Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
8 июня 1989 г. N 5009-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОПАЗА В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ,
ПОЧВЕ И ВОДЕ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Топаз
(CGA 71818) - 1-/2-(2,4-Дихлорфенил)пентил/-
1H-1,2,4-триазол. Белый
кристаллический порошок. Т.
пл. 60 °C.
Растворимость в
воде 70 мг/л, растворим в большинстве органических
растворителей. Предложен в
качестве фунгицида защитного и
искореняющего действия
для борьбы с мучнистой
росой, паршой,
ржавчиной, септориозом,
гнилью и др. в сельском хозяйстве.
ЛД
50
для крыс 2125
мг/кг.
Cl
_____/ C H Cl N .
Cl_//
\\__CH-CH -N-N 13 15 2 3
\ ___ / │
2 / \\
---
C H _H \\ /
М.м. 284,19.
3 7 N
2. Метод
определения топаза
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод
основан на определении
топаза газожидкостной и
тонкослойной хроматографией после извлечения его из анализируемой
пробы органическим
растворителем, из воды - хлороформом,
из
растений -
50-процентным водным ацетоном, из
почвы - смесью ацетона с
0,05 н CaCl (1:1) и дальнейшего
перераспределения между двумя
2
несмешивающимися
растворителями.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
ГЖХ
Минимально детектируемое количество 0,01 н
Чувствительность метода 0,005 мг/кг
Среднее значение определения 88,1%
Стандартное отклонение 2,2%
Доверительный интервал среднего, 83,1 +/- 2,2
p = 0,95 и n = 5
ТСХ
Минимально детектируемое количество 2 мкг
Чувствительность метода 0,1 - 0,5 мг/кг
Среднее значение определения 68%
Стандартное отклонение 4,6%
Доверительный интервал среднего, 68 +/- 4,6
p = 0,95 и n = 5
2.1.3. Избирательность метода
Определению могут мешать препараты из
группы триазолов.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-79.
Натрий хлористый, чда,
ГОСТ 4233-77.
Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.
5% XE-60 на хроматоне
N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм).
Стандартный раствор топаза в гексане с содержанием фунгицида 1 мкг/мл, срок хранения в
холодильнике 1 месяц.
ТСХ
Ацетон, ч, ГОСТ
2601-79.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Хлороформ, ч,
ГОСТ 20015-74.
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-3719-83.
Лимонная кислота, осч
6-4, ТУ 6-09-584-75, 2-процентный раствор.
Нитрат серебра, ч,
ГОСТ 1277-75.
Пластинки "Силуфол"
(Хемапол, ЧССР).
Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Подвижная фаза ацетон - хлороформ - 1:9.
Проявляющий реактив: А - 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона.
Раствор Б: 500
мг нитрата серебра растворяют в 20 мл воды и прибавляют 60 мл ацетона.
Растворы А и Б
сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки
БФС пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной или уксусной кислоты.
Стандартный раствор топаза, содержащий
100 мкг/мл, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе на 100 мл
ацетоном (гексаном). Хранят в холодильнике не более
2-х месяцев.
2.3. Посуда и
приборы
Аппарат для встряхивания колб АВУ-1, ТУ
64-11081-83.
Воронки делительные ВД, ГОСТ 25336-82.
Воронки химические, ГОСТ 25336-82.
Колонка хроматографическая
стеклянная (1000 мм x 3 мм).
Колбы конические со шлифами, ГОСТ
25336-82.
Колбы круглодонные ОНТ-50-14/32 ТС, ГОСТ
25336-82.
Газовый хроматограф с детектором
постоянной скорости рекомбинации (ДПР) или по захвату электронов (ДЭЗ).
Ротационный вакуумный испаритель ИР, ТУ
25-11-917-76.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Вата гигроскопическая.
Бумажные фильтры, ТУ 6-08-1678-77.
Холодильник бытовой.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Подготовка хроматографической
колонки для ГЖХ
Стеклянную колонку (1 м x 3 мм), промытую
органическими растворителями (ацетон:этиловый
спирт:петролейный эфир - 1:1:1), кондиционируют при
270 °C в течение 8 часов, скорость азота - 30 - 40 мл/мин.
2.4.2. Отбор проб и подготовка их к
анализу
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции,
продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем
Главного санитарного врача СССР 21.08.1979 г., N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
Метод ГЖХ
2.5.1. Экстракция топаза из проб
Вода. 500 мл воды помещают в делительную
воронку, добавляют 5 - 7 г хлористого натрия, хорошо перемешивают и топаз
экстрагируют 50 мл хлороформа. Смесь в течение 2 - 3 мин. осторожно
встряхивают. Экстракцию повторяют трижды. После разделения слоев хлороформный
экстракт сушат безводным сульфатом натрия. Концентрируют под вакуумом при
температуре не выше 50 °C до объема 1 - 2 мл. Растворитель полностью удаляют
струей инертного газа. К сухому остатку добавляют 1 мл гексана,
перемешивают. Аликвоту 3 - 5 мкл
вводят в хроматограф.
Почва.
20 г пробы помещают в коническую колбу (на 250 мл)
и
прибавляют 50 мл
смеси (1:1) ацетон - 0,05 н водный раствор CaCl .
2
Встряхивают 30
мин., отделяют фильтрат, а пробу экстрагируют еще
дважды смесью
растворителей. Объединяют фильтраты,
помещают в
морозильную
камеру на 1 час, затем фильтруют. Переносят экстракт в
делительную воронку,
прибавляют 5 г
хлорида натрия, хорошо
перемешивают и реэкстрагируют
топаз дважды по 25 - 30 мл гексана.
Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют
до объема 1 - 2
мл. Аликвоту вводят в хроматограф.
Растительные пробы. Растительную пробу
измельчают, отбирают для анализа навеску массой 20 г, помещают в коническую
колбу, заливают 100 мл 50-процентного водного ацетона. Встряхивают в течение 1
часа. Затем экстракт фильтруют через вату. Экстракцию повторяют трижды.
Объединенный раствор помещают в морозильную камеру на 1 час. Для удаления выпавших
хлопьев (или осадка) раствор фильтруют через бумажный фильтр. После окончания
фильтрации фильтр промывают 5 - 7 мл холодного 50-процентного ацетона.
Отфильтрованный раствор переносят в делительную воронку, прибавляют 5 г хлорида
натрия, хорошо перемешивают и реэкстрагируют топаз
трижды по 25 - 30 мл гексана. Объединяют гексановый экстракт, сушат безводным сульфатом натрия,
концентрируют до объема 1 - 2 мл при температуре не выше 40 - 60 °C. Аликвоту вводят в хроматограф.
2.5.2. Условия хроматографирования
Хроматограф марки "Цвет" или
аналогичный прибор с детектором ДПР (ДЭЗ).
Условия хроматографирования
при работе на ДПР (ДЭЗ):
температура колонки - 240 °C, испарителя
- 240 °C, детектора - 260 °C;
скорость газа-носителя (азота) - 40
мл/мин.
Хроматографическая колонка стеклянная размером 1000 x 3 мм, заполненная 5% SE-30 или 5%
XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм).
Время удерживания на фазе 5% SE-30 - 1 мин. 35 сек., на фазе 5% XE-60 1 мин. 20
сек. Линейность детектирования - 0,01 - 2,5 нг.
2.6. Обработка
результатов
Содержание топаза в анализируемой пробе
(X) в мг/кг или мг/л определяют методом соотношения со стандартом высот пиков и
рассчитывают по формуле:
H
x V x C x V
2 1
3
X = ----------------,
H x V
x P
1 2
где:
X - количество препарата в пробе, мг/кг или
мг/л;
C
- количество препарата в
стандартном растворе, введенном в
хроматограф,
мкг/мл;
H -
высота пика стандарта, мм;
1
H -
высота пика анализируемого раствора, мм;
2
V
- объем стандартного раствора, введенного в
хроматограф,
1
мкл;
V -
объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф,
2
мкл;
V -
объем анализируемой пробы, мл;
3
P - навеска пробы, г.
Метод ТСХ
2.6.1. Экстракцию и очистку проб воды,
почвы и растительного материала проводят таким же путем, как и в случаях ГЖХ.
Полученные экстракты выпаривают на
ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 - 50 °C до 0,3 - 0,5 мл.
2.6.2. Идентификация и количественное
определение топаза
Пробу, сконцентрированную до объема 0,3 -
0,5 мл, количественно наносят при помощи капилляра на хроматографическую
пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на
расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза
смывают порциями гексана, который также наносят в центр
пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартных растворов топаза,
содержащих 2 мкг, 5 мкг, 10 мкг препарата.
Пластинку хроматографируют
в системе хлороформ:ацетон (9:1).
После хроматографирования пластинку высушивают на воздухе, после
чего обрабатывают
из пульверизатора проявляющим реактивом БФС.
После высушивания
пластинку обесцвечивают раствором лимонной или
уксусной кислоты.
Топаз проявляется в виде пятна ярко-голубого
цвета на желтом
фоне. Величина R топаза = 0,45 +/- 0,05.
f
Содержание топаза в исследуемой пробе
вычисляют по формуле:
A
X = - мг/кг (мг/л),
P
где:
A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
P - навеска пробы в г
или мл.
3. Требования
безопасности
Выполняются в соответствии с
"Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях
(отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ
СССР" N 2455-81 от 20.10.81.