Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
8 июля 1987 г. N 4335-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭТИЛЕНБИСДИТИОКАРБАМАТОВ
(ЦИНЕБ, МАНЕБ, ПОЛИКАРБАЦИН, МАРЦИН, КУПРАЦИН-1)
И ПРОДУКТА ИХ ПРЕВРАЩЕНИЯ (ЭТИЛЕНТИОМОЧЕВИНЫ) В ВОДЕ
И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1. Краткая
характеристика препаратов приведена в таблице 1
Таблица 1
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДИТИОКАРБАМАТОВ
┌───┬─────────────┬───────────────────────────┬────────┬──────┬───────────────────┐
│ N │
Препарат, │ Структурная формула │
Мол. │ Т │
Растворимость │
│п/п│хим. название│ │ масса │
пл │ │
├───┼─────────────┼───────────────────────────┼────────┼──────┼───────────────────┤
│1. │Цинеб │ CH -NHC-S │275,75 │140 - │В воде 0,01 г/л при│
│ │(этилен-1,2-
│ │ 2 ││ \Zn
│ │160 °С│20 °С, хорошо раст-│
│ │бисдитиокар-
│ │ S /
│ │ │ворим в разбавлен- │
│ │бамат цинка) │ CH -NH-C-S │ │ │ной щелочи │
│ │ │ 2
││ │ │ │ │
│ │ │ S │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│2. │Манеб │ CH -NH-CSS │(265,3) │100 │Плохо растворим в │
│ │(II-II-эти- │
│ 2 \Mn │ х│ │воде │
│ │ленбисдитио-
│ │ / │ │ │ │
│ │карбамат │ CH -NH-CSS │ │ │ │
│ │марганца) │ 2 │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│ │ │ S
S │ │ │ │
│ │ │ ││ ││ │ │ │ │
│3. │Поликарбацин │(-CH
-NH-C-S-S-O-NH-CH -) │- │- │Растворим в разбав-│
│ │(комплексное │ 2 2 n │ │ │ленной щелочи, │
│ │соединение │ │ │ │диметилформамиде │
│ │полиэтилен- │
S S │ │ │ │
│ │тиурамдисуль-│ ││ ││ │ │ │ │
│ │фида
и эти- │(-CH -NHC-S-Zn-S-CNH-CH -)
│ │ │ │
│ │ленбисдитио-
│ 2 2 m│ │ │ │
│ │карбамата │ │ │ │ │
│ │цинка
1:3) │(n:m = 1:3) │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│4. │Купрацин-1 │- │- │- │Растворим в разбав-│
│ │(комплексное │ │ │ │ленной щелочи, │
│ │соединение │ │ │ │диметилформамиде │
│ │этиленбис- │ │ │ │ │
│ │дитиокарбама-│ │ │ │
│
│ │тов меди и │ │ │ │ │
│ │цинка,
1:9) │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│5. │Марцин │- │- │- │Растворим в разбав-│
│ │(комплексное │ │ │ │ленной щелочи, │
│ │соединение │ │ │ │диметилформамиде │
│ │этиленбис- │ │ │ │ │
│ │дитиокарбама-│ │ │ │ │
│ │тов марганца │ │ │ │ │
│ │и
цинка, 1:7)│
│ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│ │Продукты │ │ │ │ │
│ │превращения │ │ │ │ │
│ │этиленбис- │ │ │ │ │
│ │дитиокарбама-│ │ │ │ │
│ │тов │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │
│ │Этилентиомо-
│ CH -NH │102 │- │Плохо растворим в │
│ │чевина │ │ 2 \O=S
│ │ │воде, хорошо в аце-│
│ │ │ │ / │ │ │тоне, хлороформе, а│
│ │ │ CH -NH │ │ │еще лучше - в раз- │
│ │ │ 2 │ │ │бавленных щелочах │
└───┴─────────────┴───────────────────────────┴────────┴──────┴───────────────────┘
2. Методика
определения этиленбисдитиокарбаматов
и продукта их превращения (этилентиомочевины)
в воде и растительном материале
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на хроматографировании
исследуемых соединений в слое сорбента (силикагель) после извлечения
органическим растворителем в виде комплексного соединения с ионами кобальта.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций 0,01 -
0,5 мг/кг (мг/л)
┌────────────┬──────────┬────────────┬───────────┬───────────────┐
│ Препарат
│ Объект │
Среднее │Стандартное│
Доверительный │
│ │ │ значение
│отклонение │
интервал │
│ │ │определения,│ │ среднего:
│
│ │ │ %
│ │n = 5, р = 0,95│
├────────────┼──────────┼────────────┼───────────┼───────────────┤
│Поликарбацин│Вода │80 │+/- 3,5 │80 +/- 4,5 │
│ │Растения │70 │+/- 6,9 │70 +/- 7,9 │
│Манеб │Вода │80 │+/- 5,0 │80 +/- 5,8 │
│ │Растения │70 │+/- 0,5 │70 +/- 7,8 │
└────────────┴──────────┴────────────┴───────────┴───────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Определению не мешают хлор,
фосфорорганические, азотсодержащие пестициды.
2.3. Реактивы,
растворы, приборы
2.3.1. Реактивы, растворы
Хлороформ, хч, ТУ-6-09-788-76
Гидрат окиси натрия, 1-процентный водный
раствор
Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76
Кобальт хлористый, хч, ГОСТ 4525-77
Бензол, хч, ГОСТ 5955-75
Диметилформамид, ч, ГОСТ 20258-74
Серная кислота, чда, ГОСТ 4204-77
Йод, 3 - 5-процентный водный раствор
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-84
Йодид калия, чда, ГОСТ 4232-74
Нитрат висмута основной, чда
Пластинки "Силуфол" (ЧССР)
Проявляющие реактивы: N 1 - 3 -
5-процентный водный раствор йода; N 2 - реактив Драгендорфа.
Приготовление реактива: основной раствор:
А) 3,85 г основного нитрата висмута растворяют в 55 мл дистиллированной воды и
прибавляют 25 мл ледяной уксусной кислоты; Б) 3 г йодида калия растворяют в 20
мл дистиллированной воды. Растворы А и Б сливают
вместе. Срок хранения до 6 мес. в темном месте.
Рабочий раствор для обработки пластинок.
К 7 мл основного раствора прибавляют 50 мл дистиллированной воды и 10 мл
ледяной уксусной кислоты. Срок хранения в темном месте до 10 дней.
Стандартный раствор
этиленбисдитиокарбамата готовят в 1-процентном едком натре (100 мкг/мл).
Очистку препаратов проводить нельзя в связи с нерастворимостью их в обычно
применяемых органических растворителях. При взятии навесок для приготовления
стандартов производят перерасчет на 100-процентный препарат.
10 мл стандартного раствора препарата в
1-процентном едком натре нейтрализуют раствором серной кислоты, переносят в
делительную воронку, прибавляют через сутки 0,1 мл 0,5-процентного раствора
хлористого кобальта и проводят экстракцию хлороформом или бензолом, дважды
встряхивая по 10 мин. с 10 мл растворителя в каждой порции. Растворитель
сливают через слой безводного сульфата натрия, количественно переносят в прибор
для отгонки растворителей и отгоняют до первоначального объема (10 мл).
Полученный раствор наносят в качестве стандарта на пластинку. 1 мл раствора
содержит 100 мкг/мл препарата.
Стандартный раствор этилентиомочевины
готовят в хлороформе (100 мкг/мл).
2.3.2. Приборы и посуда
Посуда мерная по ГОСТ 1770-74
Колбы конические н/ш емкостью 250 мл
Цилиндры мерные
Воронки химические, d = 7 - 9 см
Приборы для отгонки растворителей (с
конусообразными колбами емкостью 25 мл)
Колбы мерные (50, 100 мл)
Пипетки (1, 5, 10 мл)
Микропипетки для нанесения стандартных
растворов
Пипетки капиллярные для нанесения проб
Камера для хроматографирования
Стеклянный пульверизатор для опрыскивания
пластинок
Водяная баня
Аппарат для встряхивания.
2.4. Подготовка
проб к анализу
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб", утвержденными Зам. Главного
государственного санитарного врача СССР N 2051-79.
Отобранные пробы хранят в холодильнике.
Срок хранения 5 - 7 дней после отбора.
2.5. Проведение
определения этиленбисдитиокарбаматов
2.5.1. Экстракция
Вода. К 200 мл исследуемой воды в колбе с
притертой пробкой приливают 200 мл 2-процентного водного раствора едкого натра,
встряхивают 3 - 5 мин. и оставляют на 40 мин., периодически встряхивают.
Щелочной раствор нейтрализуют (по индикаторной универсальной бумаге)
прибавлением разбавленной серной кислоты (1:1) и переносят в делительную
воронку. К нейтральному раствору через сутки прибавляют 0,5 мл 0,5-процентного
раствора хлористого кобальта в диметилформамиде. Образовавшееся комплексное соединение
экстрагируют дважды по 30 мл хлороформом. Объединяют хлороформный экстракт,
сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,2 - 0,3 мл. Остаток
количественно наносят на хроматографическую пластинку.
Растительный материал (яблоки, капуста,
картофель). 50 г пробы измельчают, помещают в коническую колбу на 250 мл,
заливают 100 мл 0,2 н щелочи, экстрагируют в течение 1 часа, экстракцию
повторяют 2 х 50 мл. К объединенному экстракту прибавляют серную кислоту в
соотношении 1:1 до pH 6,7 и оставляют на 1 сутки. Затем к пробе прибавляют 0,5
мл хлористого кобальта в диметилформамиде, хорошо перемешивают. Экстрагируют
комплексное соединение дважды по 30 мл хлороформа. Объединяют хлороформный
слой, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл. Далее
проводят определение методом ТСХ.
2.5.2. Проведение определения
этилентиомочевины
Вода. Из 200 мл исследуемой пробы
экстрагируют препарат дважды по 40 мл хлороформом. Экстракты отделяют,
объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают хлороформ до 0,2 - 0,3
мл. Остаток количественно наносят на пластинку "Силуфол".
Растительный материал. К 25 г пробы
приливают 50 мл хлороформа, встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды.
Раствор фильтруют, сушат хлороформный экстракт безводным сульфатом натрия,
упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл. Далее проводят определение методом ТСХ.
2.5.3. Определение методом ТСХ
Пробу, сконцентрированную до объема 0,2 -
0,3 мл, количественно наносят
на хроматографическую пластинку на расстоянии 2 см от края. Диаметр
пятна
до 1 см. Колбу омывают несколько раз
хлороформом, который наносят в эту же
точку. Рядом
наносят 2, 4, 6, 10 мкг стандартного раствора препарата.
Пластинку первоначально хроматографируют в
системе CCl -
бутанол
4
(100:0,75). После
испарения растворителя хроматографируют вторично
в
системе бензол - ацетонитрил (9:1). После высушивания
на воздухе пластинку
обрабатывают
проявляющим реактивом.
При
обработке пластинки раствором йода (реактив N 1) исходные вещества
и
этилентиомочевина проявляются в виде пятен белого цвета на синем фоне.
При
обработке пластинки проявляющим
реагентом N 2 Э
(реактив
Драгендорфа) препараты
проявляются в виде пятна кирпично-оранжевого цвета.
Величина В составляет: этиленбисдитиокарбаматы -
0,65;
f
этилентиомочевина
- 0,15.
2.6. Количественное
определение
Содержание А
препарата в пробе вычисляют по формуле:
А
Х = -,
Р
где:
Х - содержание препарата в пробе, мг/кг
(мл/л);
А - количество препарата, найденное путем
сравнения размера и интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;
Р - навеска анализируемой пробы, г (мл).
2.7. Требования
безопасности
Выполняются в соответствии с
"Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лаборатории
(отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ СССР" N 2455-81 от
20.10.81.
3. Разработчики
ВНИИГИНТОКС.