Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4382-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЕНОМИЛА И БМК В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ И ВОДЕ
ПРИРОДНЫХ ВОДОЕМОВ ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны В.Н. Кавецким, Г.Г. Андриенко (УкрНИИЗР).
Краткая характеристика препарата дана в
Методических указаниях N 1112-73.
Принцип метода. Методика полярографического определения беномила
и БМК, основанная на окислении БМК или продукта его разложения
2-аминобензимидазола (2-АБ) на угольном электроде, осуществляется двумя путями:
БМК из анализируемой пробы извлекают этилацетатом, очищают экстракт
перераспределением в солянокислую среду, а затем, после подщелачивания, - в
этилацетат. Определяют БМК полярографическим методом;
БМК из пробы извлекают этилацетатом, очищают экстракт перераспределением в
соляную кислоту, а затем проводят щелочной гидролиз БМК до 2-АБ. Из экстракта
2-АБ извлекают этилацетатом и полярографируют. Полярографическое окисление БМК и 2-АБ проводят на фоне
буферного раствора натрия тетраборатного кислого с pH 9,18.
Метрологическая характеристика метода.
Метрологические данные приведены в таблице 120. Потенциалы окисления БМК 0,65 В; 2-АБ 0,35 В.
Таблица 120
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌────────────────────┬────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────┐
│
Параметры │ Полярографическое определение БМК │
Полярографическое │
│ │ │ определение БМК по 2-АБ │
│ ├────────────┬───────────┬───────────┼────────────┬──────────┬──────────┤
│ │ вода
│ почва │ растения │
вода │ почва
│ растения │
├────────────────────┼────────────┼───────────┼───────────┼────────────┼──────────┼──────────┤
│Диапазон определяе- │0,004
- 0,02│0,02 - 1,00│0,02 - 1,00│0,002 - 0,01│0,01 - 0,5│0,01
- 0,5│
│мых концентраций, │ │ │ │ │ │ │
│мг/кг, мг/л │ │ │ │ │ │ │
│Предел обнаружения, │0,004 │0,02 │0,02 │0,002 │0,01 │0,01 │
│мкг в 1 мл фонового │ │ │ │ │ │ │
│раствора │ │ │ │ │ │ │
│Предел определения, │0,04 │0,02 │0,02 │0,02 │0,01 │0,01 │
│мг/кг, мг/л │ │ │ │ │ │ │
│Среднее значение │83 │70 │78 │80 │72 │76 │
│определения стан- │ │ │ │ │ │ │
│дартных количеств, %│ │ │ │ │ │ │
│Стандартное │+/- 3,5 │+/- 3,46 │+/- 7,4 │+/- 8,0 │+/- 3,86 │+/- 5,5 │
│отклонение, % │ │ │ │ │ │ │
│Доверительный │+/- 6,5 │+/- 6,1 │+/- 9,0 │+/- 10,2 │+/- 4,8 │+/- 6,8 │
│интервал среднего │ │ │ │ │ │ │
│(p = 0,95, n = 5), %│ │ │ │ │ │ │
└────────────────────┴────────────┴───────────┴───────────┴────────────┴──────────┴──────────┘
Реактивы и растворы.
н-Гексан х.ч.
Этиловый спирт ректиф., 96-процентный. Этиловый эфир
уксусной кислоты. Безводный сульфат натрия ч. Гидроксид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч., 0,1 н раствор. Тетраборнокислый
натрий, буферный раствор, pH 9,18. Парафин ч.
Полиэтилен. БМК, 50-процентный препарат. Дистиллированная вода. Стандартный
раствор БМК в спирте с содержанием 100 мкг/мл. Стандартный раствор 2-АБ в
спирте с содержанием 100 мкг/мл. Срок хранения стандартных растворов 1 мес.
Приборы и посуда. Аппарат для
встряхивания. Ротационный испаритель. Колбы: конические со шлифом на 250 мл;
круглодонные на 250 и 500 мл; мерные на 100 мл. Воронки делительные на 500 мл;
стеклянные диаметром 40 мм, вместимостью 150 мл. Пипетки на 0,1 мл. Цилиндры
мерные на 50 и 100 мл. Мерные пробирки на 5 мл. Полярограф ППТ-1. Полярографическая ячейка 5МБ 887.001. Электрод сравнения
хлорсеребряный 5М5 519.004. Графитовый электрод спектральной чистоты. Магнитная
мешалка.
Методика приготовления графитового
электрода. В тигле расплавляют 10 - 20 г парафина и в расплав добавляют порошок
полиэтилена (в количестве 20 - 30% относительно парафина). Каждую последующую
порцию полиэтилена добавляют после полного растворения предыдущей.
Затем в эту смесь погружают графитовый стержень диаметром до 5 мм, длиной до
100 мм, предварительно выдержанный в н-гексане. Стержень
нагревается и выдерживается в расплаве в течение 6 - 8 ч. Затем
импрегнированный графитовый стержень вынимают из тигля и после шлифования торца
стержня электрод готов к работе. Перед каждым опытом рекомендуются механическое
полирование поверхности торца графитового электрода и периодическая промывка
электрода этиловым спиртом.
Ход анализа. Экстракция. Пробу
исследуемой воды (250 мл) вносят в делительную воронку, приливают 3 мл NaOH и четырежды экстрагируют БМК этилацетатом в течение 5
мин. порциями по 100 мл. Этилацетат сушат через бумажный фильтр с 5 г
безводного сернокислого натрия и собирают в круглодонную колбу. Из колбы
растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Остаток переносят в
откалиброванную пробирку, этилацетат упаривают досуха и остаток растворяют в
0,3 мл этилового спирта. Определение проводят полярографическим
методом.
Навеску (50 г) образца яблок, огурцов,
арбузов, сои, почвы измельчают, заливают 100 мл этилацетата и экстрагируют при
энергичном встряхивании в течение 1 ч. Полученный экстракт фильтруют в
круглодонную колбу. Эту операцию повторяют еще дважды, встряхивают каждый раз
по 30 мин. В объединенный экстракт приливают 25 мл 0,1 н хлороводородной
кислоты и ставят отгонять этилацетат на водяной бане. Оставшийся раствор
переносят через воронку с фильтром в делительную воронку на 250 мл. Колбу
обмывают 2 - 3 раза небольшими порциями 0,1 н хлороводородной
кислоты, их объединяют с раствором в делительной воронке. Объем полученного
раствора приблизительно должен быть 35 мл. Затем солянокислый раствор трижды
промывают н-гексаном порциями по 50 мл. Гексановый слой отбрасывают. К солянокислому раствору
прибавляют 3 - 4 мл 6 н гидроксида натрия и 4 раза экстрагируют БМК из
раствора, энергично встряхивая в течение 3 мин. свежеперегнанным этилацетатом
порциями по 75 мл. Экстракт сушат через бумажный фильтр с 5 г безводного
сернокислого натрия и переносят в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на
ротационном испарителе. Остаток переносят в откалиброванную пробирку и
упаривают досуха, а затем растворяют в 0,3 мл спирта. Аликвотную часть раствора
вносят в полярографическую ячейку и снимают полярограмму.
Определение БМК по 2-АБ. Навеску (50 г)
образца яблок, огурцов, арбуза, растений сои, зерна пшеницы, почвы измельчают и
заливают 100 мл этилацетата и экстрагируют при энергичном встряхивании в
течение 60 мин. Экстракт фильтруют в круглодонную колбу. Эту операцию повторяют
еще дважды, встряхивая каждый раз 30 мин. Все порции экстракта фильтруют в
круглодонную колбу. В эту же колбу приливают 25 мл 0,1 н раствора хлороводородной кислоты и ставят отгонять этилацетат на
водяной бане. Оставшийся кислый раствор переносят через воронку с фильтром в
делительную воронку на 250 мл. Колбу обмывают 2 - 3 раза небольшими порциями
подкисленной воды и присоединяют к раствору в делительной воронке. Весь объем
раствора должен быть приблизительно 35 мл. Затем солянокислый раствор трижды
промывают н-гексаном порциями по 50 мл. Гексановый слой отбрасывают. Солянокислый раствор
количественно переносят в стакан и добавляют 15 мл 6 н раствора гидроксида
натрия и кипятят в течение 15 мин. Чтобы предотвратить бурление раствора, в
стакан бросают стеклянные палочки. Затем раствор охлаждают, переносят в
делительную воронку и экстрагируют 2-АБ этилацетатом, энергично встряхивая в
течение 3 - 5 мин. Экстракцию проводят 4 раза порциями по 70 мл и собирают
экстракт в круглодонную колбу, осушив его предварительно безводным сульфатом
натрия. Этилацетат отгоняют на водяной бане при температуре 40 °C под вакуумом.
Остаток переносят в мерную пробирку, упаривают досуха и растворяют в 0,3 мл
спирта. Определение 2-АБ проводят полярографическим
методом.
Полярографическое определение БМК. Полярографическое
определение БМК проводят на автоматическом полярографе ППТ-1 в
постоянно-токовом режиме. Анодом служит графитовый электрод, пропитанный смесью
парафина и полиэтилена, катодом - хлорсеребряный электрод сравнения. Для
построения градуировочного графика в полярографическую ячейку вносят 5 мл фонового раствора тетраборнокислого натрия (pH
9,18). Полярограмму фонового раствора снимают при
диапазоне тока прибора, равного 5 А, скорости
поляризации 10 мВ/с. Затем снимают полярограммы
различных концентраций стандартного раствора БМК (рис. 10 - не приводится) и
строят градуировочный график зависимости высоты волны
от концентрации. Для снятия полярограмм исследуемого
раствора тщательно промывают ячейку и электроды дистиллированной водой. В
фоновый раствор вносят аликвотную часть исследуемого экстракта (при
необходимости можно объем остатка упарить до 0,2 мл и весь внести в ячейку) и
снимают полярограмму. Измеряют высоту волны исследуемого
раствора и по калибровочному графику находят концентрацию БМК. Потенциал
окисления полуволны БМК равен +0,65 В.
Полярографическое определение БМК по 2-АБ. Полярографическое
определение 2-АБ проводят аналогично определению БМК. Снимают полярограммы стандартных растворов 2-АБ, строят градуировочный график. Потенциал полуволны окисления 2-АБ равен +0,35 В. Снимают полярограммы
исследуемого раствора и по градуировочному графику
находят концентрацию 2-АБ.
Обработка результатов. Концентрацию
препарата БМК (C, мг/кг) рассчитывают по формуле:
AV
1
C = ---,
PV
2
где:
A - найденная по градуировочному
графику концентрации БМК, мкг;
V -
объем остатка, мл;
1
P - навеска образца, г;
V
- объем исследуемого
раствора, внесенного в полярографическую
2
ячейку, мл.
Содержание БМК (C, мг/кг) находят по
формуле:
1,44AV
1
С = -------,
PV
2
где:
1,44 - коэффициент пересчета 2-АБ на БМК;
A - найденное количество 2-АБ, мкг;
V -
объем остатка, мл;
1
V
- объем исследуемого
вещества, внесенного в полярографическую
2
ячейку, мл;
P - навеска образца, г.
Требования безопасности. Необходимо
выполнять все требования техники безопасности при работе с токсичными
веществами, растворителями, кислотами и щелочами.