Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 ноября 1985 г. N 4028-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРИМИЦИДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ И В ПОЧВЕ
С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
1.1. Примицид, пиримифос-этил, ПП 211
Контактный инсектицид. Предложен
для борьбы с обитающими в почве вредителями, в том числе с проволочниками на
картофеле и кукурузе; мухами на луке, моркови и капусте; долгоносиками на
сахарной свекле.
1.2. Активное вещество: 0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-0,0-диэтилтиофосфат.
1.3. Структурная формула:
CH
S /
3
││ ---
(C H O) P -O-// \\N C H N PO
S
2 5
2 \ ___ / 13 24
3 3
N ---
\ М.м. 333,4.
N(C H
)
2 5 2
1.4. Технический продукт - бесцветная с
желтым оттенком маслянистая жидкость. Растворимость в воде при 30 °С 1 мг/куб. м, смешивается со многими органическими
растворителями. Устойчив в нейтральной среде,
сравнительно быстро разрушается при нагревании с растворами щелочей и
минеральных кислот. Выпускается в виде 30% с.п.,
50-процентного э.к., 5 и 10-процентных гранул и
20-процентного порошка для обработки семян.
ЛД
для крыс при оральном введении 140 - 200 мг/кг, при аппликации на
50
кожу 1000
- 2000 мг/кг. Токсичен для
пчел и большинства других полезных
насекомых.
2. Методика
определения примицида в растительном
материале и в почве хроматографией в тонком слое
и газожидкостной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод
основан на извлечении
примицида
из растительных проб
50-процентным водным
ацетоном. Из почвы
экстрагируют инсектицид смесью
ацетона с 0,05 н
раствором CaCl
в соотношении 1:1. Очистка
экстрактов -
2
способом
перераспределения между двумя
несмешивающимися растворителями.
Количественное
определение проводят методами газожидкостной хроматографии и
хроматографией в
тонком слое.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
ГЖХ ТСХ
Минимально
детектируемое количество 1
мг 0,5 мкг
Нижний предел
определения 0,001
мг/кг 0,1 мг/кг
Р - размах варьирования, %
в растениях 89 - 95 85 - 90
в почве 94 -
98 90 - 95
С - среднее значение определения, %
в растениях 32,2 87,5
в почве 95,8 92,5
S - стандартное
отклонение, %
в растениях 4,56 3
в почве 2,16 3
Доверительный
интервал среднего при
Р = 0,95 и n = 5, %
для растений 92,2 -/+
12,6 87,5 +/- 8,3
для почвы 95,8 +/-
5,9 92,5 +/- 8,3
2.1.3. Избирательность метода
Другие фосфорорганические инсектициды
определению не мешают.
2.2. Реактивы,
растворы и материалы
Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Ацетон, х.ч.,
ГОСТ 2603-79.
Кальций хлористый, ч., ГОСТ 4161-77.
Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а, ГОСТ 4166-79.
Уголь активированный марки Кад-молотый или ОУ-А.
Стекловата.
Хроматографические пластинки "Силуфол-UV-254", ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% SE-30 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% XE-60 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% OV-17 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 2% ПЭГС (полиэтиленгликольсукцинат)
(0,125 - 0,160 мм), ЧССР.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Водород электролитический.
Сжатый воздух.
Проявляющие реагенты:
1. 0,5% раствор
2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (ч., ТУ
6-09-05-63-74), после опрыскивания пластинки нагревают при 110 °С в течение 5 мин.
2. 2% раствор 4-(р-нитробензил)пиридина
(ч., ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, после нагревания хроматограммы
при 110 °С в течение 5 мин. и вновь опрыскивают 10%
раствором тетраэтиленпентамина (ч., ТУ
6-09-05-804-78) в ацетоне.
3. 0,05% раствор бромфенолового
синего (ч.д.а., ТУ 6-09-3719-74) в 0,5% раствора
азотнокислого серебра (х.ч., ГОСТ 1277-75),
приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы
и прогревания ее в термостате при 35 - 40 °С вновь
опрыскивают 5% раствором уксусной кислоты (х.ч., ГОСТ
18290-72) или лимонной кислоты (х.ч., ГОСТ 3652-69).
Основной стандартный раствор примицида в ацетоне или в гексане
- 100 мкг/куб. см.
Рабочие стандартные растворы готовят
разбавлением основного раствора - 10 мкг/куб. см, 1 мкг/куб. см, 0,1 мкг/куб.
см.
2.3. Приборы и
аппаратура, посуда
Газовый хроматограф "Цвет-106".
Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм.
Ротационный вакуумный испаритель, ТУ
25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания колб, ТУ
64-1-1081-73.
Холодильник бытовой.
Термостат.
Хроматоскоп (хемоскоп).
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.
Колбы конические со шлифами и пробирками
на 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные для отгонки
растворителей, ГОСТ 17004-74.
Делительные воронки на 250 куб. см, ГОСТ
8613-75.
Воронки, ГОСТ 8613-75.
Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ
1770-74.
Микропипетки 0,1 - 0,2 куб. см, ГОСТ
20292-74.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.
Пробирки с притертыми пробками на 10 куб.
см, ГОСТ 1770-74.
2.4. Подготовка к
определению
Растительную пробу измельчают на кусочки
0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву естественной влажности или
воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.
Отбор проб растений и почвы проводят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб с/х продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом
СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
Анализируемые навески помещают в конические
колбы емкостью 250 куб. см.
Растительные пробы
экстрагируют трижды, заливая 50 куб. см смеси ацетон -
вода (1:1)
и встряхивая в течение 30 мин. Экстракты отфильтровывают через
бумажный фильтр.
Объединенные экстракты помещают
на 1 час в холодильник,
после охлаждения фильтруют через стекловату. Далее
экстракты в делительных
воронках
экстрагируют трижды по 20 мл гексаном. Гексановый слой сливают
в
конические колбы
с безводным сернокислым натрием (30 - 50
г) с добавлением
незначительного количества
активированного угля (20 - 50 мг)
для очистки
экстракта. Интенсивно
помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через
бумажный фильтр
в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1
куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при
температуре не более 40
°С. При
необходимости экстракты
подвергают дополнительной очистке. После
концентрирования
под вакуумом до 1 куб. см остаток растворителя испаряют на
воздухе. К сухому остатку приливают 30 куб. см смеси ацетона
с 0,05 н CaCl
2
(соотношение компонентов
1:1), пробу переносят в делительную воронку,
фильтруя через
бумажный фильтр, колбу споласкивают еще 20-ю куб. см смеси
ацетона с
хлористым кальцием. В воронку
добавляют 30 куб. см гексана для
извлечения токсиканта. Гексановую фракцию
отделяют, водосолеацетоновую
дважды промывают
20-ю куб. см гексана.
Объединенный гексановый экстракт
фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и
концентрируют до 0,5
- 1,0 куб. см.
Почва.
10 г пробы
экстрагируют трижды, заливая 50-ю куб. см смеси
ацетон - 0,05
н водный раствор CaCl (1:1) и встряхивая в течение 30 мин.
2
Экстракты отфильтровывают через бумажный
фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды 20-ю куб. см гексана. Гексановый слой сливают
в конические колбы на 100 куб. см с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с
добавлением незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для
очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают
через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1
куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С.
2.5.2. Хроматография в тонком слое
Экстракт после определения ГЖХ доупаривают до 0,2 куб. см и наносят при помощи капиллярной
пипетки на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической
пластинки "Силуфол-UV-254". Если в пробе содержится много
инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы и наносить экстракт в 3 - 5
точек диаметром не более 0,5 см. Стенки колб тщательно смывают несколькими
каплями гексана и также наносят в центр пятна. Справа
и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 5, 10, 20 мкг
действующего вещества препарата в зависимости от количества препарата в пробе. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования со смесью растворителей гексан:ацетон в соотношении 4:1.
Край пластинки должен быть погружен в смесь растворителей на 0,5 см. Когда
фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают, подсушивают
на воздухе и обрабатывают одним из проявляющих реагентов (2.3). Необходимо
отметить, что наиболее чувствительным проявителем является
2,6-дибром-N-хлорхинонимин, а также 4-(р-нитробензил)пиридин.
Пластинки "Силуфол-UV-254"
можно смотреть под хроматоскопом без предварительной обработки проявителем.
R примицида в системе гексан -
ацетон (4:1) составляет 0,6 +/- 0,05.
f
2.5.3. Определение методом газожидкостной
хроматографии
После отгонки растворителя к сухому
остатку добавляют 1 - 2 куб. см гексана, колбу
закрывают пробкой и тщательно обмывают ее внутреннюю поверхность. Аликвотную
часть пробы (1 - 5 мкл) вводят в испаритель
хроматографа.
Условия хроматографирования
приведены в таблице.
Таблица
УСЛОВИЯ ГАЗОЖИДКОСТНОГО ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ
ПРИМИЦИДА <*>
--------------------------------
<*> Хроматограф
"Цвет-106" с ТИД, скорость движения ленты самописца 0,2 см/мин.
┌─────────────────────────┬───────────┬───────────┬───────────┬───────────┐
│Насадка
колонки │5% SЕ-30 на│5%
ХЕ-60 на│5% OV-17 на│2% ПЭГС на │
│ │хроматоне │хроматоне │хроматоне │хроматоне │
│ │N-супер │N-супер │N-супер │N-супер │
│
│(0,125 - │(0,125
- │(0,125 - │(0,125 - │
│
│0,160 мм) │0,160
мм) │0,160 мм) │0,160 мм) │
│ │ │ │ │ │
│Длина
колонки и внутрен- │100 х 3,0 │100 х 3,0 │100 х 3,0 │100 х 3,0 │
│ний диаметр, см х мм │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│ │ -10
│ -10 │
-10│ -10│
│Рабочая
шкала │2 х 10 │2 х 10 │0,4 х 10 │0,4 х 10 │
│электрометра,
А │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Скорость
потока азота, │27 │27 │27 │27 │
│мл/мин. │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Скорость
потока водорода,│16 │16 │16 │16 │
│мл/мин. │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Скорость
потока воздуха, │312 │312 │312 │312 │
│мл/мин. │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Температура
колонки, °С │205 │205 │230 │210 │
│ │ │ │ │ │
│Температура
испарителя, │230 │230 │230 │230 │
│°С │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │
│Время
удерживания │4 мин. │3 мин. │3 мин. │2 мин. │
│примицида
│26 сек. │2
сек. │15 сек. │22 сек. │
└─────────────────────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────┘
2.6. Обработка
результатов анализа
Содержание примицида
в исследуемом объекте в случае тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:
А
Х = -,
Р
где:
Х - содержание препарата в пробе, мг/кг;
А - количество препарата, обнаруженное в
пробе при сравнении со стандартом, мкг;
Р - навеска исследуемой пробы, г.
Содержание примицида
в пробе в случае газожидкостной хроматографии определяют методом стандартов и
рассчитывают по формуле:
S х Y х С х Y
2 1
1 3
Х = -----------------,
S х Y х Р
1 2
где:
Х - количество препарата в пробе, мг/кг;
С -
количество препарата в стандартном растворе, мкг/куб. см;
1
S -
площадь пика стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пика анализируемого раствора, кв. мм;
2
Y -
объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;
1
Y -
объем анализируемого раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;
2
Y -
объем экстракта анализируемой пробы, куб. см;
3
Р - навеска пробы,
г.
3. Техника
безопасности
Соблюдаются обычные требования по технике
безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами
и щелочами.
4. Разработчики
Петрова Т.М., Хамнаева
Е.И. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г.
Ленинград.
5. Методические указания апробированы во
ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.).