Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4322-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУМИЛЕКСА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
Л.Г. Александровой (КНИИГТиПЗ).
Краткая характеристика препарата дана в
Методических указаниях N 2797-83.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции сумилекса из биологических сред
органическими растворителями (хлороформ, гексан,
ацетон), очистке экстракта и последующем определении препарата методом
газожидкостной хроматографии с ДЭЗ или ДПР.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 137.
Таблица 137
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО
МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУМИЛЕКСА В БИОСРЕДАХ (n = 5 и
p = 0,95)
┌────────────────────────┬────────────┬────────────┬───────────┬──────────┐
│ Анализируемый объект │
Нижний │ Среднее
│Стандартное│Довери- │
│ │ предел
│ значение │отклонение,│тельный │
│ │определения,│определения,│ %
│интервал │
│ │ мкг/мл
│ % │ │среднего, │
│ │ или мкг/г │ │ │% │
├────────────────────────┼────────────┼────────────┼───────────┼──────────┤
│Желудочный
сок │0,05 │95,4 │+/- 3,4 │+/- 4,2 │
│Слюна │0,05 │95,4 │+/- 3,4 │+/- 4,8 │
│Желчь │0,05 │90,2 │+/- 4,1 │+/- 5,1 │
│Моча │0,002 │96,3 │+/- 3,4 │+/- 4,2 │
│Кровь │0,05 │90,8 │+/- 4,4 │+/- 5,5 │
│Ткани
внутренних органов│0,05 │89,9 │+/- 5,2 │+/- 6,4 │
└────────────────────────┴────────────┴────────────┴───────────┴──────────┘
Избирательность метода. Определению сумилекса не мешают пестициды, которые применяют для
обработки тех же сельскохозяйственных культур, что и сумилекс
(например актеллик, метафос, офунак и др.).
Реактивы, растворы. Сумилекс
х.ч. Ацетон х.ч,
Гексан ч. Хлороформ х.ч.
Цитрат натрия х.ч. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Стандартный раствор сумилекса
с содержанием 100 мкг/мл в гексане. Для этого
взвешивают 10 мг х.ч. препарата или 20 мг
50-процентного с.п. и растворяют в гексане в колбе на 100 мл. Хранят в холодильнике до 1 мес.
Рабочие растворы с содержанием сумилекса 0,5; 5 и 10
мкг/мл готовят соответствующим разбавлением исходного стандартного раствора.
Азот особой чистоты.
Насадка хроматографической
колонки: хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30 (товарная
форма), зернение 0,16 - 0,2 мм.
Приборы, посуда. Газовый хроматограф с
ДЭЗ или ДПР. Ротационный вакуумный испаритель с набором колб. Аппарат для
встряхивания. Измельчитель тканей. Колбы мерные,
грушевидные. Цилиндры. Пипетки, микропипетки. Стаканы, склянки химические
вместимостью 50 - 100 мл. Воронки химические и делительные. Баня водяная. Микрошприцы МШ-10, цена делений 0,2 мкл.
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 1 м,
внутренним диаметром 3 мм. Секундомер. Линейка и измерительная лупа.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. К 2 мл пробы слюны, желчи, желудочного сока приливают 0,5 мл
дистиллированной воды и 3 мл гексана. Осторожно
встряхивают на холоду в течение
30 - 40 мин. Отделяют органический слой. Экстракцию повторяют еще дважды по 2
мл гексана. Экстракты объединяют, пропускают через
безводный сернокислый натрий (2 г), который помещают на фильтр. Измеряют объем
полученного раствора.
К 20 - 50 мл мочи приливают 2 - 5 мл воды
и 10 мл гексана. Осторожно встряхивают в течение 30
мин. Органический слой отделяют, экстракцию проводят еще дважды по 5 мл гексана. Экстракты объединяют, фильтруют и пропускают через
безводный сульфат натрия (5 г). Растворитель отгоняют до объема 10 мл.
Аликвотную часть полученного раствора (2 - 5 мкл)
вводят в хроматограф.
Пробу крови (1 - 2 мл) собирают в
пробирку, смоченную 5-процентным раствором цитрата натрия. Приливают 4 мл
хлороформа и встряхивают на холоду в течение 30 мин.
Далее поступают так, как описано для желчи. Полученный осушенный экстракт
отгоняют примерно до 0,1 - 0,2 мл. Остаток испаряют при комнатной температуре.
К сухому остатку приливают 1 мл гексана и в
хроматограф вводят 2 - 5 мкл раствора.
Пробу тканей внутренних органов массой 1
- 2 г измельчают и заливают 4 - 5 мл хлороформа или ацетона. Экстрагируют на холоду, встряхивают 30 - 40 мин.
Органический слой отделяют. Экстракцию повторяют еще дважды по 3 - 4 мл
растворителя. Экстракты объединяют, фильтруют, пропускают через безводный
сульфат натрия (1,5 - 2 г). Отгоняют растворитель примерно до 0,1 - 0,2 мл.
Остаток испаряют при комнатной температуре досуха. К сухому остатку приливают 1
мл гексана и в хроматограф вводят 2 - 5 мкл раствора.
Условия
газохроматографического
анализа. ДЭЗ или ДПР. Режим
работы -
изотермический. Колонка
(длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм). Насадка -
хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30. Температура, °C: колонки -
180, испарителя -
220, детектора
- 190. Расход
азота особой чистоты 45 мл/мин.
Продувка
детектора 6 л/ч,
воздуха 240 мл/мин. Чувствительность шкалы электрометра
-12 -12
20 x 10 -
50 x 10 А. Минимально детектируемое
количество 0,5 нг.
Время
удерживания 6 мин.
Обработка результатов анализа.
Количественную обработку результатов анализа проводят методом абсолютной
калибровки. Для этого в хроматограф вводят стандартные растворы сумилекса, содержащие 0,5; 1; 2; 5; 8; 12; 15 и 20 мкг/мл
(по 5 определений). По средним данным строят градуировочный
график зависимости "площадь пика - концентрация". По градуировочному графику находят концентрацию сумилекса в хроматографируемой
пробе. При анализе проб параллельно проводят не менее 3 определений. Для расчета
можно воспользоваться формулой, куда вводят площадь пика на хроматограмме
стандарта, наиболее близкого по размерам к пику на хроматограмме
пробы. Содержание сумилекса в исследуемой
биологической пробе (X, мкг/мл или мкг/г) определяют по формуле:
C
S V
ст пр
X = -------,
S V P
ст 1
где:
C -
количество сумилекса в хроматографируемом
стандарте, нг;
ст
S
, S - площади пиков соответственно на хроматограмме
стандарта и
ст пр
пробы, кв. мм;
V - общий объем экстракта, мл;
V - хроматографируемый объем экстракта, мкл;
1
P - масса или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать требования безопасности при работе с ядовитыми веществами,
электронагревательными приборами и сжатыми газами.