Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 ноября 1985 г. N 4036-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНМЕДИФАМА И ДЕСМЕДИФАМА В ВОДЕ
ПРИРОДНЫХ ВОДОЕМОВ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
┌───┬──────────┬───────────────────┬──────────┬─────┬──────┬───────────────┐
│
N │ Вещество,│
Структурная │ Брутто
│ Мол.│Т пл.,│
Растворимость,│
│п/п│химическое│ формула │
формула │масса│ °С │
мг/л │
│ │ название │ │ │
│ │ │
├───┼──────────┼───────────────────┼──────────┼─────┼──────┼───────────────┤
│1.
│Фенмедифам│ ___
NHCO CH │C H N O │300,3│143
- │Т комн. │
│ │(бетанал) │ --- /
2 3 │ 16 16 2 4│ │144 │вода - 3 │
│ │3-Метокси-│/ \ │ │ │ │ацет. -
20000 │
│ │карбамидо-│\\ //
│ │ │ │метанол - 50000│
│ │фенил-N-3-│ --- \ │ │ │ │хлф. -
20000 │
│ │метилфенил│ OCONHC H CH │ │ │ │гекс. -
500 │
│ │карбамат │ 6 4 3│ │ │ │бенз. -
2500 │
│ │ │ │ │ │ │ │
│2.
│Десмедифам│ ___
NHCO C H │C
H N O │300,3│120 │вода - 7 │
│ │3-Этокси- │ --- /
2 2 5 │ 16 16 2 4│ │ │ацет. -
400000 │
│ │карбамидо-│/ \ │ │ │ │метан - 180000 │
│ │фенил-N- │\\
// │ │ │
│бенз.
- 1600 │
│ │фенилкар- │ --- \ │ │ │ │хлф. -
80000 │
│ │бамат │ OCONHC H │ │ │ │ │
│ │ │ 6 5 │ │ │ │ │
└───┴──────────┴───────────────────┴──────────┴─────┴──────┴───────────────┘
Фенмедифам и десмедифам - гербициды, применяемые для
борьбы с сорными растениями в посевах сахарной, столовой и кормовой свеклы.
Оба соединения малотоксичные. ЛД для
крыс: фенмедифама - 8000 мг/кг,
50
десмедифама - 9600 мг/кг; СК для рыб соответственно - 0,5 - 10 мг/л и 3,8
50
- 16,4 мг/л.
ПДК в воде природных водоемов 0,1 мг/л
для обоих гербицидов.
2. Методика
определения фенмедифама и десмедифама
в воде природных водоемов тонкослойной
хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении гербицидов из
воды хлороформом с последующим определением с помощью тонкослойной
хроматографии.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон измеряемых концентраций 0,15 -
1,00 мкг.
Предел обнаружения в пробе 0,002 мг/л.
Среднее
значение определения стандартных
растворов фенмедифама и
_
десмедифама С при n = 15 - 91,3% и
93,7% соответственно.
Стандартное отклонение S при n = 15 - +/-
6,9% и 6,7%.
Доверительный интервал среднего
определения при р = 0,95 и n = 5 - 91,3 +/- 8,6% и
94,7 +/- 8,3% соответственно.
Размах варьирования R 80 - 100% для обоих
гербицидов.
2.1.3. Избирательность метода
Метод селективен.
2.2. Реактивы и
материалы
Хлороформ, х.ч.,
ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный.
Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Ацетон, х.ч.,
ГОСТ 2603-79.
Этилацетат, х.ч.,
ГОСТ 22300-76.
Сульфат натрия, х.ч.,
ГОСТ 4166-76, безводный.
Этиловый эфир, х.ч.,
ГОСТ 6265-74.
Аммиак, ч., ГОСТ 3760-79,
концентрированный.
4-Аминоантипирин, ч.д.а.,
ТУ 6-09-3948-75, 1-процентный водный раствор. Готовят ежедневно.
Калий
железосинеродистый, K [Fe(CN) ], ч.д.а., ГОСТ
4206-81,
3 6
4-процентный
водный раствор.
Соляная кислота, HCl,
ч.д.а., ГОСТ 3118-77, уд. м. 1,19.
Углекислый натрий, Na
CO , ч.д.а.,
ГОСТ 83-79, 10-процентный
водный
2 3
раствор.
Едкий калий, KOH, х.ч.,
ГОСТ 9285-78, 10-процентный водный раствор.
Нитрит натрия, NaNO
, ГОСТ 4197-74, 10-процентный водный раствор.
2
Сульфаниловая кислота, ч.д.а., ГОСТ 5821-78.
Проявляющий реактив на основе соли диазония. Для приготовления n проявляющего реактива
растворяют 25 г сульфаниловой кислоты в 125 г 10-процентного КОН. Раствор
охлаждают и смешивают со 100 мл 10-процентного раствора нитрита натрия.
Реакционную смесь приливают к 40 мл охлажденной льдом соляной кислоты (уд. м. 1,19), разбавленной 20 мл
воды. (При разбавлении соляную кислоту добавляют в воду, а не наоборот!)
Полученную соль диазония отфильтровывают, промывают
водой, этиловым эфиром, затем сушат на воздухе. Соль помещают в склянку с
притертой пробкой и хранят в холодильнике. Хроматограмму
опрыскивают свежеприготовленным раствором 0,1 г соли диазония
в 20 мл 10-процентного раствора углекислого натрия.
Пластинки силуфол,
производство ЧССР.
Стандартные растворы фенмедифама
и десмедифама в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл
(раствор N 1) и 1 мкг/мл (раствор N 2). Растворы N 1 и N 2 стабильны при
хранении в холодильнике в течение трех месяцев.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Ротационный вакуумный испаритель с
набором колб, ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.
Хроматографическая камера с пришлифованной крышкой, ГОСТ 10565-75.
Камера для аммиака с пришлифованной
крышкой.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Делительные воронки, ГОСТ 10054-75, на
250 мл.
Конические колбы, ГОСТ 9737-70, на 250
мл.
Пробирки градуированные конические с пробками на шлифах, ГОСТ 1770-74, на 10
мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1 мл с
делениями.
Микрошприц на 100 мкл, ГОСТ 10391-74.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
2.4. Подготовка к
определению
Хроматографическую камеру за один час до начала хроматографирования
заполняют смесью подвижных растворителей этилацетат:гексан (2:5) для насыщения камеры парами
растворителей. Объем подвижного растворителя должен по высоте находиться не
выше чем 0,7 - 1,0 см от уровня дна камеры.
2.5. Отбор проб
Отбор проб воды проводят в соответствии с
утвержденными "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной
продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом
СССР 21 августа 1979 г., N 2051-79.
2.6. Проведение
определения
Пробу воды 100 мл помещают в делительную
воронку на 250 мл и экстрагируют фенмедифам и десмедифам трижды хлороформом, порциями по 50 мл.
Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (10 г), а затем
порциями фильтруют в грушевидную колбу на 30 мл. Каждую порцию хлороформного
экстракта концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема
1 - 2 мл. Последнюю порцию экстракта концентрируют досуха. К сухому экстракту
пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки
тщательно обмывают растворителем. Из полученного раствора микрошприцем
отбирают 100 мкл и переносят в коническую пробирку. В
пробирку помещают заплавленный в верхней части
стеклянный капилляр и концентрируют раствор на горячей водяной бане до объема
0,05 мл. Остаток с помощью того же капилляра, но с отломанным запаянным концом,
переносят на хроматографическую пластинку.
Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов гербицидов с
содержанием 0,2; 0,3; 0,4...1 мкг. Серию стандартов готовят следующим образом:
из стандартных растворов N 2 в коническую пробирку пипеткой переносят 0,2; 0,3;
0,4...1 мл, в пробирки помещают заплавленные в
верхней части капилляры и концентрируют растворы на горячей водяной бане до
объема 0,05 мл. Хроматограмму развивают в системе этилацетат:гексан (2:5). После
развития хроматограмму тщательно высушивают на
воздухе, термостатируют в течение 5 мин. при 150 °С в сушильном шкафу, затем помещают в камеру с аммиаком,
где выдерживают пластинку в течение 10 мин. Аммиак с пластинки отдувают на
воздухе, а затем пластинку обрабатывают одним из двух способов.
Способ 1. Пластинку обрабатывают 1-процентным водным
раствором
4-аминоантипирина, а
затем 4-процентным водным
раствором K [Fe(CN) ].
3 6
Фенмедифам и десмедифам проявляются на пластинке в виде розовых пятен на
желтоватом фоне с R 0,32 +/-
0,05 и 0,42 +/- 0,05 соответственно.
f
Пятна стабильны при хранении в темноте в
течение двух недель.
Способ 2. С использованием проявляющего
реагента на обнове соли диазония. Пластинку
обрабатывают свежеприготовленным раствором соли диазония.
В этом случае гербициды проявляются в виде устойчивых оранжевых пятен на белом
фоне. Хроматограммы стабильны
при хранении даже на свету в течение длительного периода времени (более одного
месяца).
Линейность определения гербицидов с
использованием обоих проявляющих реагентов 0,2 - 1,0 мкг в хроматографируемой
пробе.
Для расширения диапазона определения
гербицидов на пластинку можно наносить не аликвотные части растворов, а весь
раствор полностью. При большом содержании гербицидов в грушевидную колбочку
пипеткой добавляют дополнительное замеренное количество ацетона и после этого
отбирают аликвотную часть для хроматографирования.
2.7. Обработка результатов
анализа
Количественное определение проводят путем
сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии
стандартов.
Содержание фенмедифама
и десмедифама в анализируемой пробе воды Х в мг/л
вычисляют по формуле:
С х V
Х = ------,
V х Р
а
где:
С - количество гербицида, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
V - общий объем раствора, мл;
V -
объем аликвоты, отобранной
для хроматографирования, мл
(при
а
нанесении всей
пробы V = V );
а
Р - объем воды,
отобранной для анализа, мл.
3. Требования
безопасности
Соблюдать требования безопасности,
установленные для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и работы с
крепкими кислотами и щелочами.
4. Разработчики
Настоящие Методические указания
разработаны во ВНИИХСЗР с опытным заводом, г. Москва, Т.В. Алдошиной, К.Ф.
Новиковой.
5. Настоящие
Методические указания являются дополнением к методу определения бетанала в сахарной свекле тонкослойной хроматографией,
разработанному М.А. Клисенко, Н.И. Киселевой (N
1112-73).
6. Апробаторы
1. НПО "Эфирмасло",
Ю.С. Баранов.
2. ВИЭВ, В.Н. Полякова.