Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4380-87
УНИФИЦИРОВАННЫЙ МЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТКОВ ПЕСТИЦИДОВ
ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ПИЩЕВЫХ РАЦИОНАХ
Унифицированный метод предназначен для
определения пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) в пищевых
рационах. Основу его составляет схема, которая позволяет проводить определение
пестицидов названных групп из одной пробы (рис. 18).
┌───────────────────────────────────────┐
│Гомогенизированная
навеска рациона 60 г│
└──────────────────┬────────────────────┘
│
подкислить до pH 3
\/
┌───────────────────────────────────────┐
│ Экстракция
органическим растворителем │
│(гексан
- ацетон, 1:2) общий V = 300 мл│
└──────────────────┬────────────────────┘
┌──────────────────────────┼──────────────────────────────┐
\/ \/ \/
┌────────────────┐ ┌───────────────────┐ ┌──────────────────┐
│ Определение
│ │ Определение ХОП │ │ Определение ФОП │
│
2,4-Д и ТХА в │ │ и симм-триазинов │ │в 100 мл экстракта│
│100
мл экстракта│ │в 100
мл экстракта │ └─────────┬────────┘
└────────┬───────┘ └─────────┬─────────┘ │
│ │\ │ │
\/ │ \ │ ┌────────────────┐
│
┌────────┐ │
\ \/ │ Определение
│ │
│ Анализ │ │1 н\
┌─────────────────┐ │ симм-триазинов
│ │
└────────┘ │HCl/-->│Перераспределение├─>│
в солянокислом │ │
│ / └─────────┬───────┘ │слое по
методике│ │
│ / \/ └───────┬────────┘
│
│/ ┌───────────────────┐ \/ │
│ Органический
слой │ ┌────────┐ │
│ упаривают, │
│ Анализ │ │
│растворяют
остаток │ └────────┘ │
│ в 10 мл н-гексана;│ │
│очищают конц. H SO │ \/
│ 2 4│
┌──────────────────────┐
└─────────┬─────────┘ │
Упарить до 5 мл. │
\/ │Анализировать по схеме│
┌───────────────────┐ │
идентификации ФОП │
│ Определение ХОП │
│ хроматоферментным │
│ по методике │
│ методом │
└───────────────────┘ └──────────────────────┘
Рис. 18. Схема определения пестицидов различных
групп
в пищевом рационе
В основу унифицированной схемы положены
методики определения пестицидов указанных групп, утвержденные Минздравом СССР и
опубликованные в сборниках "Методические указания по определению
пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде".
Принцип метода. Метод
основан на извлечении пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) из единой пробы
трехфазной смесью растворителей (водный раствор HCl, гексан, ацетон), разделении экстракта на три равные части,
в одной из которых определяют производные 2,4-Д и ТХА, во второй - ХОП и симм-триазины, в третьей - ФОП в соответствии с
представленной схемой. Для аналитического определения используют методы
ГЖХ и ТСХ.
Ход анализа. Экстракция. Доводят pH гомогенизированной смеси рациона (60 г) до pH 3 1 M водным раствором хлороводородной
кислоты в стакане на 0,5 л, приливают 150 мл смеси гексан
- ацетон (1:2), перемешивают электромешалкой 30 мин.
Содержимое стакана переносят в центрифужный стакан,
центрифугируют и сливают растворитель. Вместо центрифугирования можно
фильтровать с отсасыванием в колбу Бунзена через плотный фильтр. Остаток
промывают двумя порциями смеси гексана с ацетоном по
75 мл, каждый раз центрифугируют и объединяют. Общий объем экстракта 300 мл.
Делят экстракт на три равные части, одну из которых используют для определения
производных 2,4-Д и трихлорацетата натрия; вторую -
для определения ХОП и триазинов; третью - для
определения ФОП.
Определение 2,4-Д и ТХА. Экстракт 100 мл
(1/3 часть) помещают в круглодонную колбу на 1 л, прибавляют 8 мл
концентрированной соляной кислоты, упаривают ацетон и гексан
на ротационном испарителе и затем выдерживают 1 ч на кипящей водяной бане с
обратным холодильником.
После охлаждения содержимое колбы
переносят дистиллированной водой (3 x 30 мл) в делительную воронку и трижды
экстрагируют диэтиловым эфиром (50, 30 и 30 мл).
Объединенный эфирный экстракт промывают небольшими порциями дистиллированной
воды (15 - 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод и затем трижды
экстрагируют тремя порциями 0,5 М водного раствора бикарбоната натрия по 20 мл.
Объединенный водный экстракт дважды промывают хлороформом порциями по 20 мл и
20 мл н-гексана, отбрасывают эти растворители,
подкисляют концентрированной хлороводородной кислотой
до pH 1 и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (50, 30 и 30 мл). Объединенный эфирный
экстракт промывают дистиллированной водой (порциями по 15 - 20 мл) до
нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном
испарителе до 2 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой остаток метилируют диметилсульфатом и
определяют ТХА [1].
Для определения 2,4-Д растворяют в 2 - 3
мл н-гексана продукт метилирования
и переносят этот раствор на стеклянный фильтр N 4 (d = 2,5 см) с 1 г силикагеля.
Промывают силикагель 15 мл н-гексана и элюируют метиловый эфир 2,4-Д 25 мл бензола. Бензольный элюат упаривают на
ротационном испарителе до 1 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой
остаток растворяют в 1 мл н-гексана и определяют
метиловый эфир 2,4-Д [2].
Определение ХОП и симм-триазинов.
Экстракт 100 мл (1/3 часть) помещают в делительную воронку на 500 мл,
прибавляют 50 мл 1 н водного раствора HCl, осторожно
встряхивают и дают слоям разделиться. Сливают в другую делительную воронку на 500
мл нижний водный слой, а из органического экстрагируют еще дважды по 25 мл 1 н
водным раствором HCl. Водные экстракты объединяют и
определяют в этой фазе симм-триазины.
Органическую фазу сливают через слой безводного Na SO в колбу
2 4
для отгонки
растворителей и досуха
упаривают на ротационном
вакуумном испарителе при
температуре бани не более 45 °C. Сухой
остаток из
колбы смывают 10 - 15 мл
н-гексана в делительную
воронку на 50 мл,
чистят концентрированной серной кислотой и
анализируют по
методике определения ХОП в
продуктах питания и
объектах окружающей среды [3 - 5].
Водную фазу подщелачивают 200 мл 1 н
едкого натра до pH 7 - 8, прибавляют 15 мл
насыщенного раствора хлорида натрия и 50 мл дистиллированной воды и трижды
экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Экстракт объединяют, высушивают над
безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха при
температуре бани 50 °C. Колбу смывают 1 мл смеси гексан
- ацетон (1:1) и аликвоту вводят в хроматограф либо
эфиром наносят пробу на пластинку и анализируют ТСХ. Степень определения триазинов при использовании схемы - 70 - 75%. Условия ГЖХ и
ТСХ определения триазинов проводят по [6].
Определение ФОП. Экстракт 100 мл (1/3
часть) переносят в колбу для отгонки растворителей, фильтруя через безводный
сульфат натрия. Растворитель отгоняют на вакуумном ротационном испарителе при
температуре бани не более 40 °C до 0,5 мл. Экстракт переносят в мерную пробирку,
ополаскивая колбу небольшими порциями ацетона. Объем в пробирке доводят
ацетоном точно до 5 мл, перемешивают и анализируют хроматоферментным
методом [7].
Количественную оценку и расчет
результатов анализа проводят методом сравнения с идентифицированным стандартом,
как описано в методике.
На втором этапе исследования вместо хроматоферментного определения (или параллельно) можно
применить соответствующий метод ГЖХ или ТСХ (см. методические указания) при
использовании в качестве стандарта пестицида, идентифицированного на первом
этапе исследования.
В основу разработки положены:
1. Методические указания по определению трихлорацетата натрия и трихлоруксусной кислоты в воде,
почве и растительном материале газожидкостной хроматографией // Методы
определения микроколичеств пестицидов в продуктах
питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1983. С. 212 - 214.
2. Методические указания по определению
остаточных количеств 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) в воде, почве,
фураже, продуктах питания растительного и животного происхождения, в
биологическом материале хроматографическими методами.
N 2830-83 от 24.08.83.
3. Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и
других ядохимикатов в воде, почве, продуктах питания, кормах и биологических
средах хроматографией в тонком слое // Методы определения микроколичеств
пестицидов. М.: Колос, 1977. С. 9 - 17.
4. Определение альдрина,
гексахлорана, гептахлора, ДДТ, ДДД, ДДЭ в воде,
овощах, фруктах и биологическом материале газожидкостной хроматографией. М.:
Колос, 1977. С. 17 - 20.
5. Методические указания по определению
хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных
изделиях хроматографией в тонком слое. N 2142-80 от 28.01.80 (см. [1], с. 34 -
45).
6. Методические указания по определению
остаточных количеств симм-триазинов в зерне, фруктах,
овощах, почве, воде хроматографическими методами (см.
[1], с. 215 - 223).
7. Методические указания по определению
фосфорорганических пестицидов в растительных продуктах и биосубстратах
энзимохроматографическим методом. N 2086-79 от
20.10.79 (см. там же, с. 122 - 127).