (водно-ацетоновый экстракт)
сливают в чистую колбу, а верхний (гексановый) - в чистый химический стакан.
Водно-ацетоновый экстракт переносят в ту же делительную воронку и дилор
повторно реэкстрагируют 10 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют в
делительной воронке, промывают 1 - 2 раза дистиллированной водой порциями по 50
мл, затем сушат 5 - 10 г безводного сернокислого натрия в течение 15 - 20 минут
и отгоняют в фарфоровой чашке при температуре водяной бани в пределах 40 - 45 °С до объема 2 - 3 мл. Сконцентрированный гексановый
экстракт в объеме 2 - 3 мл вносят в хроматографическую колонку, предварительно
промытую 3 мл смеси гексан - эфир в соотношении 10:1, и дилор элюируют еще 3 мл
этой же смеси. Элюат отгоняют под вытяжкой при комнатной температуре до объема
0,4 - 0,5 мл и переносят в мерную центрифужную пробирку.
2.5.2. Хроматография в тонком слое
Очищенный и упаренный гексановый экстракт
с помощью микрошприца или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку
"Силуфол УФ-254" на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края в одну
точку. Диаметр пятна не должен превышать 5 - 6 мм. Рядом с пробой наносят
известные количества дилора в гексане (стандарты). Затем пластинку развивают в
хроматографической камере с гексаном и при подъеме подвижного растворителя на
высоту 10 см от линии старта ее вынимают из камеры. После испарения гексана
пластинку опрыскивают 0,5% раствором нитрата серебра в этаноле и сразу же
помещают под лампу ПРК-4 на 5 - 10 минут в зависимости от концентрации
препарата. На опрыскивание одной пластинки используют 2 - 3 мл проявляющего
реактива (до появления глянца).
Дилор
проявляется в виде темно-серых
пятен на белом фоне.
Величина
R дилора составляет 0,45 - 0,48.
f
2.6. Обработка
результатов
Количество дилора в меде определяют путем
сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов
препарата с использованием формулы расчета:
А х S
2
Х = ------,
S х P
1
где:
Х - содержание дилора в меде, мг/кг;
А
- содержание препарата
в стандартном растворе,
наносимом на
пластинку, мкг;
S -
площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
Р - масса
исследуемой пробы меда, г.
Для более точного определения количества
дилора в меде проводят два параллельных исследования проб. С этой целью рядом с
опытной пробой первой повторности на пластинке наносят 2 и 8 мкг дилора в
гексане. При определении содержания дилора по второй повторности пробы рядом с
ней на пластинку наносят количества препарата в гексане, наиболее близкие к
выявленному в пробе меда первой повторности и исходя
из полученных результатов проводят расчет согласно приведенной выше формуле.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются обычные требования
безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.
4. Разработчики
Временные методические указания
подготовлены Ярошенко В.И. (Украинский ордена Трудового Красного Знамени
научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии, г. Харьков).
Методические указания апробированы в
Прибалтийском филиале ВИЗР (Горкун Г.А. и Ипатова Т.Н.).