Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 ноября 1985 г. N 4031-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕГУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ ЭБФ-5
В ВОДЕ,
РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
ЭБФ-5 - ди(бета-хлорэтил)-бета-[1-(2-бензилбензимидазолил)]-этилфосфонат.
OCH CH Cl
│ 2
2
CH -CH -P-OCH CH Cl
│ 2 2 ││ 2 2
N ││
// \ / \ O ---
│ ││ C-CH --//
\\
\\ / \ // 2 \ ___ /
N ---
Эмпирическая формула C
H Cl N
O P.
20 23 2 2 3
Молекулярная масса 441,1.
Химически чистый препарат представляет
собой белое кристаллическое вещество с точкой плавления 179 - 181 °С, хорошо растворимое в ацетоне, этаноле, хлороформе,
тетрагидрофуране, диметилсульфоксиде и
малорастворимое в воде.
Лабораторный образец гигроскопичен и
кроме основного продукта (97%) содержит небольшое количество воды (1,1%),
исходного 2-бензилбензимидазола (0,3%) и продуктов дегидрохлорирования
винифоса и целевого продукта (1,6%).
ЭБФ-5 рекомендуется для применения в
качестве эффективного регулятора роста растений на посевах моркови, свеклы,
томатов, огурцов.
2. Методика
определения ЭБФ-5 в воде, растительном материале
Метод основан на извлечении ЭБФ-5 из
пробы хлороформом, очистке экстракта в кислой среде, реэкстракции
препарата в щелочной среде и хроматографировании в
тонком слое силикагеля. Для дополнительной очистки применяют ступенчатую
хроматографию. Первой подвижной фазой служит бензол, второй - смесь бензол -
ацетон (1:1). Зоны локализации ЭБФ-5 обнаруживаются в виде ярко-розовых пятен
после обработки пластинки 0,2% водным раствором эозина. Пределы обнаружения
составляют 0,02 - 0,15 мг/кг (л). Аналитическая открываемость
93,1 - 85,6%.
2.1.2. Метрологическая характеристика
методики (при n = 5, р = 0,95)
┌────────┬────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│Анализи-│ Метрологические
параметры │
│руемый ├───────┬──────────┬─────────┬───────────┬─────────┬─────────────┤
│объект │Предел │Диапазон │Среднее │Стандартное│Довери- │Относительное│
│ │обнару-│определя-
│значение │отклонение,│тельный │ стандартное │
│ │жения,
│емых кон- │% обнару-│
S │интервал │
отклонение, │
│ │мг/кг │центраций,│жения при│ │среднего │ S , %
│
│ │(л) │мг/кг (л) │n = 5 │ │результа-│ 2
│
│ │ │ │ │ │та │ │
├────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┼─────────┼─────────────┤
│Вода │0,02 │0,02 - 3,3│93,1 │1,13 │+/- 2,37 │1,21 │
│Томаты │0,15
│0,15 - 1,5│87,2 │1,95 │+/- 5,44 │2,23 │
│Огурцы │0,15
│0,15 - 1,5│88,0 │0,88 │+/- 2,47 │1,00 │
│Свекла │0,15
│0,15 - 1,5│85,6 │1,93 │+/- 5,37 │2,25 │
│Морковь
│0,15 │0,15 - 1,5│86,0 │0,63 │+/- 1,75 │0,73 │
└────────┴───────┴──────────┴─────────┴───────────┴─────────┴─────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен
в присутствии ХОП, а также близких по области применения таких регуляторов
роста растений, как гидрел, дигидрел,
кампозан, ГМК, ДЯК.
2.2. Реактивы и
материалы
Хлороформ, х.ч.,
ГОСТ 215-74.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Бензол, х.ч.,
ГОСТ 5955-75.
Ацетон, ч.д.а.,
ГОСТ 2603-79.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.
Азотнокислое серебро, х.ч.,
ГОСТ 1277-75.
Аммиак водный, ч.д.а.,
ГОСТ 3760-79.
Соляная кислота, х.ч.,
ГОСТ 3118-77, 0,5 н водный раствор.
Натр едкий, х.ч.,
ГОСТ 4328-77, 20% водный раствор.
Эозин Н индикатор, ч.д.а.,
ТУ 6-09-183-70, 0,1% водный раствор.
Пластинки "Силуфол"
UV-254 (ЧССР).
Фильтры бумажные "синяя лента",
ТУ 6-09-1678-77.
Стандартный раствор ЭБФ-5 в хлороформе с
содержанием 100 мкг/мл.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4,
ТУ 16-535-280-74.
Аппарат для встряхивания жидкости в
лабораторной посуде, ТУ 64-1-1081-73.
Прибор для отгонки растворителя, ТУ
25-11-917-74.
Водоструйный вакуумный насос стеклянный,
ГОСТ 10696-75.
Колба круглодонная короткогорлая
со шлифом, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные на 100 мл, ГОСТ
8613-75.
Воронки химические, ГОСТ 8513-75.
Колбы конические на 250 мл, ГОСТ
10394-72.
Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Проявляющий реактив - аммиакат
серебра
0,85 г азотнокислого серебра помещают в
мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких мл дважды дистиллированной
воды, прибавляют 2,0 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы
перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранят
раствор в темной склянке не более 3-х месяцев.
2.4.2. Проявляющий реактив - 0,1% раствор
эозина
0,1 г эозина растворяют в 100 мл
дистиллированной воды. Хранят раствор не более 3-х месяцев.
2.5. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва,
1980 г., N 2051-79 от 21.08.1979).
Отобранные пробы хранить в стеклянной или
полиэтиленовой таре в сухом и защищенном от света месте.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция и очистка
Вода. 100 мл воды помещают в делительную
воронку и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды порциями по 50 мл. Объединенные
экстракты высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на
ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °С. Остаток количественно
наносят на хроматографическую пластинку.
Растительный материал (томаты, огурцы,
свекла, морковь). 20 г измельченной пробы экстрагируют хлороформом на аппарате
для встряхивания в течение 1 часа. Экстракт отфильтровывают через бумажный
фильтр. Пробы трижды промывают хлороформом. Растворитель отгоняют на
ротационном испарителе досуха при температуре 55 - 60 °С. К сухому остатку
прибавляют 10 - 15 мл 0,5 н соляной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и
переносят в делительную воронку. Колбу еще 2 раза промывают 10 - 15 мл 0,5 н
соляной кислоты. Объединенный кислотный экстракт промывают дважды по 15 - 20 мл
гексана. Гексановые
экстракты отбрасывают, а раствор кислоты подщелачивают 20% раствором едкого
натра до рН = 8 - 9 и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды по 15 - 20 мл.
Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сернокислым натрием,
растворитель отгоняют при температуре 55 - 60 °С,
остаток наносят на пластинку.
2.6.2. Хроматографирование
После
отгонки растворителя пробы с помощью
хлороформа количественно
наносят на
пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см от
нижнего края пластинки
(размеры пластинки 15 х 15 см). Хроматографирование проводят
восходящим
способом. Сначала
хроматографируют в бензоле. При этом ЭБФ-5 остается на
старте, а примеси,
содержащиеся в пробе,
продвигаются вверх. После
подсушивания пластинки на воздухе проводят вторичное хроматографирование в
смеси бензол -
ацетон (1:1). После хроматографирования пластинку
высушивают
и опрыскивают
проявляющим реактивом -
0,1% раствором эозина.
Зоны
локализации
препарата обнаруживаются в виде темно-розовых пятен с величиной
R = 0,6 +/- 0,01.
f
Альтернативные условия
хроматографирования: подвижная фаза - гексан -
ацетон (10:7), проявитель - водный раствор аммиаката
серебра. Пластинку до
и после
обработки проявляющим реактивом подвергают УФ-облучению
в течение 1
часа до
обработки и 5 - 10 минут после обработки. В этих условиях
ЭБФ-5
проявляется в
виде бурых пятен
на светло-сером фоне
с величиной
R = 0,45 +/- 0,01.
f
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественная оценка проводится путем
сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора.
Содержание ЭБФ-5 в анализируемой пробе
определяют по следующей формуле:
А
Х = -,
Р
где:
Х - содержание ЭБФ-5 в исследуемой пробе,
мг/л или мг/кг;
А - количество ЭБФ-5, найденное путем
сравнения со стандартами, мкг;
Р - масса или объем исследуемой пробы, г или л.
3. Требования
техники безопасности
При работе с ЭБФ-5 необходимо выполнять
все требования техники безопасности, необходимые при работе с ядовитыми и
легковоспламеняющимися веществами.
4. Разработчики
1. Бунятян Юрий
Андраникович - филиал ВНИИГИНТОКСа,
г. Ереван.
2. Петросян Маргарита Суреновна
- филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.
3. Джагацпанян
Сусанна Арутюновна - филиал ВНИИГИНТОКСа,
г. Ереван.