Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5006-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КОММАНДА В БОБОВЫХ
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Краткая
характеристика препарата. Комманд -
гербицид
избирательного действия,
эффективное средство для
борьбы со
злаковыми двудольными сорняками. Действующее вещество
2-(2-хлорфенил)метил-4,4-диметил-3-изоксазолидинон. Брутто-формула
C H ClNO .
Молекулярная масса 239,7. Общепринятое название -
12 14
2
кломазон.
Светло-коричневая вязкая жидкость
с запахом рыбы,
-2
плотность 1,192
при 20 °C, давление паров 1,92 x
10 Па при 25
°C. Хорошо
растворим в хлороформе,
гептане, ацетоне, гексане,
метаноле, ацетонитриле, диоксане,
хлористом метилене и других
органических растворителях. Растворимость в
воде 1,1 г/л;
коэффициент распределения
в системе октанол - вода 350. Устойчив
при хранении:
при комнатной температуре может храниться без потерь
в течение года,
при 50 °C - в течение 3 мес. Препаративная форма -
концентрат эмульсии, содержащий 480 г/л д.в. Норма расхода на сое
0,75 - 1,0 кг/га
по д.в.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции комманда из пробы органическим
растворителем (н-гексан) с последующим определением
методом ГЖХ или ТСХ.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 16.
Таблица 16
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
КОММАНДА
┌────────────────────────────────────────┬──────────────────────────┬─────┐
│ Параметры │ ГЖХ │ ТСХ │
│ ├─────────────┬────────────┤ │
│ │ вариант I
│ вариант II │ │
├────────────────────────────────────────┼─────────────┼────────────┼─────┤
│Нижний
предел определения, мг/кг │0,005 │0,005 │0,05 │
│Среднее
значение определения, % │82,6 │81,5 │81,0 │
│Стандартное
отклонение, +/- % │18,6 │13,6 │14,6 │
│Доверительный
интервал среднего, +/- % │23,6 │16,9 │18,2 │
└────────────────────────────────────────┴─────────────┴────────────┴─────┘
Избирательность метода. Метод избирателен
в присутствии загрязнителей окружающей среды: хлорпроизводных циклопарафинов (изомеров ГХЦГ), соединений дифенилметанового ряда (ДДТ и его производных).
Реактивы и растворы. Азот газообразный особой
чистоты. Аммиак водный 25-процентный ч.д.а. Ацетон х.ч. н-Гексан ч., перегнанный.
Сульфат натрия безводный ч. (прокаленный). Нитрат серебра х.ч.
Проявляющий реагент. В мерную колбу на
100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 - 10 мл
водного 25-процентного аммиака. Полученный раствор разбавляют ацетоном до 100
мл. Хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой. Годен
в течение 1 мес.
Носитель инертный: хроматон
N-AW-HMDS (0,125 - 160 мм). Насадка готовая: хроматон
N-AW-DMCS (0,125 - 0,16 мм), содержащий 5% SE-30. Фазы неподвижные: фенилметилсиликоновое масло OV-17, трифторпропилметилсиликоновый
каучук OF-1. Стандартный раствор комманда в н-гексане с концентрацией 100 мкг/мл.
Приборы
и посуда. Аппарат
для встряхивания. Баня водяная.
Испаритель ротационный вакуумный.
Мельница электрическая.
Облучатель ртутно-кварцевый. Установка
компрессорная. Шкаф
сушильный. Воронки
химические. Камеры хроматографические. Колбы:
конические на
100 мл, грушевидные на 100 мл, мерные на 100 мл.
Микрошприцы
вместимостью 10 мкл, тип
МШ-1И. Микропипетки
вместимостью 0,1
мл. Пробирки мерные. Пульверизаторы стеклянные.
Цилиндры мерные. Фильтры "синяя лента".
Хроматограф газовый с ДЭЗ
("Цвет-106", "Кристалл-2000" и др.). Колонки хроматографические:
1) длиной
1 м, диаметром 3 мм, содержащая 5% SE-30 на хроматоне
N-AW-DMCS (0,12
- 0,16 мм);
2) длиной 2 м,
диаметром 3 мм,
содержащая 1,5% OV-17 + OF-1 на хроматоне
N-AW-HMDS (0,125 - 0,160
мм). Спектроденситометр для чтения тонкослойных хроматограмм
(типа
"Оптон"). Пластинки хроматографические "Силуфол"
УФ размером 20
254
x 20 см.
Ход анализа. Экстракция. Измельченную в порошок на электрической мельнице пробу (10 г)
помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 75 - 100 мл на шлифе,
заливают 20 - 25 мл н-гексана и непрерывно
перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. После отстаивания
экстракт отфильтровывают в грушевидную колбу вместимостью 75 - 100 мл на шлифе
через складчатый фильтр "синяя лента", содержащий безводный сульфат
натрия. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют, пробу количественно
переносят на фильтр и, ополоснув коническую колбу н-гексаном,
промывают растворителем (5 - 10 мл).
Объединенный экстракт концентрируют на
ротационном испарителе под вакуумом при 40 °C до объема 1 - 2 мл. Концентрат
тщательно переносят в мерную пробирку и при комнатной температуре упаривают в
токе азота особой чистоты до объема 0,1 - 0,2 мл.
Идентификация и
количественное определение комманда. При
определении методом ТСХ
аликвотные части экстракта (0,01
и 0,1
части конечного
объема) наносят при
помощи микрошприца или
микропипетки на хроматографическую
пластинку "Силуфол" УФ .
254
Рядом с пробой наносят различные количества
стандартного раствора
гербицида (по
0,5; 2 и 5 мкг). Пластинку помещают в камеру для
хроматографирования, содержащую подвижную фазу
(смесь н-гексана с
ацетоном в соотношении 4:1). Время насыщения камеры 30
мин. После
хроматографирования
(длина пробега 15
- 17 см)
пластинку
высушивают в
горизонтальном положении в вытяжном шкафу до удаления
запаха растворителя, а затем обрабатывают
проявляющим реагентом с
помощью
пульверизатора, подсоединенного к воздушному компрессору.
Зоны
локализации комманда на хроматограммах
проявляются после
облучения УФ-светом в виде серо-бурых пятен с величиной R 0,35.
f
Количество
комманда
в пробе оценивают
визуально или
денситометрически
на приборе типа
"Оптон". Оставшуюся
часть
экстракта при
необходимости также подвергают хроматографированию
по описанной
методике.
Для
идентификации и количественного определения
комманда
методом ТСХ
могут быть использованы также
пластинки
хроматографические:
пластинки для ВЭТСХ
(СССР), величина R
f
комманда 0,85; "Силуфол" -
0,35; "Алюграм" (ФРГ)
- 0,37;
"Полиграм" (ФРГ) - 0,38; "Кизельгель
60" F (ФРГ) - 0,43.
254
При определении комманда
методом ГЖХ анализ 5 мкл конечного гексанового экстракта проводят по одному из двух вариантов.
В варианте I используют хроматографическую колонку длиной 1 м, содержащую 5% SE-30.
Температура (°C): колонки - 190, детектора - 230, испарителя - 220. Скорость
потока газа-носителя (азота) через колонку 60 мл/мин., скорость потока азота на
продувку детектора 160 мл/мин. Время удерживания комманда
относительно альдрина 0,48, абсолютное время
удерживания 59 с.
В варианте II используют хроматографическую колонку длиной 2 м, содержащую 1,5%
OV-17 и 1,95% QF-1. Температура (°C): колонки - 190, детектора - 240,
испарителя - 220. Скорость потока газа-носителя (азота) через колонку 50
мл/мин., скорость потока азота на продувку детектора 160 мл/мин. Время
удерживания комманда относительно альдрина
0,68, абсолютное время удерживания 5 мин. 40 с.
Дополнительные способы идентификации комманда. Для повышения надежности идентификации комманда в пробе могут быть рекомендованы дополнительные
способы или их сочетание.
Перераспределение в системе н-гексан - концентрированная серная кислота. После проведения
ГЖХ-анализа по описанной методике к гексановому
экстракту в пробирке прибавляют 1 - 2 капли концентрированной серной кислоты.
Смесь перемешивают путем встряхивания; после разделения фаз из экстракта,
который находится над слоем кислоты, с помощью микрошприца
(аккуратно, не касаясь стенок пробирки и кислоты!) отбирают аликвоту
(5 мкл) и повторно анализируют в идентичных условиях.
Сравнение хроматограмм позволяет вычислить вклад комманда в сигнал детектора. Комманд
в результате обработки серной кислотой удаляется из раствора, а ХОП, в том
числе и имеющие близкое по величине время удерживания гамма-ГХЦГ, количественно
сохраняются.
Капиллярная газожидкостная хроматография.
Хроматограф газовый отечественного производства "Кристалл-2000",
снабженный диалого-вычислительным комплексом с
программным обеспечением и автоматической дозировкой жидких проб. Кварцевая
капиллярная хроматографическая колонка длиной 24 м с
внутренним диаметром 0,2 мм, неподвижная фаза OV-1. Температура (°C): колонки -
175, испарителя - 250, детектора - 250. Газ-носитель - азот, скорость потока
азота на колонку - 30 мл/мин., на поддув детектора - 20 мл/мин. В этих условиях обеспечивается
селективность определения комманда в присутствии ХОП,
производных циклопарафинов (изомеры ГХЦГ), диенового
синтеза (альдрин, гептахлор,
дильдрин), дифенилметанового
ряда (ДДТ, его 2,4'-изомер и метаболиты), основных компонентов смесей
родственных им полихлорированных бифенилов.
Время удерживания относительно альдрина 0,81.
Высокоэффективная жидкостная
хроматография. Хроматограф жидкостный микроколоночный
отечественного производства "Милихром",
детектор спектрофотометрический, лямбда = 200 нм. Микроколонка длиной 5 см с внутренним диаметром 2 мм,
неподвижная фаза "Силасорб 600", 5 мкм.
Элюент гептан или смесь гексана с ацетоном в объемном
соотношении 6:1. Скорость элюирования 200 мкл/мин.
Поддиапазон чувствительности 3,2 А, время измерения
0,6 с, скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч. В таких условиях
достигается избирательность определения в присутствии ХОП. Объем удерживания комманда 295 мкл.
Идентифицировать комманд
при газохроматографическом анализе можно с помощью азот-селективного
детектора, повышающего предел обнаружения препарата в пробе на порядок по
сравнению с ДЭЗ.
Обработка результатов анализа. Содержание
комманда в анализируемых объектах (X, мг/кг) при
определении методом ТСХ рассчитывают по формуле:
AV
2
X = ---,
V P
1
где:
A
- количество препарата,
обнаруженное в аликвоте экстракта,
взятой для хроматографирования,
мкг;
V
- объем аликвоты экстракта, нанесенной на
1
хроматографическую пластинку, мл;
V -
конечный объем экстракта, мл;
2
P - масса пробы, г.
Для количественной оценки результатов,
полученных методом ГЖХ,
используют
формулу:
H V
х 2
X = ----,
KV P
1
где:
H -
высота хроматографического пика комманда
в пробе, мм;
х
V
- объем аликвоты экстракта,
введенный в испаритель
1
хроматографа, мкл;
V -
конечный объем экстракта, мл;
2
P - масса пробы, взятой для анализа, г;
K
- калибровочный коэффициент,
рассчитанный из результатов
серии анализов
стандартного раствора по формуле:
H H H
1 1
2 n
K = - (-- + -- +
... + --),
n CV
CV
CV
где:
H - высота пика стандартного раствора, мм;
n - число проведенных анализов
стандартного раствора;
C - концентрация комманда
в стандартном растворе, нг/мкл;
V - объем стандартного раствора,
введенный в испаритель хроматографа, мкл.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими
растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.