Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 4990-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТРИФУМИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препаратов
приведена в Методических указаниях N 5026-89.
Принцип
метода. Определение трифумина и
его метаболитов
основано на хроматографическом
разделении в тонком слое оксида
алюминия (пластинки "Алуфол")
и обнаружении зон локализации после
термического разложения препаратов на пластинке до ароматического
амина; диазотирования последнего
нитритом натрия и азосочетания
образовавшегося производного фенилдиазония
с 1-нафтолом. Возможны
также хроматографирование в тонком
слое силикагеля (пластинки
"Силуфол" УФ ) и
обнаружение пятен под
хроматоскопом. Для
254
обнаружения трифумина может быть применен бромфеноловый
реагент.
Пробы отбирают
с концентрированием (бумажный фильтр "синяя
лента").
Метрологическая характеристика метода.
Предел измерения
трифумина и его
метаболитов в анализируемом
объеме пробы по
реакции азосочетания 0,2
мкг (на пластинках
"Алуфол"), 3 мкг
("Силуфол"),
под хроматоскопом 0,5 мкг ("Силуфол" УФ ). Предел
254
измерения трифумина по
реакции с бромфеноловым
реагентом 3 мкг
("Силуфол").
Предел измерения в
воздухе трифумина и его
метаболитов 0,007
мг/куб. м (при отборе 30 л
воздуха). Диапазон
измеряемых концентраций
0,007 - 2 мг/куб. м. Граница суммарной
погрешности
измерения трифумина +/- 13,2%, метаболита ФМ-6-1 -
+/-
14,5, метаболита
ФД-1-1 - +/- 14,8%.
Избирательность метода. Трифумин и
его метаболиты разделяются
на хроматограмме. Определению
по реакции азосочетания мешают
гербициды из
группы фенилмочевины,
имеющие близкие величины R .
f
Определению с бромфеноловым
реагентом мешают фосфорорганические и
другие пестициды,
определяемые этим реагентом и
имеющие близкие
величины R . Определению под хроматоскопом могут
мешать пестициды
f
и другие
коэкстрактивные вещества,
видимые под хроматоскопом в
области 250
- 260 нм и
имеющие близкие к трифумину и его
метаболитам величины
R . Из трех
способов обнаружения более
f
специфичен
способ по реакции азосочетания. Сочетание трех
способов
обнаружения позволяет
надежно идентифицировать трифумин и его
метаболиты в
присутствии пестицидов названных групп.
Время измерения (включая отбор проб)
около 120 мин.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч.
Безводный сульфат натрия ч. Фильтры бумажные "синяя лента". Нитрит натрия ч.д.а. Кислота хлороводородная х.ч. Кислота
уксусная х.ч. Гидроксид калия ч. 1-Нафтол ч.д.а. Бромфеноловый синий,
индикатор ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а.
Стандартные пластинки "Алуфол", "Силуфол" (20 x 20 см), "Хемапол".
Препарат трифумин. Метаболиты трифумина
ФМ-6-1 и ФД-1-1 х.ч. Основные стандартные растворы трифумина и его метаболитов с концентрацией по 1000 мкг/мл
готовят растворением н-гексаном навески каждого
вещества 25 мг (0,025 г) х.ч. в мерных колбах
вместимостью 25 мл. Трифумин в растворе устойчив при
хранении в холодильнике в течение 1 мес., метаболиты - 3 мес. Рабочий
стандартный раствор (смесь трифумина и его
метаболитов) готовят внесением 2,5 мл основного стандартного раствора каждого
вещества в мерную колбу на 50 мл и доведением н-гексаном
объема раствора до метки. Концентрация каждого вещества в смеси 50 мкг/мл.
Растворы устойчивы в холодильнике в течение 10 дней.
Проявляющие реагенты:
N 1: а - к смеси из 46 мл воды и 4 мл
концентрированной хлороводородной кислоты прибавляют
1 г нитрита натрия; б - к раствору 2,8 г гидроксида калия в 50 мл воды
прибавляют 0,1 г 1-нафтола. Проявляющие реагенты применяют свежеприготовленными.
N 2: а - растворяют 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят объем
раствора до 100 мл 1-процентным водно-ацетоновым (1:3) раствором нитрата
серебра; б - 5-процентный водный раствор уксусной кислоты. Реактивы устойчивы в
течение 2 мес.
Приборы и посуда. Электроаспиратор
для отбора проб воздуха. Фильтродержатели.
Ротационный вакуумный испаритель. Баня водяная. Колбы: мерные на 25, 50 и 100
мл; конические на 100 мл; грушевидные на шлифах вместимостью 50 мл. Стаканы
химические на 50 и 100 мл. Пипетки вместимостью 0,1; 1,5; 10 мл. Хроматографическая камера. Пульверизаторы стеклянные. Лампа
УФ-света типа "Хроматоскоп" или аналогичная
с диапазоном светового излучения 250 - 260 нм.
Отбор проб. Воздух со скоростью 1 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", вложенный
в фильтродержатель. Рекомендуется отбирать три
параллельные пробы. Максимально отбираемый объем воздуха 30 л (в течение 30
мин.). Отобранные пробы хранить в холодильнике не более 3 дней.
Ход анализа. Бумажный фильтр помещают в
стакан и заливают 20 мл н-гексана (ацетона).
Экстрагируют, перемешивая стеклянной палочкой в течение 5 мин., сливают
растворитель через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки, отжимая
фильтр стеклянной палочкой. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют.
Упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани
45 °C) до объема около 0,3 мл и хроматографируют. При
использовании в качестве экстрагента ацетона остаток
экстракта упаривают при комнатной температуре досуха, растворяют в 0,3 мл н-гексана и хроматографируют.
Определение
методом ТСХ. На
пластинку "Алуфол" с
помощью
капилляра или микропипетки наносят пробу, ополаскивая
колбу 3 - 4
раза небольшими
количествами (около 0,1 мл) н-гексана. На эту
же
пластинку наносят
0,05 - 0,2 мл рабочего стандартного раствора
смеси трифумина и его
метаболитов. Пластинку хроматографируют в
подвижной фазе гексан - ацетон
(2:1). После подъема
фронта
растворителя на
10 см пластинку вынимают из камеры, отмечают линию
фронта и
оставляют на несколько минут на воздухе для испарения
растворителя. Затем
пластинку помещают в
сушильный шкаф с
температурой 160
- 170 °C
и выдерживают в течение 1 ч.
После
охлаждения пластинку
помещают в камеру
для опрыскивания и
опрыскивают
проявляющим реагентом N 1: сначала реактивом а и сразу
же реактивом б.
Трифумин
и его метаболиты проявляются в виде
красных пятен.
Величины R трифумина, ФМ-6-1
и ФД-1-1
f
соответственно 0,23;
0,49; 0,82. Для
этой реакции можно также
использовать
пластинки "Силуфол".
Для
обнаружения трифумина и его метаболитов под
хроматоскопом
используют пластинки
"Силуфол" УФ .
В этом случае пробу с
254
н-гексаном
наносят на пластинку
"Силуфол" УФ .
Развивают
254
хроматограмму
в подвижной фазе гексан - ацетон
(2:1), дают
растворителю испариться
с пластинки и
рассматривают ее под
хроматоскопом. Величины
R трифумина, ФМ-6-1
и ФД-1-1
f
соответственно 0,35; 0,61; 0,93. Далее эту же хроматограмму можно
проявить бромфеноловым реагентом
(реагент N 2).
Сначала
опрыскивают реактивом а,
затем 5 мин. прогревают при 100 °C и
опрыскивают реактивом б.
Бромфеноловым реагентом обнаруживается
только трифумин, метаболиты не обнаруживаются.
Количественное определение трифумина и его метаболитов проводят путем сравнения
интенсивности окраски и размера пятен пробы с пятнами стандартных растворов на
одной пластинке. Площадь пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной
миллиметровой бумаги. Прямая пропорциональная зависимость площади пятен от
концентрации препаратов наблюдается в пределах 0,2 - 15 мкг (проявляющий
реагент N 1), 0,5 - 20 мкг (обнаружение под хроматоскопом), 3 - 25 мкг
(проявляющий реагент N 2). При больших концентрациях анализируют аликвотную
часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.
Обработка результатов анализа.
Концентрацию трифумина в воздухе (X, мг/куб. м)
вычисляют по формуле:
GV
2
X = -----,
V V
1 20
где:
G
- количество пестицида в хроматографируемом
объеме пробы,
мкг;
V -
объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;
1
V -
общий объем пробы, мл;
2
V
- объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный
к
20
стандартным
условиям, л.
Требования безопасности. Следует
соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы с органическими
растворителями, кислотами и щелочами.