Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4034-85

 

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РАУНДАПА В ВОДЕ МЕТОДОМ

ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

 

(Дополнение к N 2434-81)

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

1.1. Действующее вещество - N-(фосфонометил)-глицин.

    1.2. Структурная и эмпирическая формулы:

 

       O            O

       ||           ||

    HO-C-CH -NH-CH -P-OH                                          C H O NP

           3      2 |                                              3 8 5

                    OH

 

Молекулярная масса - 138,1.

1.3. Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество, нелетучее, стабильное при условии хранения. Выше 50 °С разлагается.

Растворимость в воде: 1% при 25°. Нерастворим в большинстве органических растворителей.

ПДК в воде - 0,1 мг/л.

Раундап - послевсходовый гербицид, уничтожает однолетние и многолетние злаковые и двудольные сорняки.

 

2. Методика определения раундапа в воде

с помощью хроматографии в тонком слое

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении раундапа, очистке экстрактов на ионообменных смолах и хроматографировании в тонком слое пластинок: целлюлозы, "Силуфол UV-254" и "Фиксион 50х8", с последующим проявлением нингидрином.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций - 0,05 - 0,25 мг/л.

Предел обнаружения - 0,2 мкг.

Среднее значение определения стандартных количеств - 85 - 90%.

Стандартное отклонение - 4,6%.

Относительное стандартное отклонение - 5,6%.

Доверительный интервал среднего при Р = 0,95, n = 6 равен 5,5.

Погрешность определения - 6,9.

2.1.3. Избирательность метода

Определению раундапа мешают соединения, дающие цветную реакцию с нингидрином, - аминокислоты, пептиды, первичные и вторичные амины, однако очистка экстрактов на ионообменных смолах позволяет отнести метод к категории чувствительных с высокой степенью избирательности.

 

2.2. Реактивы и материалы

 

Анионообменная смола АВ-17-8, ГОСТ 20301-74.

Катионообменная смола КУ-2-8, ГОСТ 20298-78.

Бутиловый спирт нормальный, чда, ГОСТ 6006-78.

Бикарбонат аммония, чда (0,5 М раствор).

Вода дистиллированная.

Натрий тетраборнокислый ОС-73-4, ТУ 6-09-3270-75 (0,1 М раствор в воде, рН = 9,18).

Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77.

Нингидрин, чда, ТУ 6-09-10-1384-79.

Проявляющий реактив - 0,5-процентный раствор нингидрина в этиловом спирте с 3 мл уксусной кислоты.

Соляная кислота, хч, ГОСТ 3118-77.

Стандартный раствор раундапа с содержанием 1 мг/мл химически чистого вещества с последующим разбавлением (0,2 мг/мл или 200 мкг/мл) для нанесения маленьких концентраций.

Уксусная кислота ледяная, хч, ГОСТ 18290-72.

Этиловый эфир уксусной кислоты, хч, ГОСТ 22300-81.

Этиловый спирт, хч, ТУ 6-09-1710-77.

 

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

 

Аппарат для встряхивания проб, АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Бумага хроматографическая марки "Б" или "М".

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Колбы конические на 50, 100 и 500 мл, ГОСТ 10394-72.

Микроразмельчитель тканей РТ-2.

Пипетки на 0,1; 0,2; 2,0; 5,0; 10,0 мл, ГОСТ 202-92-74.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Стаканы химические, ГОСТ 10394-72 (на 100 и 250 мл).

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-81.

Сито капроновое.

 

2.4. Подготовка к определению

 

2.4.1. Приготовление растворов

а) 0,1 М водный раствор натрия тетраборнокислого (38,1 г натрия тетраборнокислого 10-водного растворяют в небольшом количестве воды, а затем доводят ею до 1 л).

б) 0,5% раствор нингидрина (0,5 г нингидрина растворяют в 100 мл этанола и добавляют 3 мл уксусной кислоты).

Для пластинок из целлюлозы можно нингидрин добавлять в подвижный растворитель (50 мг нингидрина на 100 мл раствора), встряхивают его до полного растворения нингидрина, затем ставят пластинки.

Пластинки снимают и без опрыскивания проявителем ставят их в сушильный шкаф при 100 - 110° на 15 минут.

в) 0,5 М раствор бикарбоната аммония (39,5 г бикарбоната аммония растворяют в воде и доводят до 1 литра).

2.4.2. Приготовление целлюлозных пластинок

Получение порошка целлюлозы: берут три листа хроматографической бумаги и режут на мелкие кусочки. В приготовленный раствор концентрированной соляной кислоты с этанолом (140 мл HCl + 600 мл спирта) опускают бумагу и кипятят в течение 2-х часов с обратным холодильником. После кипячения бумагу промывают водой на воронке Бюхнера с вакуумным насосом до исчезновения кислоты в промывных водах. (Проба с метилоранжем: в кислой среде метилоранж розового цвета.)

Затем промывают бумагу чистым спиртом для сушки (500 мл), досушивают в сушильном шкафу при 60 °С в течение 10 часов. Высушенную бумагу измельчают на мельнице и просеивают через капроновое сито.

Для пластинок берут 12,5 г порошка целлюлозы, добавляют 77,5 мл дистиллированной воды и гомогенизируют на аппарате в течение 6 минут. Полученную массу наносят на стеклянные пластинки из расчета 10 мл на пластинку размером 10 х 20 см.

2.4.3. Отбор проб

Отбор проб осуществляется в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Зам. Главного государственного санитарного врача СССР за N 2051-79 от 21.08.79.

 

2.5. Проведение определения

 

Вода. К 200 мл предварительно отфильтрованной воды добавляют 25 г анионита, ставят на аппарат для встряхивания на 1 час, отфильтровывают через бумажный фильтр, фильтрат выбрасывают, а из анионита препарат извлекают 0,5 М раствором бикарбоната аммония (3 раза по 25 мл). В собранный элюат вносят катионит (25 - 30 г) и снова ставят на качалку на 1 час. Затем отфильтровывают через бумажный фильтр. Собранный элюат выпаривают в вакууме досуха при температуре не выше 40 °С. Осадок смывают небольшими порциями воды (0,1 - 0,3 мл) и наносят на хроматографические пластинки.

Хроматографирование. Водные растворы препарата наносят микропипеткой на пластинки, отступая на 2 см от нижнего края. Пластинки помещают в хроматографическую камеру. Для пластинок из целлюлозы подвижной фазой является смесь нормального бутанола, уксусной кислоты и воды (50:25:25), для пластинок "Силуфол" - этилацетат с водой (60:40), для "Фиксион" - 0,1 М раствор натрия тетраборнокислого в воде.

После окончания хроматографирования пластинки высушивают на воздухе, опрыскивают 0,5% раствором нингидрина и ставят в термостат на 10 - 15 минут при температуре 110 °С. Раундап и его метаболит на пластинках проявляются в виде малиново-сиреневых пятен.

    R  раундапа  и его метаболита  для целлюлозных пластинок - 0,82 и 0,41;

     f

для  "Фиксиона" -  0,85  и  0,70  соответственно.  На  пластинках "Силуфол"

проявляется только раундап (R  = 0,55 - 0,60).

                             f

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.

 

2.6. Обработка результатов анализа

 

Концентрацию раундапа в воде определяют по следующей формуле:

 

                                   А

                               Х = -,

                                   V

 

где:

Х - содержание раундапа в воде, мг/л;

А - количество препарата, найденное в анализируемой пробе, мкг;

V - объем воды, взятой для анализа (мл).

 

3. Техника безопасности

 

При проведении исследований по данной методике соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с ядовитыми веществами.

 

4. Настоящие Методические указания составлены по материалам лаборатории биохимии НИИ защиты растений (г. Ереван) с.н.с., к.б.н. Н.В. Бажановой и м.н.с. Ж.А. Арутюнян.

Методические указания апробированы в институте АзНИИРХ, г. Ростов-на-Дону (т. Кишнинова Т.С. и Игнатенко).