Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 мая 1985 г. N 3888-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА И БАЗУДИНА В ЧАЕ С ПОМОЩЬЮ
ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препаратов
1.1.1. Актеллик.
1.1.2.
0,0-диметил-0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-тиофосфат.
1.1.3. Структурная формула:
CH
CH O
S -- / 3
3 \ ||
// \\
P -O-\ __ /N Мол. масса 305,35.
/
N -- \
CH O N(C H )
3 2 5 2
1.1.4. Пиримифос-метил,
ПП-511.
1.1.5.
Химически чистое вещество актеллика
представляет собой жидкость
светло-желтого цвета.
Хорошо растворяется в
большинстве органических
растворителей, слабо растворим в
воде - 5 мг/л при температуре 30 °С.
-4
Удельный вес
- 1,157 при 30 °С, давление
пара - 1 х 10 . Разрушается в
сильнокислых и
щелочных средах.
Препарат малотоксичен
для теплокровных животных - при оральном введении
ЛД для мышей составляет 1180 мг/кг. Препарат опасен для птиц (ЛД
30 -
50
50
60 мг/кг) и рыб.
1.2.1. Базудин.
1.2.2.
0,0-диэтил-0-(2-изопропил-4-метилпиримидил-6) тиофосфат.
1.2.3. Структурная формула:
CH
| 3
C H O S
// \ CH
2 5 \││ //
\N / 3
P -O-│ ││-CH Мол. масса 304,36.
/
│ ││ \
C H O
\\ / CH
2 5
\\ / 3
N
1.2.4. Алоксон, алфатокс, диазинон, дицид, экзодин.
1.2.5.
Действующее вещество базудина - бесцветная
маслянистая жидкость
с температурой
кипения 89 °С
при 0,1 мм рт. ст. Давление паров при 20 °С
-5
составляет 8,4
х 10 мм
рт. ст. Летучесть - 1,39 мг/куб. м при 20 °С.
Инсектицид
нестабилен в кислой и щелочной средах. Растворимость в
воде - 40
мг/л, хорошо
растворим в большинстве органических растворителей.
Препарат токсичен для теплокровных
животных - при
оральном введении
ЛД для мышей составляет 50 - 135 мг/кг, для
крыс - 100 - 250 мг/кг.
50
2. Методика
определения фосфорорганических
пестицидов в чае
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции
фосфорорганических пестицидов из чая водным ацетоном, последующем
перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан
и анализе содержания фосфорорганических пестицидов при помощи газожидкостной
хроматографии или хроматографии в тонком слое. В последнем случае необходима
предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
ГЖХ ТСХ
Минимально детектируемое количество:
актеллика 0,5 - 1,0 нг 1 - 3 мкг
базудина 0,1 нг 1 - 3
мкг
Нижний предел обнаружения в чае, мг/кг:
актеллика
0,1
базудина 0,1
Р - размах
варьирования, %:
актеллика
85 - 95
базудина
85 - 95
_
е - среднее значение определения, %:
актеллика 89,2
базудина
87,6
S - стандартное отклонение, %:
актеллика
3,55
базудина 4,86
Доверительный интервал среднего при
р = 0,95 и n = 10, %, для:
актеллика 89,2
+/- 8,02
базудина
87,6 +/- 10,98
2.1.3. Избирательность метода
Карбофос, протиофос и хостаквик
определению не мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-79.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, хч,
ГОСТ 4233-77.
Алюминия оксид для хроматографии, ч, ТУ 6-09-3916-75, I активности, нейтральный.
Пластинки "Силуфол-254", ЧССР.
Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% ХЕ-60 (0,160 - 0,200 мм).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Водород электролитический.
Сжатый воздух.
Проявляющие реагенты:
1. 0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина (ч, ТУ 6-09-05-63-74) в гексане.
2. 2-процентный раствор 4-(n-нитробензил)пиридина (ч, ТУ
6-09-15-93-74) в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина
(ч, ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.
Стандартные растворы актеллика
и базудина в гексане - 1
мкг/куб. см для ГЖХ, 100 мкг/куб. см для ТСХ.
2.3. Приборы и
посуда
Хроматограф "Цвет-106" или
аналогичный прибор с термоионным детектором (ДТИ).
Аппарат для встряхивания колб, ТУ
64-1-1081-73.
Испаритель ротационный вакуумный, ТУ
6-08-917-74, или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом.
Хроматоскоп.
Колбы конические со шлифами и пробками на
250 куб. см или 300 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные со шлифами на 100 куб.
см, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные на 500 куб. см, ГОСТ
8613-75.
Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ
1770-74.
Воронки, ГОСТ 8613-81.
Колонки для адсорбционной хроматографии
(300 х 15 мм).
Камера хроматографическая,
ГОСТ 10565-75.
Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-74.
Пипетки на 0,1 и 1,0 куб. см, ГОСТ
1770-74.
Цилиндры мерные на 50, 100 куб. см, ГОСТ
1770-74.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Термостат.
Колонки стеклянные для газожидкостной
хроматографии (1000 х 3 мм).
2.4. Отбор проб и
подготовка к анализу
2.4.1. Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с
Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств
пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах
окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного
санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.
Средняя проба чая для анализа - 10 г.
2.4.2. Приготовление хроматографической
колонки
Стеклянные хроматографические колонки (1000 х 3 мм) заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,160 - 0,200), пропитанным 5% ХЕ-60
по стандартной методике (см. Столяров, Савиков, Витенберг. Руководство к практическим работам по газовой
хроматографии, 1978 г.).
2.4.3. Построение градуировочного
графика
Для количественного
определения актеллика и базудина
во введенной аликвоте используют метод абсолютной
калибровки, который заключается в построении графической зависимости высоты
(площади) хроматографического пика от содержания
вещества в стандартной пробе.
По оси ординат откладывают значения высот
(площадей) хроматографических пиков в мм (кв. мм или мкВ х сек.), а по оси абсцисс - абсолютное
количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.
Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб
в тех же условиях, особенно при работе с ДТИ.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
чая
Из проб чая актеллик,
базудин извлекают 75 - 100 куб. см смеси ацетона с
водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 - 60 мин. После этого
растительные экстракты помещают в холодильную камеру для вымораживания восков.
Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее проводят переэкстракцию актеллика, базудина из объединенного фильтрата в гексан,
прибавляя последний порциями по 25 куб. см, каждый раз встряхивая в делительной
воронке в течение 3 - 5 минут. Экстракцию повторяют 3 раза. Гексановые
фракции высушивают фильтрованием через слой безводного сернокислого натрия (20
- 25 г), объединяют и концентрируют до небольшого объема (1 - 0,5 куб. см) под
вакуумом при температуре 40 °С.
Экстракты из проб чая нуждаются в
дополнительной очистке, которая проводится на колонке (300 х 15 мм),
заполненной последовательно сернокислым натрием (3 - 4 г), окисью алюминия (4 -
5 г) и снова сернокислым натрием (1,5 - 2 г). Колонку предварительно промывают
бензолом (30 - 40 куб. см). Актеллик, базудин элюируют бензолом (20
куб. см), растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество
инсектицида в пробе определяют хроматографическими
методами.
При газожидкостной хроматографии очистку
экстрактов чая можно не проводить.
2.5.2. Условия хроматографирования
в тонком слое
Проба с помощью капилляра или
микропипетки наносится на хроматографическую
пластинку "Силуфол-UV
254". Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с
содержанием 3,5 и 10 мкг действующего вещества актеллика
или базудина. Хроматографируют
в системе гексан - ацетон (4:1), проветривают. Для
обнаружения определяемых соединений пластины просматривают в УФ-свете
хроматоскопа и обрабатывают либо 0,25-ным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина
в гексане, затем нагревают в течение 30 секунд в
термостате при температуре 100 - 120 °С, либо
2-процентным раствором 4-(р-нитробензил) пиридина с
последующим нагреванием при 100 - 120 °С и обработкой 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина.
Значение
R актеллика
- 0,50 +/- 0,01, R базудина
в указанной системе
f f
растворителей -
0,38 +/- 0,01.
Содержание пестицида в исследуемом объекте
(чае) вычисляют по формуле:
А
Х = -,
Р
где:
А - количество препарата, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Р - навеска исследуемой пробы, мг;
Х - содержание препарата в пробе, мг/кг.
2.5.3. Условия газожидкостного хроматографирования
С помощью
микрошприца
аликвотную часть исследуемого
раствора (1 - 2
куб. мм)
вводят в испаритель хроматографа с термоионным детектором (ДТИ),
фазы и носители
описаны в разделе 2.4.2. Скорость газоносителя -
азота - 25
куб. см/мин., водорода - 15 - 18 куб. см/мин., воздуха -
170 куб. см/мин.
Температура термостата
колонок - 190 °С, детектора и испарителя - 220
°С.
-10
Рабочая шкала
электрометра - 2,5 х 10
А. Скорость движения ленты
самописца - 1
см/мин.
Время удерживания актеллика
в данных условиях - 2 мин. 51 сек., базудина - 54
сек.
Количественное определение препарата в
анализируемой пробе проводят с помощью градуировочного
графика (см. 2.4.3).
Содержание препарата в анализируемой
пробе вычисляют по формуле:
С х К
Х = -----,
У х Р
где:
Х - содержание препарата в анализируемой
пробе, мг/кг;
С - общий объем раствора, куб. см;
У - объем аликвоты,
введенный в хроматограф, куб. мм;
К - количество препарата в аликвоте,
определенное по градуировочному графику, нг;
Р - навеска анализируемого вещества, г.
Если при введении в хроматограф
получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание",
готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное
количество гексана или разбавляя отобранную
аликвоту до определенного объема.
2.6. Обработка результатов анализов
приведена в 2.5.2 и 2.5.3.
3. Требования
безопасности
Общепринятые требования безопасности при
работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.
4. Разработчики
Петрова Т.М., Красникова Н.Г., Мельникова
З.В. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.