Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 мая 1985 г. N 3886-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ
РАСТЕНИЕВОДСТВА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение к N 1350-75 от 22.09.75)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им.
Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном
санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Характеристика
анализируемого пестицида
Бис(0,0-Диметилфосфорил-0-фенил-4)сульфид.
Структурная формула:
S S
││ ---
--- ││
(CH O) P-O-// \\-S-//
\\-O-P-(OCH ) .
3
2 \ ___ / \ ___ / 3 2
--- ---
Эмпирическая формула: C H O P
S .
16 10 6 2 3
Молекулярная масса - 466.
Синонимы: абат, абат 500 Е, абат 4 Е, OMS-786.
Химически чистое вещество - белые
кристаллы. Технический препарат - коричневая жидкость, содержащая 90 - 95%
действующего вещества. Препарат нерастворим в воде, хорошо растворяется в
органических растворителях (ацетоне, гексане, хлороформе, эфире, ацетонитриле).
Устойчив к воздействиям слабых щелочей (при рН 8 и температуре 20 °С не гидролизуется в течение нескольких недель).
Выпускается в форме 30% к.э. Зарубежный аналог дифоса - абат выпускается в виде
50% к.э. и 25% о.п.
Относится
к малотоксичным соединениям. ЛД при введении препарата в
50
желудок белых
крыс составляет 1360 -
2300 мг/кг, для белых мышей - 460
мг/кг. Проникает
через кожу. Для кроликов при накожном нанесении ЛД - 970
50
- 1930 мг/кг. Раздражающее действие выражено слабо.
Коэффициент кумуляции
- 5,7. Является
инсектицидом контактно-кишечного действия.
Эффективен в
борьбе с
личинками комаров, мух, вредными насекомыми домашних животных, при
защите
сельскохозяйственных культур от клопов, трипсов и других насекомых.
МДУ в сахарной свекле, овощах, цитрусовых
и хлопковом масле - 0,3 мг/кг, в мясе, яйце - 1 мг/кг, в молоке - не
допускается. ПДК в кормах для сельскохозяйственных животных на откорме - 0,25
мг/кг, лактирующих животных - не допускается.
2. Методика определения
дифоса в продуктах
растениеводства методом трехслойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции препарата из
анализируемого объекта ацетоном, осаждении коэкстрактивных веществ из
водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на холоде, переэкстрагировании
дифоса в гексан, дополнительной очистке экстракта на колонке с силикагелем АСК,
элюировании пестицида смесью бензола с гексаном, хроматографировании на
пластинках "Силуфол" и проявлении азотнокислым серебром с
бромфеноловым синим.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
- Диапазон определяемых концентраций
пестицида в анализируемой пробе - 0,2 - 25 мкг.
- Предел обнаружения - 0,2 мкг в пробе или 0,02 мг/кг.
- Размах варьирования - 70 - 90%.
- Среднее значение определения
стандартных количеств - 79,8%.
- Стандартное отклонение - 11,6.
- Относительное стандартное отклонение -
0,27.
- Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и н = 10 - 79,8 +/- 1,49.
2.2. Реактивы
Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-81.
Бромфеноловый синий,
ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Кислота уксусная ледяная, х.ч., ГОСТ
18290-72.
Кислота лимонная, ч.д.а., ГОСТ 3652-74.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а.,
ГОСТ 4166-76.
Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77.
Свинец уксуснокислый или свинец
уксуснокислый основной, ч.д.а., ТУ 6-09-4140-75.
Серебро азотнокислое, ч., ГОСТ 1277-75.
Силикагель АСК, ГОСТ 3956-76.
Эфир диэтиловый, ГОСТ 6262-79.
Дифос, стандартный раствор в ацетоне,
содержащий 100 мкг/мл препарата.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1 или
аналогичный, ТУ 64-1-1081-73.
Весы технические.
Весы торсионные - тип ВТ,
ТУ 64-1-990-77.
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ
25-11-430-70.
Колонки стеклянные, внутренний диаметр 7
- 9 мм.
Опрыскиватели стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Пластинки "Силуфол"
производства ЧССР.
Посуда химическая по ГОСТ 23932-79 (колбы
конические с притертыми пробками на 100 мл, воронки делительные на 200 мл,
воронки химические диаметром 5 см, пробирки мерные на 10 мл, цилиндры на 10, 50
и 100 мл, микропипетки, стаканы химические).
Центрифуга лабораторная стационарная
ЦЛС-3 или аналогичная (объем стаканов 80 - 100 мл).
Шкаф вытяжной.
Чашки фарфоровые для выпаривания диам. 5
- 7 см, ГОСТ 9147-73.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление 20% водного раствора
уксуснокислого свинца: 20 г уксуснокислого свинца растворяют в 80 мл
дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца 20 г
его растворяют при подогревании в 80 мл 5% уксусной кислоты и рН раствора
доводят едким натрием до 5,4 - 5,6. Хранят в закрытой посуде.
2.4.2. Приготовление 10% водного раствора
уксусной кислоты: в колбу к 10 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 90 мл
дистиллированной воды.
2.4.3. Приготовление проявляющих
реактивов
Реактив N 1 - 25 мг бромфенолового синего
растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50 мл
0,25% раствором азотнокислого серебра (0,125 г
азотнокислого серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и
добавляют 35 мл ацетона). Хранят в закрытой посуде из темного стекла при
температуре +4 - 6 °С в течение месяца.
Реактив N 2 - 2% раствор лимонной
кислоты: 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят
в закрытой посуде при температуре +4 - 6 °С в течение
5 - 6 дней.
2.4.4. Подготовка колонки для очистки
экстрактов анализируемых проб: в нижний конец стеклянной колонки помещают
ватный тампон, затем насыпают последовательно натрий сернокислый безводный
слоем 1 см, силикагель АСК 5 - 6 см и опять натрий сернокислый безводный 1 см.
2.4.5. Отбор проб производят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб
сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов.
Навеску измельченной растительной массы,
корнеклубнеплодов по 10 г помещают в колбу с притертой пробкой, заливают 30 мл
ацетона, тщательно перемешивают и экстрагируют на аппарате для встряхивания в
течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют на аппарате для
встряхивания в течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют ацетоном
дважды порциями по 30 мл, встряхивая по 30 минут.
Ацетоновый экстракт отфильтровывают в
чистую колбу через воронку с ватным фильтром. Пробы промывают 10 мл ацетона и
пропускают через тот же фильтр. К объединенному экстракту добавляют 20 мл
дистиллированной воды, 1 мл уксуснокислого свинца (при исследовании комбикорма
40 мл воды) и помещают в испаритель бытового холодильника на 1 час (экстракты
комбикорма лучше оставлять в испарителе холодильника на ночь). Охлажденные
пробы центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 3 минут. Надосадочную
жидкость сливают в делительную воронку (при анализе комбикорма после
центрифугирования надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через воронку с
фильтром). В делительную воронку добавляют 10 мл 10% раствора уксусной кислоты
и 60 мл дистиллированной воды (при анализе комбикорма 120 мл дистиллированной
воды). Затем дифос реэкстрагируют из этой смеси гексаном трижды, используя по
15 мл экстрагента. При плохом разделении слоев в связи с образованием эмульсии
добавляют 5 мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Объединенный
гексановый экстракт сушат над безводным сернокислым натрием. Концентрирование
гексановых экстрактов проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до 1
- 2 мл и пропускают для доочистки через колонку с силикагелем АСК.
Выпаривательные чашки ополаскивают 2 - 3 раза 1 - 2 мл гексана и сливают в ту
же колонку. Дифос элюируют 25 - 30 мл смеси бензол - гексан в соотношении 3:1.
Затем бензол-гексановые экстракты концентрируют в сушильном шкафу при комнатной
температуре до объема 0,1 - 0,2 мл.
2.5.2. Хроматографирование
Конечный экстракт наносят на пластинку
"Силуфол" на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. Слева и справа
наносят стандартные растворы с известным количеством дифоса. Диаметр
нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.
Пластинку помещают в камеру со смесью
диэтилового эфира и н-гексана в соотношении 1:2. После того как фронт
растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры и
оставляют на воздухе до удаления растворителя.
2.5.3. Проявление
После
испарения подвижных растворителей пластинку
опрыскивают
бромфеноловым синим
с азотнокислым серебром
и оставляют на воздухе для
подсыхания. Затем
пластинку обрабатывают 2%
водным раствором лимонной
кислоты. Дифос
проявляется в виде
синих пятен на лимонно-желтом
фоне.
Величина R составляет 0,32.
f
2.6. Обработка
результатов
Количество дифоса в анализируемом объекте
определяют путем сравнения площади и интенсивности окраски пятна пробы и
стандартных растворов препарата с использованием формулы:
А x 100
Х = -------,
М x К
где:
Х - количество препарата в исследуемом
материале, мг/кг, мг/л;
А - количество препарата, обнаруженное на
пластинке, мкг;
М - масса исследуемой пробы, г или мл;
100
--- - поправка с
учетом потерь пестицида
в процессе анализа, где
К
К - процент определения препарата = 80%.
3. Требование
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые при работе с химическими реактивами и фосфорорганическими
пестицидами.
4. Разработчики
Старшие научные сотрудники - Малинин
О.А., доктор ветеринарных наук, Шуляк В.Д., кандидат биологических наук,
Ярошенко В.И., кандидат ветеринарных наук, Зайцева Л.Д., кандидат ветеринарных
наук, старший ветврач Ярошенко С.С.
Лаборатория фармакологии с токсикологией
УНИИЭВ, г. Харьков.