Утверждены
Минздравом СССР
4 октября 1988 г. N 4704-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ
(АМБУШ, ЦИМБУШ)
В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны: Л.Г. Адейшвили, Э.В. Твалчерелидзе,
О.Н. Сейнишвили (ГрузНИИЗР);
Р.В. Чирикашвили (Грузинский
зоотехническо-ветеринарный учебно-исследовательский институт).
Дополнение к "Методическим указаниям
по определению синтетических пиретроидов в растениях,
почве, воде водоемов методом газожидкостной хроматографии" N 2473-81 от
22.10.81.
Краткая характеристика препаратов
приведена в Методических указаниях N 2473-81.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции препаратов из мяса, внутренних органов и яиц птиц хлороформом,
очистке экстрактов ледяной смесью ацетон-вода (2:1) и активированным углем и
количественном определении препаратов на хроматографе с ДПР.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 76.
Таблица 76
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АМБУША И ЦИМБУША В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ
┌───────────┬─────────────┬───────────────┬─────────────┬─────────────────┐
│Исследуемый│ Предел
│ Среднее │ Стандартное │ Доверительный
│
│ объект
│определения, │
значение │отклонение, %│интервал
среднего│
│ │ мг/кг
│определения, % │
│ при p = 0,95, % │
│ ├──────┬──────┼───────┬───────┼──────┬──────┼────────┬────────┤
│ │ а │ ц │
а │ ц │ а │ ц │ а │ ц │
├───────────┼──────┼──────┼───────┼───────┼──────┼──────┼────────┼────────┤
│Мясо │0,1 │0,05
│79 │80 │5,3 │6,5
│6,7 │7,2 │
│Мышцы │0,1 │0,05
│80 │82 │5,5 │6,3 │7,0
│8,6 │
│Печень │0,1 │0,05
│75 │76 │7,4 │4,0
│8,6 │5,7 │
│Легкие │0,1 │0,05
│69 │73 │6,0 │5,2
│6,7 │6,0 │
│Сердце │0,1 │0,05
│82 │77 │7,2 │5,8
│9,2 │7,0 │
│Яйцо
│0,3 │0,10
│62 │66 │8,4 │6,0
│8,2 │6,4 │
└───────────┴──────┴──────┴───────┴───────┴──────┴──────┴────────┴────────┘
Примечание: а - амбуш,
ц - цимбуш.
Реактивы и растворы. Ацетон
ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. н-Гексан ч. Бензол ч.д.а. Сульфат
натрия безводный. Уголь активированный. Фильтры "синяя лента".
Наполнитель газохроматографической колонки - инертный носитель хроматон N-AW-DMCS с 5% XE-60. Газ-носитель - аргон особой
чистоты.
Стандартные растворы: N 1 - раствор амбуша (или цимбуша)
концентрацией 100 мкг/мл. Для его приготовления 10 мг х.ч.
вещества растворяют в гексане в 100-миллилитровой
мерной колбе. Срок хранения готового раствора в холодильнике 2 мес.; N 2 -
растворы амбуша (или цимбуша)
концентрацией 1; 5 и 10 мкг/мл. Из стандартного раствора амбуша
(или цимбуша) N 1 отбирают 1; 5 или 10 мл в мерные
колбы и доводят объем растворов гексаном до 100 мл.
Приготовленные растворы хранят в холодильнике не дольше 2 недель.
Приборы и посуда. Ротационный испаритель.
Механический встряхиватель. Хроматограф с ДПР. Колбы:
конические с притертой пробкой на 150 и 250 мл; мерные на 50 и 100 мл. Воронки
химические диаметром 2 - 6 см. Пипетки вместимостью 1; 2; 5 и 10 мл.
Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Пробирки с притертой пробкой на 10 мл. Колонка
стеклянная для хроматографа длиной 0,5 м с внутренним диаметром 3 мм.
Подготовка к определению. Для подготовки
газохроматографической колонки ее промывают бензолом (до набивки сорбентом) и
затем высушивают, продувая сухим воздухом. Для заполнения колонки готовую
набивку заводского изготовления засыпают в подсоединенную к вакуумному насосу
колонку, в один конец которой помещена стекловата. С другого конца в нее
засыпают сорбент. Для полной набивки при заполнении колонки постукивают по ее
стенкам. Заполненную колонку помещают в термостат хроматографа и продувают
газом-носителем в течение 48 ч при температуре 280 °C. При этом скорость
газа-носителя 200 мл/мин.
Отбор проб. Пробы мяса и внутренних
органов птиц отбирают из трех птиц, а яиц - из 20 штук. Для анализов образцы
берут по 10 г в двух повторностях. Пробы хранят в
морозильной камере холодильника не дольше 3 сут.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. По 10 г мелкоизмельченных навесок мяса, мышц, печени, легких,
сердца и взболтанной массы яиц помещают в конические колбы и в каждую из них
добавляют по 15 мл хлороформа. Содержимое встряхивают в течение 10 мин., после
чего его фильтруют через бумажный фильтр, а массу яиц - через вату. Экстракцию пиретроидов повторяют дважды. Остаток на фильтре (или на
вате) промывают 5 - 10 мл хлороформа. Экстракты объединяют и высушивают
безводным сульфатом натрия. Объединенные экстракты упаривают при температуре 40
°C на ротационном испарителе до минимального объема 0,5 мл (экстракты можно
упаривать при комнатной температуре под током воздуха). Остаток затем
растворяют в 30 мл охлажденного раствора ацетона с водой (2:1) и в течение 30
мин. выдерживают на холоде. После этого экстракт фильтруют, остаток промывают
холодным раствором ацетона с водой. Из фильтрата выпаривают ацетон на
ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Из водного раствора пиретроиды трижды экстрагируют в делительной воронке н-гексаном порциями по 10 мл. Если экстракт получился
окрашенным, к нему добавляют 0,5 г активированного угля и в течение 5 мин.
выдерживают при 40 °C, после чего фильтруют и конечный объем фильтрата доводят
до 2 мл. Из этих 2 мл и берут аликвотную порцию для количественного определения
пестицида (5 мкл).
Условия
хроматографирования. Используют
колонку длиной 0,5 м
с
внутренним диаметром
3 мм. Носитель - хроматон N-AW-DMCS
с 5% XE-60.
Газ-носитель -
аргон особой чистоты.
Расход газа-носителя 60
мл/мин.,
воздуха - 200
мл/мин. Температура (°C):
детектора и испарителя - 270,
-12
колонки -
230. Шкала электрометра
20 x 10 А. Скорость протяжки ленты
600 мм/ч. Время
удерживания амбуша - 4 мин. 15 с, цимбуша
- 7 мин. 10 с.
Обработка результатов анализа. Количество
препаратов в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
AH V
2 2
X = -----,
H V P
1 1
где:
A - количество препарата
в стандартном растворе,
введенном в
хроматограф, нг;
H -
высота пика стандартного раствора
препарата, введенного в
1
хроматограф, мм;
H -
высота пика препарата в пробе, мм;
2
V -
объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
1
V -
объем экстракта, из которого берут аликвотный объем для ввода в
2
хроматограф, мл;
P - масса анализируемой пробы, г.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работ с органическими
растворителями и огнеопасными веществами, а также со сжатыми газами.