Утверждены

Минздравом СССР

28 января 1980 г. N 2143-80

8 июня 1989 г. N 5001-89

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РИЦИДА-П В РИСЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

    Рицид-П   -   O,O-диизопропил-S-бензилтиофосфат.   Синоним   -

китацин-П.  Общепринятое название - ИБФ. Брутто-формула C  H  OPS.

                                                         13 21

Молекулярная  масса 576,0. В чистом виде - прозрачная жидкость. Т.

кип.  126  °C  при  5,3 Па. Растворимость в воде при 20 °C 50 г/л.

Хорошо растворим в органических растворителях.

Принцип метода. Метод основан на извлечении рицида-П из риса этилацетатом, из воды - гексаном, а из увлажненной почвы - смесью гексана с ацетоном (4:1), удалении растворителя, перераспределении рицида-П в гексан и определении методом ГЖХ с ТИД.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон измеряемых концентраций: в рисе - 0,025 - 0,5 мг/кг, в воде - 0,0005 - 0,002 мг/л, в почве - 0,05 - 2,00 мг/кг. Предел обнаружения в хроматографируемой пробе 0,2 - 8,0 нг. Нижний предел определения в почве 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств (n = 15) 74,8 +/- 3,3% в рисе, 94,6 +/- 4,8% в воде, 95,3 +/- 3,5% в почве.

Доверительный интервал среднего значения определения (n = 5, p = 0,95) +/- 4,1% в рисе, +/- 6,0% в воде, +/- 4,8% в почве.

Избирательность метода. Метод селективен. Селективность обеспечивается сочетанием трех альтернативных колонок различной полярности и ГЖХ с ТИД.

Реактивы и растворы. Гексан свежеперегнанный. Ацетон. Этилацетат. Хроматон N-AW-DMCS (0,200 - 0,250 мм) с 5% XE-60. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 3% SE-30. Хроматон N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм) с 2% ПДЭГС. Газообразный азот особой чистоты из баллона или гелий. Водород из баллона или получаемый из генератора водорода. Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором. Натрия сульфат безводный. Стандартный раствор рицида-П в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор N 1) и 1 мкг/мл (раствор N 2). Для приготовления раствора N 1 в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску рицида-П (100 мг), взятую на аналитических весах с точностью +/- 0,0002 г. Навеску растворяют в ацетоне и доводят до метки тем же растворителем. Из раствора N 1 пипеткой отбирают 1 мл, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки гексаном. Растворы N 1 и N 2 стабильны при хранении в холодильнике в течение года.

Приборы и посуда. Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный прибор с ТИД. Ротационный вакуумный испаритель или аналогичный с набором колб. Механический встряхиватель или аналогичный. Колбы: круглодонные вместимостью 50, 300 и 500 мл; плоскодонные вместимостью 250 мл, 1 л; мерные вместимостью 100 мл. Пипетки на 10; 5 и 1 мл с делениями. Эксикатор. Грушевидные колбочки с пробками на шлифах вместимостью 100 мл. Почвенное сито. Микрошприц. Секундомер. Фарфоровая чашка.

Подготовка к определению. Подготовка колонки. Готовят насадку с 2% ПДЭГС на хроматоне N-AW-HMDS. В круглодонную колбу на 300 мл помещают навеску ПДЭГС (1 г), взвешенную с точностью +/- 0,2 г, и растворяют жидкую фазу в 200 мл хлороформа. В полученный раствор при непрерывном равномерном помешивании постепенно высыпают 49 г хроматона N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм). Объем раствора должен быть не менее чем в два раза больше насыпного объема сорбента. С помощью ротационного вакуумного испарителя при слабом нагревании водяной бани удаляют растворитель. После того как носитель при вращении колбы начинает легко осыпаться со стенок, его переносят в фарфоровую чашку и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 60 - 70 °C в течение 1 ч. После охлаждения в эксикаторе носитель пересыпают в стеклянную емкость с плотно закрываемой пробкой.

Заполненную носителем колонку присоединяют к хроматографу и кондиционируют при скорости потока азота или гелия 75 мл/мин. сначала в режиме программирования температуры от 50 до 210 °C со скоростью нагрева 1 °C/мин., а затем при 210 °C в течение 10 ч без подсоединения колонки к детектору. После завершения кондиционирования колонку подсоединяют к детектору, прибор подготавливают согласно инструкции.

Подготовка проб к анализу. Рис измельчают в кофейной мельнице до размера частиц, как в манной крупе. Для анализа берут 50 г измельченного риса.

Почву просеивают через почвенное сито, подготавливают 3 - 5 параллельных навесок массой 10 г. Перед анализом каждую пробу помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл и увлажняют 5 мл дистиллированной воды.

Ход анализа. Экстракция. Навеску риса 50 г помещают в круглодонную колбу на 500 мл, добавляют 150 мл этилацетата и экстрагируют рицид-П с помощью механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт фильтруют в коническую колбу на 1 л. Рицид-П из риса экстрагируют еще трижды этилацетатом порциями по 100 мл. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (примерно 40 г) в течение 10 мин. Небольшими порциями декантируют раствор в круглодонную колбу на 50 мл и отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя. Промывают сульфат натрия небольшими порциями этилацетата. Последнюю порцию растворителя отгоняют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 5 мл гексана. Колбу закрывают притертой пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Пробу воды (1 л) переносят в делительную воронку на 1,5 л, добавляют 20 - 30 г хлорида натрия, и рицид-П экстрагируют гексаном порциями по 100 мл четыре раза. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия. Небольшими порциями декантируют раствор в круглодонную колбу на 50 мл. Растворитель отгоняют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Безводный сульфат натрия промывают небольшими порциями гексана. Последнюю порцию гексана отгоняют до объема 1 - 2 мл и переносят остаток количественно с помощью ацетона в грушевидную колбу вместимостью 10 - 15 мл. Растворитель из грушевидной колбы отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пришлифованной пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Навеску увлажненной анализируемой пробы почвы заливают 50 мл смеси гексана с ацетоном (4:1) и экстрагируют рицид-П с помощью механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт пропускают через бумажный фильтр в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию рицида-П повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (примерно 20 г), а затем порциями фильтруют в грушевидную колбу на 100 мл. Концентрируют раствор с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 1 - 2 мл. Сульфат натрия и стенки колбы несколько раз обмывают ацетоном (общий объем 5 мл), полученный раствор также переносят в грушевидную колбу. Из последней порции фильтрата растворитель удаляют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 5 мл гексана. Колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Условия хроматографирования представлены в таблице 42.

 

Таблица 42

 

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ НА РАЗЛИЧНЫХ КОЛОНКАХ

 

┌─────────────────────────┬───────────────────────────────────────────────────┐

│        Параметры        │                     Колонка                       │

│                         ├────────────────┬────────────────┬─────────────────┤

│                         │        I       │       II       │       III       │

├─────────────────────────┼────────────────┼────────────────┼─────────────────┤

│Длина колонки, м         │1,1             │1,5             │2                │

│Внутренний диаметр, мм   │3,0             │3,5             │3,5              │

│Насадка колонки          │5% XE-60 на     │2% ПДЭГС на     │3% SE-30 на      │

│                         │хроматоне       │хроматоне       │хроматоне N-супер│

│                         │N-AW-DMCS       │N-AW-HMDS       │(0,16 - 0,20 мм) │

│                         │(0,20 - 0,25 мм)│(0,16 - 0,20 мм)│                 │

│Температура, °C:         │                │                │                 │

│  колонки                │185             │180             │170              │

│  испарителя             │200             │200             │190              │

│Скорость потока, мл/мин.:│                │                │                 │

│  газа-носителя          │75              │75              │60               │

│  (гелия или азота)      │                │                │                 │

│  водорода               │14 - 15         │18              │18               │

│  воздуха                │400             │180             │180              │

│                         │      -10       │      -10       │      -10        │

│Рабочая шкала            │5 x 10          │2 x 10          │2 x 10           │

│электрометра, А          │                │                │                 │

│Скорость протяжки ленты  │240             │240             │240              │

│самописца, мм/ч          │                │                │                 │

│Время удерживания:       │                │                │                 │

│  рицида-П               │3 мин. 11 с     │2 мин. 27 с     │5 мин. 44 с      │

│  рицида                 │3 мин. 50 с     │3 мин. 42 с     │5 мин. 7 с       │

│  ялана                  │48 с            │30 с            │1 мин. 45 с      │

│  метафоса               │8 мин. 31 с     │19 мин. 30 с    │6 мин. 36 с      │

│  пропанида              │19 мин. 50 с    │19 мин. 30 с    │-                │

│Линейный диапазон        │0,2 - 8         │0,5 - 10        │0,5 - 10         │

│определения, нг          │                │                │                 │

│Объем вводимой пробы, мкл│2               │2               │2                │

└─────────────────────────┴────────────────┴────────────────┴─────────────────┘

 

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков. Содержание рицида-П в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

 

                            C  H  V

                             ст рп

                        X = -------,

                            H  V P

                             ст а

 

    где:

    C   - содержание рицида-П в стандарте, нг;

     ст

    H   - высота пика рабочей пробы, мм;

     рп

    H   - высота пика стандарта, мм;

     ст

    V - объем рабочей пробы, мл;

    V  - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл;

     а

    P - навеска анализируемого образца (г) или объем воды (мл).

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", в подготовленную пробу пипеткой вносят известное количество гексана и анализируют более разбавленные растворы.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, установленные для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и ФОП.