Утверждены
Минздравом СССР
8 июля 1987 г. N 4349-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХОСТАКВИКА В ОВОЩАХ, ФРУКТАХ,
БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ
МЕТОДАМИ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Д.Б. Гиренко, Л.Е. Морару, М.А. Клисенко
(ВНИИГИНТОКС).
Хостаквик - О,О-диметил-О-(6-хлорбицикло[3.2.0]гептадиен-1,5-ил)фосфат.
Жидкость с т.
кип. 90 - 91 °C при 2,7 Па. Давление паров при 25 °C 0,22 Па.
Хорошо растворим
в н-гексане, метаноле, ксилоле (при 25 °C до 1000 г/л),
хуже растворим
в н-гексане (130 г/л).
Брутто-формула C H ClO P.
9 12 4
Молекулярная масса
250,5. Общепринятое название - гептенофос. ДСД
- 0,003
мг/кг, МДУ в
огурцах, томатах - 0,1 мг/кг, в яблоках - 0,1 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на
определении хостаквика ГЖХ и ТСХ после извлечения его
из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке от коэкстрактивных
веществ в системе жидкость - жидкость.
Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг. Предел определения 0,05
мг/кг (мг/л). Остальные параметры даны в таблице 43.
Таблица 43
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОСТАКВИКА
┌──────────────┬───────────────────────┬─────────────────────────┐
│Анализируемый
│ Среднее значение │
Доверительный интервал │
│ объект
│ определения, % │ среднего, % │
│ ├───────────┬───────────┼────────────┬────────────┤
│ │ ГЖХ
│ ТСХ │
ГЖХ │ ТСХ
│
├──────────────┼───────────┼───────────┼────────────┼────────────┤
│Картофель │69 │65 │+/- 3,9 │+/- 6,2 │
│Свекла │68 │67 │+/- 2,6 │+/- 3,9 │
│Огурцы │68 │72 │+/- 3,45 │+/- 3,9 │
│Томаты │67 │64 │+/- 4,1 │+/- 5,2 │
│Яблоки │70 │68 │+/-
2,4 │+/- 3,9 │
│Мясо │65 │64 │+/- 2,2 │+/- 5,2 │
│Печень │65 │64 │+/- 3,9 │+/- 5,2 │
│Вода │72 │73 │+/- 3,0 │+/- 3,9 │
│Почва │68 │62 │+/- 2,6 │+/- 6,1 │
└──────────────┴───────────┴───────────┴────────────┴────────────┘
Реактивы
и растворы. Ацетон ч.
Бензол ч. Гексан
ч. Аммиак водный
25-процентный, ч.д.а. Нитрат серебра. Хлороводородная
кислота ч. Сульфат
натрия безводный
ч. Хлороформ ч. Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5%
SE-30.
Пластинки "Силуфол". Азот особой чистоты, содержание O
не более 0,003%.
2
Водород. Воздух.
Подвижная фаза для ТСХ: 1 - бензол; 2 - гексан-ацетон (2:1).
Для приготовления проявляющего реагента
(водно-ацетонового раствора нитрата серебра) навеску нитрата серебра (0,5 г)
растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл аммиака (плотность 0,9
г/куб. см) и доводят объем до 100 мл ацетоном. Срок хранения в холодильнике 5 -
6 дней.
Основной стандартный раствор хостаквика, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят
растворением 10 мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Хранят в
холодильнике не дольше 2 мес.
Приборы и посуда. Газовый хроматограф с
ПФД по фосфору (типа "Цвет-164" или др.). Ротационный вакуумный
испаритель для отгонки растворителей. Лампа ртутно-кварцевая. Посуда мерная.
Воронки делительные вместимостью 500 и 1000 мл. Колбы: конические на 100 мл;
грушевидные для отгонки растворителей. Камера хроматографическая.
Пульверизатор стеклянный. Микрошприц на 10 мкл.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. Измельченную пробу растительного материала (25 г) заливают 50 мл
смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют
дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют
300 мл дистиллированной подкисленной HCl воды до pH 2 - 3 и дважды экстрагируют хостаквик
хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат
безводным сульфатом натрия, досуха упаривают на ротационном испарителе при
температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе
растворяют в 1 мл ацетона или гексана и хроматографируют.
Пробу воды (500 мл) помещают в
делительную воронку, подкисляют 0,1 н хлороводородной
кислотой до pH 2 - 3, хорошо перемешивают и
экстрагируют хлороформом трижды порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через
слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном
испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе.
Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона или гексана
и хроматографируют.
Пробу почвы (20 г) помещают в коническую
колбу, заливают 50 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч.
Экстракцию повторяют дважды, экстракты фильтруют, объединяют, переносят в
делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 2
- 3, и дважды экстрагируют хостаквик хлороформом
порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным
сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, досуха концентрируют на
воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
Пробу биологического материала массой 10
г (мышцы, печень, почки и др.) измельчают и заливают 30 мл смеси ацетон-вода
(5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор
фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 500 мл подкисленной
до pH 2 - 3 дистиллированной воды и экстрагируют
хлороформом дважды порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель
сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, а затем
досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона (гексана) и хроматографируют.
Идентификация и количественное определение хостаквика. При определении
методом ГЖХ
используют носитель хроматон N-AW
с 5% SE-30.
Колонка
стеклянная
длиной 1 м,
диаметром 3 мм. Расход газа-носителя
(азота) 50
мл/мин.;
водорода 65 +/-
5 мл/мин.; воздуха
120 +/- 5 мл/мин. Шкала
-8
электрометра 2 x
10 А. Температура (°C): колонки - 180,
испарителя - 220.
Вводимый объем
4 мкл. Линейный
диапазон детектирования 0,6 -
50 нг.
Минимально
детектируемое количество 0,6 нг. Время удерживания
при указанных
условиях 45 с.
При
определении методом ТСХ
пробу, сконцентрированную до 0,3
мл,
количественно
переносят на пластинку с сорбентом. Параллельно наносят серию
стандартных растворов
с содержанием препарата 2; 5 и 10 мкг хостаквика.
Хроматографируют
первоначально в бензоле, просушивают, а затем в системе
гексан-ацетон
(2:1). После высушивания пластинку
обрабатывают
водно-ацетоновым раствором
нитрата серебра и
подвергают УФ-облучению в
течение 30
мин. Хостаквик проявляется в виде пятен
черного цвета на белом
фоне (R 0,5 +/-
0,05).
f
Обработка результатов анализа. При
использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения
рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества
стандартного вещества (при условии, что пики близки по величине и определение
ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как
произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты. Расчет
количества препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) ведут по формуле:
C
V S
ст 2
X = ------,
S V P
ст 1
где:
C -
содержание препарата во введенном в хроматограф стандарте, нг;
ст
S - площадь пика исследуемого раствора, кв.
мм;
S
- площадь пика
стандартного раствора препарата,
введенного в
ст
хроматограф, кв.
мм;
V -
объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
1
V -
общий объем экстракта после упаривания, мл;
2
P - навеска анализируемой пробы, г.
При
определении методом ТСХ
содержание хостаквика в исследуемой пробе
(X, мг/кг или
мг/л) вычисляют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
P - навеска или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими
растворителями и токсичными веществами.