Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4329-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕСИНА В ВОДЕ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ СВЕКЛЫ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препарата.
Ресин - 5,6,7-трихлор-3-
фенил-2Н-1,2,4-бензотиадиазиноксид-1.
Брутто-формула C H OCl
N S.
13 7 3 2
Молекулярная
масса 345,64. Химически чистое вещество
- кремоватый
порошок без
запаха с т. пл. 225 - 230 °C, труднорастворимый в
хлороформе, ацетонитриле, диметилформамиде. Растворимость в воде,
бензоле, эфире при 20 °C 0,1%. МДУ в корнеплодах
сахарной свеклы
0,04 мг/кг; ПДК
в воде 0,002 мг/л.
Ресин применяется совместно с ТМТД в виде
дуста при предпосевной обработке семян свеклы для повышения полевой всхожести.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении ресина из воды, корнеплодов и ботвы свеклы
органическим растворителем, очистке экстрактов, хроматографировании
в тонком слое силикагеля, УФ-облучении и проявлении
зон локализации препарата аммиакатом серебра.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 153.
Таблица 153
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌──────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────┐
│ Параметры │ Анализируемый объект │
│ ├────────────┬──────────┬──────────┤
│ │ вода
│корнеплоды│
ботва │
│ │ │ свеклы
│ свеклы │
├──────────────────────────────────────┼────────────┼──────────┼──────────┤
│Диапазон
определяемых концентраций, │0,004
- 0,04│0,02 - 0,2│0,04 - 0,4│
│мг/л,
мг/кг │ │ │ │
│Среднее
значение определения, % │95,5 │88,66 │89,31 │
│Стандартное
отклонение, % │+/-
0,35 │+/- 2,88 │+/- 1,76 │
│Доверительный
интервал среднего │+/-
0,14 │+/- 1,34 │+/- 0,72 │
│значения
определения при n = 25 и │ │ │ │
│p
= 0,95 │ │ │ │
└──────────────────────────────────────┴────────────┴──────────┴──────────┘
Примечание. Предел определения 1 мкг.
Избирательность метода. Определению не
мешают соединения, применяемые совместно с ресином и
близкие по области применения (ТМТД, гидрел, дигидрел, ГМК, хлорхолинхлорид, этрел).
Реактивы и материалы. Ресин
х.ч. Хлороформ ч.д.а.
Нитрат серебра ч.д.а. н-Гексан
ч. Сульфат натрия безводный ч. Аммиак 25-процентный водный ч.д.а.
Ацетон ч.д.а. Этиловый эфир. Бензол ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч.
Бумага индикаторная универсальная (pH 1 - 10). Эфир петролейный. Стандартные растворы ресина
в хлороформе с содержанием соединения 5, 10, 20, 50, 100 мкг/мл. Хранить в
холодильнике не более 2 недель. Проявляющий реагент: 0,85 г нитрата серебра
помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких миллиметрах
дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного раствора аммиака.
Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки
дистиллированной водой. Хранят проявляющий реагент в защищенном от света месте
не более 2 недель.
Приборы, аппаратура, посуда. Ротационный испаритель. Колбы:
грушевидные для
отгонки растворителей; конические
на 500 мл;
мерные на
50, 100 мл. Пластинки для тонкослойной хроматографии
"Силуфол" УФ . Пипетки
на 1, 5,
10 мл. Камера
254
хроматографическая.
Воронки делительные на 500
мл; химические.
Пульверизатор стеклянный.
Механический встряхиватель. Ртутно-
кварцевая лампа
ПРК-4.
Ход анализа. Экстракция. Пробу воды (250
мл) помещают в колбу на 500 мл, добавляют 100 мл хлороформа и экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин. Органический слой отделяют
при помощи делительной воронки в колбу для отгонки растворителя, сливая через
слой безводного сульфата натрия. Воду вновь экстрагируют 100 мл хлороформа в
течение 20 мин. на встряхивателе. Объединенные
экстракты упаривают на роторном испарителе при температуре 60 °C и
количественно переносят на хроматографическую
пластинку при помощи хлороформа - 3 раза по 0,2 мл.
Навеску свеклы (50 г) или ботвы (25 г)
измельчают и помещают в колбу на 250 мл, заливают 30 мл хлороформа и
экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин.
Хлороформ сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки
растворителя. Экстракцию повторяют еще дважды. Объединенный экстракт выпаривают
на роторном испарителе при температуре 60 °C. Затем колбу охлаждают и извлекают
ресин в виде натриевой соли тройной экстракцией
5-процентным раствором едкого натра порциями по 3 мл. Водную
фазу отфильтровывают через фильтр, подкисляют 0,5 М раствором хлороводородной кислоты до pH 5 -
6 и оставляют на 15 мин. Ресин из воды извлекают на встряхивателе,
дважды обрабатывая хлороформом порциями по 10 мл в течение 10 мин. Экстракты
объединяют, промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции и сливают
через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя.
Хлороформ выпаривают на ротационном испарителе при 60 °C. Сухой остаток
количественно, трижды обрабатывая хлороформом по 0,2 мл, переносят на пластинку
"Силуфол".
Условия хроматографирования.
При исследовании воды пластинку с нанесенными экстрактами помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан
- ацетон (1,25:1) и хлороформ - ацетон (16:1). После поднятия фронта
растворителей на 10 - 12 см пластинку вынимают и сушат на воздухе.
При хроматографировании
экстрактов из корнеплодов свеклы пластинки хроматографируют
ступенчатым способом в двух подвижных фазах: 1 - бензол, 2 - гексан - ацетон (1,25:1). В первой камере пластинку
оставляют на 1 ч. После полного испарения остатков бензола проводят разделение
во второй камере, поднимая растворитель на 10 - 12 см. Затем пластинку вынимают
и сушат на воздухе.
Исследуя ботву свеклы, пластинку
помещают в камеру с системой
растворителей петролейный эфир - этиловый эфир (9:1) и поднимают
подвижную фазу
на 10 - 12
см. Удалив с пластинки растворитель
первой камеры,
ее помещают в камеру с подвижной фазой гексан -
ацетон (1,25:1)
и поднимают фронт на 10 - 12 см. Затем пластинку
вынимают и сушат
на воздухе. После хроматографирования
пластинку
подвергают УФ-облучению в
течение 60 мин.
Затем обрабатывают
раствором аммиаката
серебра и вновь помещают под УФ-лампу
на 5
мин. Зоны
локализации ресина проявляются в виде
темно-коричневых
пятен на
светло-сером фоне с величиной R 0,66 +/-
0,02.
f
Обработка
результатов анализа. Количество препарата в пробе
(X, мг/л
или мг/кг) определяют сравнением площади пятна проб и
стандартных
растворов по формуле:
AS
2
X = ---,
PS
1
где:
A -
количество ресина в
пятне стандартного раствора
(в
диапазоне линейности), мкг;
P - количество анализируемой пробы, мл или
г;
S , S
- площади пятен соответственно стандартного раствора и
1
2
пробы, кв. мм.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать правила безопасности при работе с органическими растворителями и
токсичными веществами.