Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4325-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГОАЛА В ПОЧВЕ, ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ
И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
Ю.С. Барановым (ВНИИЭМК).
Краткая характеристика препарата
приведена в Методических указаниях N 3063-84.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении гоала из почвы и растительных проб
ацетоном с последующим перераспределением из водно-ацетоновой смеси в н-гексан, очистке гексановых
экстрактов концентрированной серной кислотой и определении методом ГЖХ с ДПР.
Метрологическая характеристика метода.
Минимально детектируемое количество гоала 0,1 нг. Остальные параметры приведены в таблице 59.
Таблица 59
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ГОАЛА
(n = 5, p = 0,95)
┌────────────────────────────────────────────────┬────────────────────────┐
│ Параметры │ Анализируемый объект │
│
├───────┬────────┬───────┤
│
│ почва │растения│эфирное│
│
│ │ │ масло │
├────────────────────────────────────────────────┼───────┼────────┼───────┤
│Нижний
предел определения, нг │0,002 │0,004
│0,02 │
│Среднее
значение определения (при n = 15), % │89,4 │79,8 │80,5 │
│Стандартное
отклонение, % │+/-
2,1│+/- 2,3 │+/- 2,1│
│Доверительный
интервал среднего, % │+/-
5,1│+/- 5,6 │+/- 5,2│
└────────────────────────────────────────────────┴───────┴────────┴───────┘
Избирательность метода. Метод селективен в присутствии ХОП и ФОП, определению не мешают фенилзамещенные мочевины, симм-триазины,
амиды, трефлан, стомп, нитрохлор, префоран.
Реактивы и растворы. Ацетон ч. н-Гексан ч. Серная кислота ч. Бензол. Оксид алюминия для
хроматографии ч., II степени активности по Брокману. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Стандартные
растворы гоала в гексане с
содержанием 10; 1 и 0,1 мкг/мл. Растворы гоала
стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 мес.
Приборы и посуда. Хроматограф газовый с
ДЭЗ "Цвет-106", "Цвет-164", "Газохром-1106" и др.
Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор. Весы
технические и аналитические. Воронки делительные. Колбы: плоскодонные
конические; грушевидные остродонные; круглодонные;
мерные на 100 мл. Мензурки на 100 и 50 мл. Пипетки на 1 и 10 мл. Пробирки на 10
и 20 мл типа ПЧО. Микрошприцы на 10 мкл. Колонка для хроматографии длиной 100 мм с диаметром 15
мм.
Подготовка к определению. Органические
растворители (ацетон, н-гексан, бензол) перед началом
работы следует очистить по соответствующим методикам и перегнать, сульфат
натрия прокалить при 300 - 400 °C. Хроматографическую
колонку кондиционируют в режимных условиях в течение 2 ч.
Отбор проб. Для анализа отбирают среднюю
пробу почвы массой 100 г, растений-эфироносов - 50 г, эфирного масла - 10 г.
Пробы хранят в холодильнике при 5 °C не более суток.
Ход анализа. Экстракция. Пробу
измельченной и просеянной через сито почвы (100 г) помещают в колбу на 250 мл,
заливают 150 мл ацетона и экстрагируют 1 ч, используя механический встряхиватель; оставляют на ночь. Экстракты фильтруют через
бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Остаток на фильтре дважды
промывают ацетоном порциями по 30 мл. Фильтрат концентрируют до объема 10 мл на
ротационном испарителе при температуре водяной бани 50 °C. Остаток с 30 мл н-гексана переносят в делительную воронку вместимостью 500
мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды, встряхивают и отделяют верхний
слой, пропуская его через 100 г безводного сульфата натрия. Оставшийся водный
раствор дважды экстрагируют н-гексаном порциями по 30
мл. Объединенные гексановые экстракты пропускают
через безводный сульфат натрия и концентрируют на ротационном испарителе
досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл бензола, закрывают
колбу и вращают ее. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл
раствора. Если экстракт окрашен, бензольный раствор
переносят количественно (4 мл бензола) в пробирку с притертой пробкой,
прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, энергично встряхивают и
оставляют на 10 - 20 мин. После расслоения фаз в хроматограф вводят 2 мкл бензольного слоя.
Свежесрезанные эфиромасличные растения
(50 г) гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение 15 - 20 мин. со скоростью
8000 об./мин., встряхивают 30
- 40 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500
мл. Остаток на фильтре дважды промывают ацетоном порциями по 50 мл. Фильтрат
концентрируют на ротационном испарителе до объема 10 мл при температуре водяной
бани 50 °C. Остаток количественно с 30 мл н-гексана
переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл
дистиллированной воды, встряхивают и отделяют верхний слой, пропуская его через
100 г безводного сульфата натрия. Оставшийся водный раствор дважды экстрагируют
н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенные экстракты
пропускают через безводный сульфат натрия и концентрируют на ротационном
испарителе досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 5 мл бензола и
1 мл концентрированной серной кислоты, энергично встряхивают и оставляют на 10
- 20 мин. После расслоения фаз в хроматограф вводят 2 мкл
бензольного раствора.
Если проба окрашена, проводят
дополнительную очистку на колонке с оксидом алюминия. Для этого отбрасывают на
делительной воронке слой серной кислоты, а оставшийся бензольный
раствор переносят на предварительно промытую бензолом хроматографическую
колонку, заполненную смесью из 6 г оксида алюминия и 2 г безводного сульфата
натрия. Элюируют гоал 60 мл
бензола. Элюат концентрируют до 1 мл на ротационном
испарителе и 2 мкл раствора вводят в испаритель
хроматографа.
Навеску эфирного масла (10 г) растворяют
в 50 мл н-гексана. В делительной воронке вместимостью
250 мл гексановый раствор трижды промывают
концентрированной серной кислотой порциями по 30 мл. Верхний гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия.
Серную кислоту собирают и через 1,5 - 2 ч снова отделяют гексановый
слой, который присоединяют к основному раствору. Объединенный гексановый раствор упаривают досуха на ротационном
испарителе при температуре бани 50 °C. К сухому остатку по стенкам колбы
прибавляют 1 мл бензола, закрывают и вращают колбу. В испаритель хроматографа
вводят 2 мкл раствора.
Если проба очищена недостаточно, проводят
дополнительную очистку на колонке с оксидом алюминия.
Условия
хроматографирования. Используют стеклянные спиральные колонки
длиной 1
м с внутренним диаметром 3 мм. Расход
газа-носителя 60 мл/мин.
Температура
(°C): испарителя - 250, термостата детекторов - 250, термостата
колонок -
190. Хроматографируемый объем
2 мкл. Линейный динамический
-12
диапазон 0,1
- 10 нг. Рабочая
шкала электрометра 20 x 10 А. Время
удерживания гоала на SE-30 - 7 мин. 45 с, на XE-60 - 9 мин. 9 с.
Обработка результатов анализа. Содержание
препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
HV
1
X = ----,
V KA
2
где:
H - высота пика препарата в анализируемой
пробе, мм;
V -
объем анализируемой пробы, мл;
1
V -
объем инъектируемой пробы, мкл;
2
A - навеска, г;
K - калибровочный коэффициент, определяемый
по формуле:
H H H
1 1
2 n
K = - (--- + --- + ... + ---),
n CV
CV
CV
1 2
n
где:
H , H , H
- высоты пиков стандартных растворов гоала,
мм;
1
2 n
V ,
V , V -
объемы стандартных растворов
гоала,
вводимых в
1
2 n
хроматограф, мкл;
C
- концентрация стандартного раствора гоала
(0,5 мкг/мл).
Содержание гоала
в пробах почвы, растений и эфирного масла вычисляют как среднее из трех
параллельных определений.
Требования безопасности. Следует
руководствоваться правилами безопасности при работе с соединениями третьего
класса токсичности и легколетучими растворителями.