Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

22 мая 1985 г. N 3895-85

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРОФОСА

В КАРТОФЕЛЕ ХРОМАТОЭНЗИМНЫМ МЕТОДОМ

 

(Дополнение к N 3185-85 от 03.01.85)

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

Хлорофос (трихлорфон, диптерекс, Дилокс) - фосфорорганический инсектицид, является эффективным средством борьбы со многими вредными членистоногими, в том числе с колорадским жуком на картофеле.

Действующее начало препарата - 0,0-диметил-(1-окси-2,2,2-трихлорэтил)фосфонат.

 

    CH O O

      3 \||

         P-CH-CCl                                        C H  Cl O P

        /  |     3                                        4 18  3 4

    CH O   OH

      3                                                  Мол. масса 257,45.

 

    В  чистом  виде это белое кристаллическое вещество, плавящееся при 82 -

83  °С,  температура  кипения  -  100  °С  при 0,1 мм рт. ст. Растворимость

препарата на 100 г: в воде - 15,4 (25 °С), бензоле - 15,2, хлороформе - 75.

Хорошо  растворяется  в  спирте,  плохо - в н-гексане, пентане, петролейном

эфире.  Хлорофос обладает умеренной токсичностью для теплокровных животных.

ЛД    для  мышей  и  крыс  225 - 1200 мг/кг. МДУ в растительных продуктах 1

  50

мг/кг.

 

2. Методика определения хлорофоса в картофеле

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении остаточных количеств хлорофоса из картофеля ацетоном с последующим определением ТСХ.

Хлорофос на хроматограммах проявляют биохимической реакцией. В качестве фермента используют эстеразу микробного происхождения. В качестве субстрата эстеразы - хромогенный субстрат - индофенилацетат.

Высокая чувствительность биохимической реакции позволяет исключить стадию очистки экстракта и его концентрирования.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

    Предел   обнаружения  в  хроматографируемой  пробе  -  0,1  нг.  Предел

обнаружения - 0,1 мг/кг. Процент определения - 70 - 90%.  Среднее  значение

_

с 80%. Стандартное отклонение +/- 7,5%. Доверительный интервал среднего при

Р = 0,95 и n = 5,80 +/- 7,5%.

 

2.2. Реактивы и растворы

 

Растворители: ацетон, гексан.

Реактивы: натрий гидроокись - ОС 18-3, ГОСТ 6-01-302-74;

борная кислота - ОС 12-3, ТУ 6-09-597-77;

Индофенилацетат, хч, ТУ 6-09-469-77.

Эстераза микробная - технический регламент ВНИИ Биотехника, 1982 г., Вышеволоцкий завод ферментных препаратов.

2.2.1. Растворы: готовят борно-щелочной буфер 0,7 М с рН 9,5 смешением 0,7 М натрия гидроокиси и 0,7 М борной кислоты.

2.2.2. Рабочий раствор фермента готовят при концентрации 0,5 мг/мл в 0,7 М борно-щелочном буфере, рН 9,5 (при исходной активности фермента - 0,5 + 1,0 Е/мг по индофенилацетату).

2.2.3. Индофенилацетат растворяют в ацетоне до концентрации 2 мг/мл.

                                                           -3

    2.2.4.  Стандартный  раствор хлорофоса в ацетоне 1 х 10   мг/мл и серия

                                                                         -5

стандартных  растворов  с  содержанием  0,5;  1; 2; 3; 5; 10; 20; 50 х 10

мг/мл  (что  при объеме пробы 20 мкл соответствует 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 1,0;

2,0; 4,0; 10 нг на хроматографической пластинке).

 

2.3. Приборы и посуда

 

Колбы плоскодонные на 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Мерные колбы на 100 и 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 0,1; 1 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Мерные цилиндры на 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Прибор для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Пористый фильтр N 3.

Микрошприцы на 50 мкл.

Хроматографические камеры, ГОСТ 10565-75.

Готовые пластинки для ТСХ - "Силуфол".

 

2.4. Ход анализа

 

2.4.1. Отбор проб

Пробы отбирают в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79 от 21.08.79. Для анализа из каждого вымытого клубня вырезают ножом кубики размером 0,5 х 0,5 см и отвешивают пробу 10 г.

    2.4.2. Проведение определения

    Навеску картофеля (10 г) помещают в плоскодонную колбу, добавляют 50 мл

ацетона  и экстрагируют хлорофос в течение 30 мин. при помощи механического

встряхивателя.  Экстракт  фильтруют  в другую плоскодонную колбу. Повторяют

экстракцию   еще   два   раза  50  мл  ацетона.  Экстракты  объединяют.  Из

объединенного    экстракта   наносят   пробу   20   мкл   микрошприцем   на

хроматографическую   пластинку.  Параллельно  на  пластинку  наносят  серию

                                                                         -5

стандартных  растворов  с  концентрацией 0,5, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 50 х 10

мг/мл (тоже по 20 мкл).

Хроматограмму развивают в системе гексан - ацетон (1:1). После развития хроматограмму сушат, обрабатывают раствором фермента и помещают во влажную камеру на 40 - 60 мин., а затем обрабатывают раствором индофенилацетата.

    Хлорофос  проявляется  в  виде  желтых пятен на сине-зеленом фоне (цвет

фона  впоследствии переходит в розово-синий). Причем пятна, соответствующие

количествам  хлорофоса 0,1 - 1,0 нг, стабильны в течение 10 минут, 1,0 нг -

в течение 10 часов. R  хлорофоса 0,56 +/- 0,02. Нижний предел определения -

                     f

0,1 нг в хроматографируемой пробе.

 

2.5. Обработка результатов анализа

 

Количественное определение проводят путем сравнения размера и интенсивности пятен в рабочей пробе с пятнами стандартных растворов. Содержание хлорофоса в картофеле вычисляют по формуле:

 

                                 V х А

                             Х = ------, мг/кг,

                                 V  х Р

                                  а

 

    где:

    А  -  количество хлорофоса, найденное в рабочей пробе на хроматограмме,

мкг;

    V  - объем нанесенной на пластинку аликвоты в мл (0,02 мл = 20 мкл);

     а

    V - конечный объем рабочего раствора, мл (150 мл);

    Р - взятая навеска картофеля в г (10 г).

    ДДВФ определению не мешает, т.к. в данной системе имеет R  = 0,80.

                                                             f

    Примечание:  При  анализе  старого картофеля на линии старта (R  = 0,0)

                                                                   f

могут  проявляться  пятна  вследствие  образования  при  хранении картофеля

токсинов, обладающих антиэстеразным действием.

 

3. Требования безопасности

 

Меры предосторожности при работе с хлорофосом - как со среднетоксичными пестицидами. Необходимо также соблюдать требования техники безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями.

 

4. Разработчики

 

Методические указания разработаны в институте Химаналит, НПО "Химавтоматика", Ленинград, Вашкевич О.В.

Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (т. Новикова К.Ф.).