Утверждены
Минздравом СССР
19 сентября 1979 г. N 2084-79
30 июня 1984 г. N 3059-84
4 октября 1988 г. N 4699-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТИАБЕНДАЗОЛА (ТЕКТО) В ОВОЩАХ
И ФРУКТАХ (ЯБЛОКИ, ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ,
МОРКОВЬ,
ЛУК, КАРТОФЕЛЬ, СВЕКЛА, КАПУСТА), ЗЕРНОВЫХ
(ПШЕНИЦЕ, РИСЕ),
ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
Л.И. Лещинским, К.Ф. Новиковой, Н.Е. Ремизовой (ВНИИХСЗР).
Краткая
характеристика препарата. Тиабендазол (текто) -
системный
фунгицид широкого
спектра действия. Действующее
начало препарата
2-(4-тиазолил) бензимидазол. Брутто - формула C H N
S. Молекулярная масса
10 7 3
201,3. В чистом виде - кристаллы белого цвета, т.
пл. 296 - 304 °C. Хорошо
растворим в
ацетоне (2,8 мг/мл), этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в
воде при 25 °C меняется в зависимости от pH. При pH 5 - 12 составляет 0,05
мг/л, при pH < 5 она возрастает и при pH
2 - 10 г/л.
В картофеле МДУ 1 мг/кг, томатах - 0,1,
зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении тиабендазола из овощей и фруктов
этилацетатом, перераспределении в соляную кислоту, а затем, после
подщелачивания раствора, - в этилацетат, насыщенный водой, с последующим
определением методом ТСХ. Экстракты из пшеницы дополнительно очищают микросублимацией в вакууме.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 138.
Таблица 138
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌───────────────┬────────────┬────────────────┬─────────────┬─────────────┐
│
Анализируемый │ Предел │Среднее значение│ Стандартное │Доверительный│
│ объект
│определения,│
определения │
отклонение │ интервал
│
│ │ мг/кг
│ стандартных │ при n = 5, │
среднего │
│ │ или мг/л
│ количеств при │ %
│при p = 0,95 │
│ │ │ n = 15, %
│ │ и n = 5,
% │
├───────────────┼────────────┼────────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Яблоки │0,07 │79 │+/- 7 │79 +/- 9 │
│Лимоны │0,07 │78 │+/- 9 │78 +/- 11 │
│Апельсины │0,07 │83 │+/- 12 │83 +/- 15 │
│Томаты │0,07 │86 │+/- 8 │86 +/- 10 │
│Морковь │0,07 │95 │+/- 5 │95 +/- 6 │
│Лук │0,07 │93 │+/- 7 │93 +/- 8 │
│Капуста │0,07 │97 │+/- 6 │97 +/- 1 │
│Картофель │0,07 │83 │+/- 11 │83 +/- 14 │
│Свекла │0,07 │83 │+/- 11 │83 +/- 14 │
│Пшеница │0,1 │85 │+/- 6 │85 +/- 7 │
│Рис │0,1 │79 │+/- 5 │79 +/- 6 │
│Почва │0,14 │80 │+/- 10 │80 +/- 12 │
│Вода │0,002 │83 │+/- 5 │83 +/ 7 │
└───────────────┴────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────┘
Примечание. Предел обнаружения - 1 мкг.
Избирательность метода. Метод селективен. Беномил, БМК, ридомил, байлетон, ФОП и ХОП
определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Этилацетат свежеперегнанный. Гексан ч.д.а.
Хлороформ ч.д.а. Спирт этиловый, 96-процентный.
Аммиак водный ч.д.а. Хлороводородная кислота (фиксанал)
0,1 н Едкое кали ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Уксусная кислота ч.д.а.
Йодид калия х.ч. Карбонат натрия х.ч.
Нитрат висмута основной ч.д.а.
Основной раствор - реактив Драгендорфа. Растворяют 850 мг основного азотнокислого
висмута в 40 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты и
раствор, содержащий 8 г KJ в 20 мл воды. Для проявления хроматограмм
1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл
дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы
идет 2 - 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в
течение длительного времени. Рабочий раствор готовят непосредственно перед
обработкой хроматограммы. Стандартные растворы тиабендазола в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор N
1); 10 мкг/мл (раствор N 2) и 1 мкг/мл (раствор N 3). Растворы стабильны при
хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной температуре - 6 мес.
Приборы,
аппаратура и посуда. Хроматоскоп или другой источник УФ-света
длиной волны 250
- 260 нм. Хроматографическая
камера. Ротационный вакуумный
испаритель с
набором колб. Аппарат
для встряхивания. Масляный насос.
Вакуумный водоструйный насос. Колбы: плоскодонные на
500 мл; конические на
500 мл; грушевидные на 50 мл; мерные на 100 мл. Цилиндры
мерные на 10 и
100 мл. Пробирки
градуированные с пробками на шлифах с оттянутым концом на
5 мл. Микрошприц на 500 мкл. Пипетки на
1; 2 и 5 мл. Делительные воронки на
250 и
500 мл. Пульверизаторы стеклянные.
Пластинки "Силуфол"
УФ .
254
Кофейная
мельница. Почвенное сито.
Подготовка хроматографических
камер. За 1 ч до начала хроматографирования камеры
заполняют смесью подвижных растворителей хлороформ-этиловый
спирт-аммиак (100:10:0,2) и гексан-ацетон-аммиак
(50:50:0,1) для насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем
подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7
- 1 см от уровня дна камеры.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстракта. Измельченную с помощью ножа пробу овощей или фруктов (15 г) помещают
в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют
фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт
фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством
этилацетата. Из объединенного экстракта извлекают фунгицид 0,1 н раствором
соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный
слой отбрасывают. Солянокислую фракцию собирают в другой делительной воронке на
250 мл. К объединенному раствору приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH 10 и экстрагируют тиабендазол
5 раз этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 30 мл. Объединенный в
конической колбе на 500 мл экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 -
30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу на 50
мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного
испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют до объема
- 0,1 мл. При хроматографировании пробу наносят
полностью.
Навеску размолотого риса (20 г) помещают
в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 75 мл этилацетата и
экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания
колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку
вместимостью 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют
еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта фунгицид
извлекают 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислотную
фракцию собирают в другой делительной воронке вместимостью 250 мл. К
объединенному раствору пипеткой добавляют 4,5 мл 4 н NaOH
до pH 12 и тщательно встряхивают воронку.
Экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом порциями
по 30 мл. Объединенный этилацетатный экстракт сушат
над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через
бумажный фильтр в грушевидную колбу вместимостью 50 мл и каждый раз отгоняют
растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл.
Последнюю порцию растворителя отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой
добавляют 1 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и ее стенки тщательно обмывают
растворителем. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть полученного раствора (от 0,1
до 0,5 мл).
Навеску пшеницы (20 г) проводят через все
операции, как и навеску риса. Сконцентрированный до объема 1 - 2 мл экстракт с
помощью 10 - 12 мл ацетона переносят в патрон сублиматора
(см. рис. 1) и проводят доочистку экстракта микросублимацией
в вакууме в течение 20 мин. при температуре более 90 °C и давлении 6,67 Па
(0,05 мм рт. ст.). По окончании сублимации тиабендазол
смывают с помощью "пальца" сублиматора 10
мл ацетона в градуированную пробирку вместимостью 10 мл. В пробирку помещают заплавленный в верхней части стеклянный капилляр и ее
содержимое концентрируют на горячей водяной бане до объема 1 мл. Пробирку
закрывают пробкой на шлифе. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть раствора (от 0,1 до 0,5 мкл).
Навеску
почвы (15 г), помещенную в плоскодонную колбу
вместимостью
250 мл, увлажняют 3 мл 1 н раствора
Na CO
(20% массы пробы), заливают
2 3
50 мл этилацетата
и экстрагируют тиабендазол с
помощью механического
встряхивания колбы в течение 30 мин. Дальнейший
анализ почвы проводят по
схеме, описанной
для риса.
В 1
л воды пипеткой добавляют 5 мл 1 н
раствора Na CO
и экстрагируют
2 3
тиабендазол в делительной
воронке вместимостью 500
мл этилацетатом,
насыщенным водой,
4 раза порциями по 150; 100; 50 и
50 мл. Из экстракта,
объединенного в
делительной воронке вместимостью
0,5 л, извлекают
тиабендазол 0,1 н хлороводородной
кислотой трижды порциями по 30 мл.
Дальнейшие
определения проводят по схеме, описанной для риса.
Хроматографирование. Остаток, полученный из экстрактов овощей и фруктов, с помощью
стеклянного капилляра количественно наносят на пластинку "Силуфол" УФ254. Справа и слева от пробы капилляром
наносят стандартные растворы тиабендазола, содержащие
1; 2; 3; 4 и 5 мкг препарата. Стандартные растворы готовят следующим образом: в
серию конических пробирок пипеткой помещают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл
стандартного раствора N 2 и концентрируют растворы, нагревая пробирки на
водяной бане до объема ~ 0,1 мл.
Аликвотную
часть полученных экстрактов из
пшеницы, риса, почвы и воды
(0,1 -
0,5 мл) с
помощью микрошприца на
500 мкл наносят
на
хроматографическую
пластинку "Силуфол" УФ . Справа и слева от пробы тем
254
же шприцем наносят серию стандартных растворов тиабендазола с содержанием
1; 2; 3; 4 и 5
мкг. Шкалу стандартов при аликвоте 0,1 мкл и 0,5 мкг готовят
в градуированных
пробирках согласно таблице 139.
Таблица 139
ШКАЛА СТАНДАРТОВ
┌───────────────────────────────┬───────────────────────────────┬─────────┐
│ Нанесение 0,1 мл │ Нанесение 0,5 мл │Нанесено │
├───────────┬───────┬───────────┼───────────┬───────┬───────────┤на
плас- │
│стандартный│ацетон,│содержание,│стандартный│ацетон,│содержание,│тинку, │
│раствор,
мл│ мл │
мкг/мл │раствор, мл│ мл │ мкг/мл
│мкг │
├───────────┼───────┼───────────┼───────────┼───────┼───────────┼─────────┤
│1 │9 │1 │2 │8 │0,2 │1 │
│2 │8 │2 │4 │6 │0,4 │2 │
│3 │7 │3 │6 │4 │0,6 │3 │
│4 │6 │4 │8 │2 │0,8 │4 │
│5 │5 │5 │10 │0 │1 │5 │
└───────────┴───────┴───────────┴───────────┴───────┴───────────┴─────────┘
Аналогичным образом готовят стандартные
растворы при нанесении аликвоты, промежуточной
между 0,1 и 0,5 мкл.
При
определении тиабендазола
в овощах, фруктах, пшенице, воде и почве
хроматограмму
развивают в системе
подвижных растворителей
гексан-ацетон-аммиак
(50:50:0,1) или хлороформ-этиловый спирт-аммиак
(100:10:0,1). При определении фунгицида
в рисе предварительно развивают
хроматограмму в хлороформе,
а затем после
высушивания - в
одной из
указанных выше
систем подвижных растворителей. После развития хроматограммы
и высушивания пластинок на воздухе пятна тиабендазола проявляют под лампой
УФ-света. Зоны локализации
тиабендазола обнаруживаются в виде фиолетовых
пятен па зеленом фосфоресцирующем фоне с R 0,49 +/- 0,02 в первой системе
f
ПР и 0,57 +/- 0,02 -
во второй. Пятна можно наблюдать в течение нескольких
месяцев. Линейный диапазон детектирования 1 - 5 мкг.
При необходимости для
обнаружения пятен
можно использовать реактив Драгендорфа.
При обработке
хроматограмм этим
проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в
виде
оранжевых пятен
на белом фоне, с линейным диапазоном определения 1 - 5 мкл.
Пятна стабильны
в течение 7 - 8 мин.
Обработка результатов анализа.
Количественное определение тиабендазола проводят
путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии
стандартов. Содержание тиабендазола в анализируемой
пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:
AV
X = ---,
V P
а
где:
A - содержание тиабендазола
в хроматографируемой пробе, мкг;
V - общий объем раствора,
из которого отбирают
аликвоту
для
хроматографирования, мл;
V -
объем аликвоты, отобранный
для хроматографирования, мл (при
а
внесении всей пробы V
= V);
а
P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. Соблюдать
требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися
жидкостями и пестицидами.