Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 ноября 1985 г. N 4037-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АРИЛОНА
ПО БЕНЗОЛСУЛЬФОНАМИДУ В ЗЕРНАХ ХЛОПКА, ПОЧВЕ И ВОДЕ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома
СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Арилон (хлорамин "Б") - кристаллогидрат натриевой соли бензолсульфонамида. Арилон
показал хорошие результаты в качестве антисептика на хлопке.
Cl
/
/\\ SO
N x 3H O C H O NClSNa
/ \\/ 2 \
2
6 11 5
││ │
Na
││ │
Мол. масса 267,66.
\
//
\//
Арилон хорошо растворим в воде и водных растворах щелочей. При нагревании
выше 150 °С разлагается с выделением газообразных
продуктов разложения (HCl, Cl).
В водных и кислых растворах нестабилен, в течение
нескольких минут разлагается до бензолсульфонамида.
МДУ арилона в
хлопке еще не установлен.
2. Методика
определения арилона в зернах хлопка,
почве и воде тонкослойной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении арилона в виде бензолсульфонамида
(БСА) из анализируемого объекта этилацетатом, перераспределении в солянокислый
раствор, а затем, после подщелачивания, - в этилацетат и определении
тонкослойной хроматографией.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода.
Диапазон измеряемых концентраций 0,1 -
0,5 мкг в хроматографируемой пробе по БСА.
Предел
обнаружения арилон
БСА
в хлопке 0,35 мг/кг 0,2 мг/кг
в почве 0,1 мг/кг 0,07 мг/кг
в воде 0,003 мг/л 0,002 мг/л
Дальнейшая метрологическая характеристика
метода представлена в таблице 1.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌──────┬───────────────────┬──────────────┬──────────────────┬────────────┐
│Объект│Среднее значение │
Стандартное │
Доверительный │ Размах
│
│ │определения стан- │отклонение при│интервал
среднего │варьирования│
│ │ _│ n = 15, S, % │
определения при │ R, %
│
│ │дартных
количеств С│ │р = 0,95, n = 5, %│ │
│ │при n = 15, % │ │ │ │
├──────┼───────────────────┼──────────────┼──────────────────┼────────────┤
│Хлопок│85,7 │+/- 11,2 │85,7 +/- 13,8 │70 - 100 │
│Почва
│92,7 │+/-
7,0 │92,7 +/- 8,6 │80 - 100 │
│Вода │86,7 │+/- 9,7 │86,7 +/- 12,1 │70 - 100 │
└──────┴───────────────────┴──────────────┴──────────────────┴────────────┘
2.1.3. Избирательность метода.
Метод селективен.
Другие пестициды, применяемые на хлопчатнике, в том числе хлорорганические и
фосфорорганические, определению не мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, осч,
ГОСТ 2609-79, свежеперегнанный.
Этилацетат, хч,
ГОСТ 22300-76, свежеперегнанный.
Этиловый спирт 96-процентный, ТУ
6-09-1710-77.
Бензол, чда,
ГОСТ 5955-75.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Na SO , хч, ГОСТ 4166-76, безводный.
2
4
KMnO , хч, ГОСТ 4220-75.
4
о-Толидин, ч,
ТУ 6-09-2992-73.
KI, йодистый кали, хч,
ГОСТ 4232-74.
Соляная кислота, фиксанал,
осч, ГОСТ 14261-77, 0,1 н, 10-процентный.
КОН, едкое кали, техн.,
ГОСТ 9285-78.
Уксусная кислота, осч,
ГОСТ 18270-72, ледяная.
Проявляющий реагент 1. Растворяют 0,16 г
о-толидина в 30 мл уксусной кислоты, доводят до 500
мл водой и прибавляют 1 г KI. Раствор хранить в темном месте.
Хлорирующая
смесь. Смешивают равные
объемы 1,5-процентного раствора
KMnO и
10-процентного раствора HCl в чашечке Петри. Смесь в чашке
Петри
4
помещают на
дно хлорирующей камеры
с притертой крышкой. Для этой
цели
обычно
достаточно 10 - 12 мл хлорирующей смеси.
Проявляющий реагент 2. Смешивают 50 мл
1-процентного водного раствора KI с 50 мл 3-процентного водного
свежеприготовленного, доведенного до кипения крахмала и 20 мл этилового спирта.
При хранении на холоде раствор стабилен в течение нескольких дней.
Стандартные растворы бензолсульфонамида
в ацетоне с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Раствор 1 с содержанием 100 мкг/мл
готовят растворением 10 мг бензолсульфонамида,
помещенного в мерную колбу на 100 мл, в ацетоне. Для приготовления раствора 2 с
содержанием 10 мкг/мл из раствора 1 пипеткой отбирают в мерную колбу на 100 мл
10 мл и доводят до метки ацетоном. Растворы 1 и 2 стабильны при хранении в
холодильнике в течение одного месяца.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Камера хроматографическая,
ГОСТ 10565-75, или аналогичная.
Аппарат для встряхивания.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,
ТУ 25-11-917-76, с набором колб или аналогичный.
Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 250
и 1500 мл.
Стеклянные пульверизаторы, ГОСТ 10391-74.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-77, на 10, 15 и 2 мл.
Кофейная мельница.
Пробирки с пробками на шлифах, ГОСТ
10515-75, на 10 мл.
Круглодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100
и 250 мл.
Плоскодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100,
500 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Камера хлорирующая с пришлифованной крышкой.
Чашечки Петри, ГОСТ 19908-74.
Микрошприц на 100 мкл.
Пластинки силуфол,
150 х 150 см, производство ЧССР.
2.4. Подготовка к
определению
Хроматографические камеры за один час до начала хроматографирования
заполняют смесью подвижных растворителей гексан:этилацетат (1:1) или бензол:ацетон
(7:3). Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не
выше чем 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.
2.5. Отбор проб
Отбор проб проводят в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом
СССР 21 августа 1979 г., N 2051-79.
2.6. Подготовка
проб к анализу
Зерна хлопка измельчают на кофейной
мельнице до консистенции муки грубого помола. Для определения берут 3 - 5 проб
массой по 10 г. Почву просеивают, отбирают средние пробы массой по 15 г. Перед
анализом почву увлажняют 2 мл воды.
2.7. Проведение
определения
Хлопок, почва. Навеску анализируемого
образца помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 75 мл перегнанного
этилацетата и экстрагируют БСА на механическом встряхивателе
в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу
на 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл
этилацетата. Объединенный этилацетатный экстракт
концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 2
мл, а почвенный экстракт досуха. К остатку в колбе приливают 15 мл 0,1 н HCl в экстракт из хлопка и 30 мл 0,1 н HCl
- в почвенный экстракт. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр в
делительную воронку на 250 мл. Стенки колбы тщательно обмывают 0,1 н HCl порциями по 15 и 30 мл. Полученные растворы также
фильтруют в делительную воронку. В результате жир из хлопкового экстракта
остается на бумажном фильтре. Если делительная воронка все-таки испачкалась
жиром, солянокислотный экстракт переносят в другую
воронку, при этом жир остается на стенках первой колонки. Далее к экстракту
добавляют 1,25 мл 4 н КОН до pH = 10. БСА извлекают
экстракцией этилацетатом, порциями по 30 мл три раза. Экстракт сушат над
безводным сульфатом натрия (15 - 20 г), фильтруют и концентрируют с помощью
ротационного вакуумного испарителя досуха.
К сухому остатку от хлопка пипеткой
приливают 1 мл этилацетата, а к почвенному экстракту - 0,5 мл ацетона. Колбу
закрывают пробкой и тщательно обмывают стенки колбы растворителем. Для хроматографирования отбирают аликвоты
в 100 мкл.
Вода. К 1 л воды, помещенной в
делительную воронку емкостью 1,5 л, приливают 1 мл 4 н КОН и экстрагируют БСА
этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 150 мл и два раза по 100 мл. Этилацетатный экстракт концентрируют с помощью ротационного
вакуумного испарителя досуха. Остаток с помощью 0,1 н HCl
(30 мл х 3) переносят в делительную воронку на 500 мл, в воронку добавляют 1,25
мл 4 н КОН и трижды экстрагируют БСА этилацетатом порциями по 30 мл. Этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом
натрия, а затем порциями концентрируют с помощью ротационного вакуумного
испарителя до объема около 2 мл. Последнюю порцию концентрируют досуха. К
сухому остатку пипеткой приливают 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой на
шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. Для ТСХ отбирают аликвоту в 100 мкл.
На
пластинку наносят микрошприцем 100 мкл полученного раствора. Справа
и слева
от рабочей пробы
на пластинку микрошприцем наносят
серию
стандартных растворов
2 в количестве
10, 20, 30...
50 мкл, что
соответствует
0,1; 0,2; 0,3;... 0,5 мкг БСА. Хроматограмму
развивают в
смеси этилацетата с гексаном (1:1)
или бензола с
ацетоном (7:3).
После развития хроматограммы
пластинку во влажном состоянии
помещают в
камеру с
хлорирующей смесью на 2
- 3
мин., затем пластинку вынимают из
камеры, помещают
ее под тягу и дают возможность избытку хлора испариться,
после чего
обрабатывают пластинку из
пульверизатора о-толидиновым
реагентом. Бензолсульфонамид проявляется на пластинках
в виде сиреневых
пятен на
белом фоне с
R = 45
+/- 0,03 в
первой системе подвижных
f
растворителей и
с R
= 0,50 +/-
0,03 - во второй.
Линейный диапазон
f
определения 0,1
- 0,5 мкг БСА. Пятна стабильны в
течение длительного
времени.
Хроматограмму можно проявлять также проявляющим реагентом 2. В этом случае БСА
проявляется на пластинках в виде голубых пятен на белом фоне с нижним пределом
определения 0,1 - 0,2 мкг.
2.8. Обработка
результатов анализа
Количественное определение проводят путем
сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии
стандартов.
Содержание арилона
в анализируемой пробе X в мг/кг вычисляют по формуле:
С х V х К
Х = ---------,
V х Р
а
где:
С
- количество бензолсульфонамида, найденное
на пластинке методом
соотношения со
стандартом, мкг;
V - общий объем раствора, мл;
V -
объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл;
а
Р - навеска
анализируемой пробы в г;
К - коэффициент
пересчета БСА на арилон, равен 1,71.
3. Требования
безопасности
Соблюдать требования безопасности,
принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями, кислотами и щелочами.
4. Разработчики
Методические указания разработаны во ВНИИ
химических средств защиты растений с опытным заводом, г. Москва, Л.И.
Лещинской, К.Ф. Новиковой.
5. Апробаторы
1. НПО "Эфирмасло",
Ю.С. Баранов.
2. ВИЭВ, В.Н. Полякова.