Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5005-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АПОЛЛО В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДОВЫХ КУЛЬТУРАХ
МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая
характеристика препарата. Аполло - 3,6-бис(2-
хлорофенил)-1-2,4-5-тетразин. Брутто-формула C
H Cl N .
14 8 2 4
Молекулярная масса
303,2. Общепринятое название - хлорфентезин,
бисхлорфентезин.
Красное кристаллическое вещество
без запаха. Т.
пл. 182 - 186 °C. Растворимость, г/л: в хлороформе - 650, бензоле
- 2,5, гексане < 1, воде - 0,8 мг/л. Для крыс ЛД > 3000 мг/кг.
50
Принцип метода. Метод основан на
определении аполло методами ГЖХ и ТСХ после
извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистки от коэкстрактивных веществ в системе жидкость - жидкость.
Метрологическая характеристика методов
приведена в таблице 142.
Таблица 142
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОЛЛО.
ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,005 - 0,1
МГ/КГ
ИЛИ МГ/Л
┌────────────────────┬────────────────┬─────────────┬─────────────────────┐
│Анализируемый
объект│Среднее значение│ Стандартное │ Доверительный │
│ │ определения, % │отклонение,
%│интервал среднего, % │
├────────────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────────────┤
│ Метод газожидкостной
хроматографии │
│
│
│Вода │91,36 │+/- 2,48 │+/- 3,0 │
│Почва │81,32 │+/- 3,26 │+/- 3,9 │
│Яблоки │81,9 │+/- 4,0 │+/- 4,8 │
│Виноград │78,12 │+/- 4,04 │+/- 4,85 │
│
│
│ Метод тонкослойной
хроматографии │
│
│
│Вода │82,14 │+/- 4,72 │+/- 5,7 │
│Почва │66,2 │+/- 5,6 │+/- 6,7 │
│Яблоки │62,2 │+/- 3,4 │+/- 4,08 │
│Виноград │63,8 │+/- 4,6 │+/- 5,52 │
└────────────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────────────┘
Избирательность метода. Препараты,
близкие по сфере применения, в условиях ГЖХ определению не мешают. В условиях
ТСХ могут мешать препараты, обнаруживаемые с помощью аммиаката серебра.
Реактивы
и растворы. Для
экстракции. Ацетон х.ч. Гексан
ч.
Сульфат натрия.
Для газожидкостной хроматографии. 5% SE-30 на
хроматоне N-AW (0,16 - 0,20 мм). Азот газообразный особой
чистоты.
Стандартный раствор
аполло
(5 мкг/мл). Хранят в холодильнике не
более 3 дней. Для тонкослойной хроматографии.
Нитрат серебра х.ч.
Пластинки "Силуфол". Подвижная
фаза гексан -
ацетон (4:1).
Проявляющий реагент -
раствор аммиаката серебра
(0,5 г AgNO
3
растворяют в
5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 - 10 мл
аммиака (22,5%)
и доводят объем
раствора до 200 мл ацетоном).
Основной
стандартный раствор аполло (200 мкг/мл) в ацетоне.
Хранят
в холодильнике
не более 2 мес.
Приборы, посуда. Посуда мерная (колбы
конические, пипетки, цилиндры и др.). Воронки делительные. Колбы грушевидные,
круглодонные на 25, 50, 250 мл. Воронки конические. Аппарат для встряхивания.
Лампа ртутно-кварцевая. Камера хроматографическая.
Пульверизаторы стеклянные. Испаритель ротационный вакуумный. Хроматограф, снабженный
ДПР "Цвет" или другой марки. Микрошприц на
10 мкл. Колонка стеклянная - длина 1 м, внутренний
диаметр 3 мм (заполнена носителем на 0,5 - 0,6 м).
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют аполло дважды по 20 мл гексана.
Объединенные гексановые экстракты сушат безводным
сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе при температуре бани
40 °C до объема 0,3 - 0,5 мл. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе
растворяют в 1 мл ацетона и определяют методами ТСХ или ГЖХ.
Растительный материал (яблоки, виноград)
(25 г пробы) помещают в коническую колбу, приливают 50 мл ацетона, встряхивают
30 мин. Экстракцию повторяют дважды, объединяют ацетоновые экстракты, фильтруют
и переносят в делительную воронку. Прибавляют 300 мл дистиллированной воды,
хорошо перемешивают и реэкстрагируют аполло дважды по 30 мл гексаном.
Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия,
концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток в колбе растворяют в 1
мл ацетона и далее определяют методами ТСХ или ГЖХ.
Пробу почвы (25 г) помещают в коническую
колбу, прибавляют 10 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и заливают
50 мл ацетона. Затем содержимое колбы встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют
дважды. Экстракты фильтруют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл
дистиллированной воды и экстрагируют аполло дважды по
30 мин. гексаном. Объединенный
гексан сушат безводным сульфатом натрия,
концентрируют. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее хроматографируют.
Условия
хроматографирования. Метод
газожидкостной
хроматографии. Носитель
- хроматон N-AW
(0,16 - 0,20
мм).
Неподвижная фаза
5% SE-30. Колонка
стеклянная 1 м, заполнена
носителем на 0,5
- 0,6 м. Скорость потока газа-носителя (азота) 50
-12
мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10 А. Температура, °C: колонки
- 220;
испарителя - 240; детектора -
240. Вводимый объем 5 мкл.
При указанных условиях хроматографирования
препарат дает три пика
- один основной (t = 4,8
мин.) и
два нижних (t = 2,5 мин. и
уд уд
7,4 мин.). Линейный
диапазон детектирования (по
основному пику)
2 - 25 нг. Минимально детектируемое
количество (основной пик) -
2 нг.
Для
количественного определения измеряют
площадь основного
пика в пробе и стандартном
растворе (при условии, что пики близки
по величине
и определение ведется
в диапазоне линейности
детектора).
Содержание
аполло в пробе (X, мг/кг или мг/л)
рассчитывают по
формуле:
C VS
ст
пр
X = -------,
S V P
ст
1
где:
C
- количество препарата
во введенном в
хроматограф
ст
стандартном растворе, нг;
S -
площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;
пр
S -
площадь пика стандартного раствора препарата, введенного
ст
в хроматограф,
мл;
V -
объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
1
V - общий объем экстракта после упаривания,
мл;
P - масса анализируемой пробы, г.
Метод тонкослойной хроматографии. Пробу,
сконцентрированную до
объема 0,1 - 0,2
мл, количественно наносят на пластинку "Силуфол".
Параллельно наносят
серию стандартных растворов
с содержанием
аполло 3, 5, 10 мкг. Хроматографируют
в смеси растворителей гексан
- ацетон
(4:1). Аполло в
стандартном растворе и
пробе
обнаруживается на
пластинке в виде
пятна красного цвета. Для
повышения надежности идентификации пластинку после
хроматографирования
можно обработать водно-ацетоновым раствором
аммиаката серебра и поместить на 30 мин. под УФ-облучение. Аполло
обнаруживается в
виде серо-черного пятна. Величина R 0,47 +/-
f
0,05.
Содержание
аполло
в исследуемой пробе
(X, мг/кг или мг/л)
вычисляют по
формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препарата, найденное на
пластинке в пробе, мкг;
P - навеска или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими
растворителями и токсичными веществами.