Утверждены
Минздравом СССР
14 июля 1988 г. N 4648-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭТОКСИЛИНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ
МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны В.В. Тарасовым,
Ш.С. Бахритдиновым (УзНИИСГиПЗ);
Т.Т. Дустмухамедовым (ИХ АН УзССР).
Краткая характеристика препарата.
Активное вещество этоксилина - N-бета-этоксиэтилхлорацетанилид. Бесцветные кристаллы с т. пл. 42
- 43 °C, со временем темнеющие. Т. кип. 132 - 133 °C при 1599,9 Па, хорошо
растворим в органических растворителях - бензоле, ацетоне, спирте, эфире, хуже
- в растительном масле.
Этоксилин предназначен для припосевного
внесения в почву в виде 65-процентного концентрата эмульсии против однолетних
сорняков на картофеле, кукурузе.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении этоксилина из анализируемого объекта
бензолом, очистке экстракта на колонке с активированным углем или оксидом
алюминия с последующим определением методом ГЖХ с ДЭЗ.
Избирательность метода. Примеси,
присутствующие в техническом препарате, определению не мешают.
Метрологическая характеристика метода.
Минимально детектируемое
-4
количество 0,5 x 10
мкг. Нижний предел определения: в
воде - 1,7 мг/л,
почве - 7,0
мг/кг, растительном материале - 14 мг/кг. Среднее
значение
определения в
воде - 93,4%, почве - 81,5, растениях -
75,6%. Доверительный
интервал среднего
(при p = 0,95 и n = 10) в воде - 4,86%, почве - 6,12,
растениях - 7,16%.
Реактивы и растворы. Бензол
х.ч. и ч.д.а. Карбонат
натрия, ч.д.а., насыщенный раствор. Хлорид
натрия ч.д.а. Гидроксид калия (особой чистоты).
Универсальный индикатор. Ацетон ч.д.а. Оксид алюминия
II степени активности (промытый 2 н хлороводородной
или уксусной кислотой, водой и высушенный при 180 - 200 °C). Уголь
активированный марки БАУ. Сульфат натрия безводный х.ч.
Стекловата. Серная кислота х.ч., 15-процентный водный
раствор. Гидроксид натрия ч.д.а. Лед. Стекло
измельченное. Стандартные растворы этоксилина (х.ч.) в гексане (готовятся
разбавлением бензольного раствора) 0,1 и 1,0 мкг/мл. Гексан. Этоксилин х.ч.
Приборы и посуда. Для экстракции и
очистки экстрактов. Колбы: мерные на 10 и 50 мл; конические на 250; 150; 100 и
50 мл. Воронки делительные на 250 мл. Цилиндры мерные на 50; 200 мл. Пипетки
вместимостью 1; 5 и 10 мл. Стаканы химические на 100 и 50 мл. Колонки хроматографические длиной 25 см с внутренним диаметром 1,5
- 2,5 см. Палочки стеклянные. Ступка фарфоровая. Воронки с пористым фильтром N
1 или N 2. Баня водяная. Баня песочная или электронагреватель. Прибор для
встряхивания жидкостей. Ротационный вакуумный испаритель.
Для ГЖХ. Хроматограф с ДЭЗ. Микрошприц на 10 мл.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. Пробу сточной или природной воды (200 мл) подщелачивают до pH 9 раствором карбоната натрия и оставляют на 30 мин. при
комнатной температуре. Затем всю пробу переносят в делительную воронку, где
дважды экстрагируют этоксилин бензолом порциями по 20
мл. В водную фазу вводят 4 мл пересыщенного раствора или 0,5 г сухой соли
хлорида натрия и смесь экстрагируют еще 10 мл бензола.
Бензольные вытяжки объединяют и сушат безводным сульфатом натрия (5 г) или над
сухим гидроксидом калия (3 г) не менее 30 - 40 мин. Экстракт отфильтровывают в
колбу и растворитель отгоняют с помощью вакуумного испарителя до объема 0,1 -
0,2 мл.
В пробу воздушно-сухой почвы (50 г)
вносят 4 - 8 мл насыщенного раствора карбоната натрия <*>, растирают
стеклянной палочкой и заливают 25 - 40 мл бензола. Встряхивают 30 мин. (можно
оставить на ночь), бензол сливают, а почву заливают еще 15 - 30 мл бензола,
смесь встряхивают 15 мин. или настаивают 30 мин., бензольный
слой объединяют с первой вытяжкой и экстрагируют почву еще 10 - 20 мл с
последующим 10-минутным встряхиванием или 40-минутным настаиванием. Бензольный слой объединяют с первыми двумя вытяжками и
упаривают до объема 3 - 5 мл.
--------------------------------
<*> При этом почва не должна
слипаться. Если она слипается, раствор соды добавляют до образовании
суспензии.
Упаренный экстракт вносят в хроматографическую колонку диаметром 1,5 - 2,5 см,
заполненную последовательно стекловатой, безводным сульфатом натрия на высоту 3
см и активированным углем БАУ на 7 - 8 см (или оксидом алюминия на высоту 6
см). Колонку предварительно промывают бензолом. Элюирование проводят 30 мл
бензола, затем 30 мл смеси бензола с ацетоном (3:1) и 100 мл смеси
бензол-ацетон (1:1). Первые 30 мл элюата отбрасывают,
а остальные порции элюата собирают в одну колбу,
сушат (так же, как водный экстракт) и отгоняют растворитель вакуумным
испарителем. При отсутствии аппарата можно очень осторожно упаривать
растворитель на водяной бане до объема 0,1 - 0,5 мл (но не досуха). При
использовании колонки с оксидом алюминия элюирование проводят так же, но
отбрасывают только 5 - 7 мл и используют 50 - 70 мл элюата.
Пробу зеленой массы растений естественной
влажности (25 - 50 г) тонко измельчают, можно растереть в ступке со стеклом (но
не с песком), и заливают 50 - 80 мл 15-процентного раствора серной кислоты,
осторожно перемешивают стеклянной палочкой, затем кипятят 10 мин. или нагревают
на водяной бане 20 - 30 мин. и охлаждают. Водный слой осторожно декантируют, а
растительную часть заливают 30 мл 15-процентного раствора серной кислоты,
перемешивают, после недолгого отстаивания либо фильтруют через стекловату или стеклофильтры, либо центрифугируют.
Осадок промывают еще 20 - 30 мл горячей
дистиллированной воды. Водные растворы объединяют и нейтрализуют 50-процентным
раствором щелочи. Чтобы не происходило большого разогревания, можно перед
нейтрализацией полученную вытяжку охладить или добавить в нее 2 - 3 г льда.
Нейтрализованный раствор подщелачивают до
pH 9, добавляют 15 - 20 мл бензола, перемешивают и
оставляют на 2 - 4 ч для расслоения. Затем экстракцию бензолом повторяют еще
дважды, бензольные вытяжки объединяют, подсушивают
над безводным сульфатом натрия или сухим KOH и упаривают до 0,2 мл. Окрашенный
экстракт подвергают колоночной очистке так же, как почвенный экстракт.
Упаренный экстракт подвергают
газохроматографическому анализу.
Условия
хроматографирования. Хроматограф
с ДЭЗ. Колонка стеклянная
длиной 1 м с
внутренним диаметром 3,5 мм.
Насадка - инертный носитель
хроматон
N-супер с 3%
SE-30 или 3% OV-1. Скорость
потока газа-носителя
(азота) 2
л/ч, продувочного газа - 20 л/ч. Шкала
электрометра 0,25 x
-10
10 А.
Температура (°C): термостата
колонок - 180 +/- 5, термостата
детектора -
210, испарителя - 20. Время
удерживания этоксилина на фазе
SE-30 2 мин. 40 с, на фазе OV-1 - 2 мин. 52 с.
Время анализа 8 - 10 мин.
В упаренную до объема 0,2 мл пробу вносят
1,8 мл гексана, откуда берут микрошприцем
3 мкл раствора и вносят в испаритель хроматографа.
Обработка результатов анализа.
Количественную оценку содержания этоксилина проводят
методом абсолютной калибровки. Для построения градуировочного
графика в испаритель хроматографа последовательно (при n = 5) вводят по 3 мкл стандартов, содержащих 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 мкг/мл гексанового раствора. Концентрацию этоксилина
(X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:
AV
X = ---,
V P
a
где:
A - количество препарата, найденное по градуировочному графику, нг;
V - общий объем экстракта, мл;
V -
объем аликвоты, вводимой в
хроматограф, мкл;
а
P - масса (объем) анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать правила безопасности при работе с перечисленными реактивами. Все
работы с растворителями следует проводить под вытяжным шкафом.